القياسات القائمة على المعاوقة لغزو خلايا سرطان الدماغ

الملخص

المصدر: Mudduluru, G., et . al. القياس في الوقت الفعلي القائم على المعاوقة لهجرة الخلايا السرطانية وغزوها. J. Vis. Exp. (2020)

يوضح هذا الفيديو فحصا قائما على المعاوقة لقياس غزو خلايا الورم الأرومي الدبقي وهجرتها. تتحلل الخلايا المصفوفة خارج الخلية ، وتتحرك عبر الأغشية الصغيرة التي يسهل اختراقها ، وتلتصق بأقطاب كهربائية ، مما يولد مقاومة. يعكس هذا التحليل في الوقت الفعلي إمكاناتها الغازية لتطبيقات أبحاث السرطان.

البروتوكول

1. preparation of real-real-cell analysis system, cell invasion and migration (CIM) plates, וخلايا U-118MG الكهربائية للطلاء

1. ضع نظام تحليل الخلية في الوقت الفعلي في نمط CO2 incubator under culture ظروف استزراع 5-6 ساعات قبل بدء التجربة لتثبيت النظام مع ظروف الثقافة.
2. ₂ incubator.
3. جدول المواد < نمط الامتداد = 'font-family: Arial ، sans-serif ؛ حجم الخط: 12pt ؛ نمط الخط: عادي ؛ متغير الخط: عادي ؛ وزن الخط: 400 ؛ زخرفة النص: لا شيء ؛ المحاذاة الرأسية: خط الأساس. المساحة البيضاء: التفاف مسبق ؛ >) لفتح تطبيق برمجيات النظام (وحدة التحكم). يحتوي كل حامل على نافذة فردية مع علامات تبويب مختلفة لتعيين الظروف التجريبية ، وقياس الفاصل الزمني والمدة لقياس المعاوقة ، وتحليل البيانات.
4. Layoutالجدول الزمني < نمط الامتداد = 'font-family: Arial ، sans-serif ؛ حجم الخط: 12pt ؛ نمط الخط: عادي ؛ متغير الخط: عادي ؛ وزن الخط: 400 ؛ زخرفة النص: لا شيء ؛ المحاذاة الرأسية: خط الأساس. المساحة البيضاء: التفاف مسبق ؛ علامة التبويب >. الخطوة الأولى هي لقياس خط الأساس لمرة واحدة (مسح واحد بفاصل 1 دقيقة) ، والخطوة الثانية هي قياس مقاومة الخلية في المهد الفردية المعنية لتجربة فعلية. للهجرة ، استخدم 145 عملية مسح بفاصل زمني مدته 10 دقائق ، وللغزو ، 577 عملية مسح بفاصل زمني مدته 10 دقائق ، يتم تعيينها بشكل فردي) في المهد الفردية المعنية.
5. MessageOK، فإن اللوحة الموجودة في المهد جاهزة للتجربة. style='لون الخلفية:شفاف;اللون:#1a202c;عائلة الخط:Arial,sans-serif;حجم الخط:12pt;نمط الخط:عادي;متغير الخط:عادي;وزن الخط:400;نوع نمط القائمة:عشري;زخرفة النص:لا شيء;محاذاة عمودي:خط الأساس;المسافة البيضاء:pre;' dir='ltr' aria-level='1'>احتضان الألواح المعبأة بالكامل في الحاضنة تحت ظروف الاستزراع لمدة ساعة واحدة قبل القياسات في مهد نظام تحليل الخلايا في الوقت الفعلي ، وهو أمر ضروري لتأقلم الصفيحة المعبأة مع ظروف زراعة الخلايا.
6. اغسل الخلايا التي تنمو في أطباق الاستزراع باستخدام 1x PBS وأضف 2 مل من 0.05٪ تريبسين EDTA (حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك). ضعها في الحاضنة لمدة 30 ثانية وقم بإزالة التربسين-EDTA. جمع الخلايا في low serum medium in 15 mL tube and count cells using the cell auto-counter محمول باليد.
7. g for 5 min وتخلص من المادة الطافية. style='لون الخلفية:شفاف;اللون:#1a202c;عائلة الخط:Arial,sans-serif;حجم الخط:12pt;نمط الخط:عادي;font-variant:عادي;font-weight:400;list-style-type:decimal;text-decoration:none;vertical-align:baseline;white-space:pre;' dir='ltr' aria-level='1'>2. Baseline Reading, seeding of the cells, and cell impedance and
   visualization
   1. قياس قراءة خط الأساس بالنقر فوق المهد Start button. يجب قراءة خط الأساس بعد احتضان الألواح مسبقا لمدة ساعة واحدة في مهد نظام تحليل الخلايا في الوقت الفعلي في ظل ظروف الاستزراع في حاضنة ثاني أكسيد الكربون وقبل بذر الخلايا في الآبار المعنية في الغرفة العلوية.
      NOTE: مرة واحدة المهدStart البدء يتم النقر فوق الزر مرة أخرى لقياس مقاومة الخلية في الخطوة الثانية.
   2. Data Analysisoptions مربعات للمتوسط والانحراف المعياري.
   3. Data Analysis نسخ البيانات إلى تنسيق القائمة< نمط span = 'font-family: Arial ، sans-serif; حجم الخط: 12pt ؛ نمط الخط: عادي ؛ متغير الخط: عادي ؛ وزن الخط: 400 ؛ زخرفة النص: لا شيء ؛ المحاذاة الرأسية: خط الأساس. المساحة البيضاء: التفاف مسبق ؛ >، والصق البيانات في جدول البيانات المفتوح.
   4. NOTE:Release زر في كل مهد.

المواد

< فئة الشكل = نمط "الجدول" = "العرض: 624 نقطة ؛ '><فئة الجدول = 'ck-table-ressize'>< col style = 'width: 28.69٪ ؛ '>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Biosafety cabinet < td style = 'width: 179pt ؛ '>ThermoFisher Scientific < td style = 'width: 145pt ؛ '> 1300 Series Class II ، النوع A2 < td style = 'العرض: 147pt ؛ '> CIM panelsCell Analysis Division of Agilent Technologies, Inc5665825001Cell invasion and migration platesDulbecco's modified eagle's medium (DMEM)ATCC302002 الثقافة المتوسطة المستخدمة للخلية ثقافة< نمط TD = 'الارتفاع: 14.5pt ؛ العرض: 153pt ؛ '>Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline (DPBS) < td style = 'width: 179pt ؛ '>Gibco < td style = 'width: 145pt ؛ '> 21-031-CVDPBS المستخدمة لغسل الخلايا < td style = 'الارتفاع: 14.5pt ؛ العرض: 153pt ؛ '>مصل الأبقار الجنيني (FBS) < td style = 'العرض: 179pt ؛ '>Hyclone < td style = 'width: 145pt ؛ '>SH30910.03 < td style = 'width: 147pt ؛ '> < td style = 'height: 14.5pt; العرض: 153pt ؛ ' >حاضنة ثاني أكسيد الكربون Heracell VIOS 160iThermoFisher Scientific51030285Carbon COoxide incubatorMatrigelBD Bioscience354234Extracell matrix gelRTCA softwareقسم تحليل الخلية في Agilent Technologies، Inc Instrument used for experimentScepterMilliporeC85360 Handheld Automatic cell counterTrypsin-EDTAGibco< td style='width:145pt;'>25300-054 U-118MGATCCATCC HTB15Cell lines المستخدمة في التجاربxCELLigence RTCA DPCell Analysis Division of Agilent Technologies, Inc380601050