تحريض ارتفاع ضغط العين في نموذج الفئران

الملخص

المصدر: Lani-Louzada، R.، et al. ، الكي الكامل للضفيرة الوعائية الحزوية للجلوكوما المستحثة جراحيا في القوارض. J. Vis. Exp. (2022)

يوضح هذا الفيديو تحريض ومراقبة ارتفاع ضغط العين (IOP) في نموذج الفئران. تتضمن العملية كي الأوعية الدموية القوفية ، مما يؤدي إلى انسداد الأوعية الدموية وارتفاع IOP. ثم يسمح للفئران بالتعافي ، ويتم مراقبة IOP بانتظام في كل من العيون التجريبية والعيون الضابطة للمقارنة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

في العمل الحالي ، تم استخدام فئران Lister Hooded من كلا الجنسين ، تتراوح أعمارها بين 2-3 أشهر ووزنها 180-320 جم. ومع ذلك ، يمكن تكييف الإجراء في سلالات الفئران المختلفة من مختلف الفئات العمرية.

جراحة ارتفاع ضغط الدم في العين والمتابعة السريرية

1. المنزلية في بيئة درجة حرارة مضبوطة ودورة ضوء/ظلام لمدة 12 ساعة (6 صباحا: ضوء مضاء/ 6 مساء: مطفأ الضوء) مع طعام قياسي محبب مشع بجاما (Nuvilab® CR-1 ، Quimtia S / A ، البرازيل) والماء (مرشح ثلاثي ، مع فحم نشط غير سام) متاح ad libitum.
2. قم بإعداد خليط كوكتيل مخدر يتكون من ثلاثة أجزاء من هيدروكلوريد الكيتامين بنسبة 10٪ وجزء واحد من هيدروكلوريد زيلازين 2٪ (مخفف: ماء معقم).
3. كبح جماح برفق عن طريق إمساك الجلد الظهري والحث على التخدير عن طريق إعطاء 1 ميكرولتر / غرام من وزن الجسم داخل الصفاق (الكيتامين: 75 مجم / كجم ؛ زيلازين: 5 مجم / كغ). تحقق من التخدير المناسب بعد حوالي 5 دقائق عن طريق إجراء استجابة قرصة إصبع القدم.
4. تخدير سطحي العين موضعيا عن طريق غرس بروكسي ميتاكائين هيدروكلوريد 0.5٪ قطرة للعين. انتظر لمدة 30-60 ثانية وقم بإزالة المحلول المتبقي من الجانب الأمامي للكرة الأرضية ، عن طريق لمس الملتحمة الأنفية أو الجانبية برفق باستخدام قطعة قطن صغيرة معقمة.
5. قم بقياس IOP الأساسي لكل من عيون التحكم التجريبية والمقابلة عن طريق وضع في وضع الاستلقاء البطني على سطح الطاولة بحيث يمكن الوصول بسهولة إلى سطح القرنية من طرف مقياس توتر العين.
6. استخدم إما مقياس توتر العين المحمول باليد أو الارتداد ( الشكل 1 أ ). ضع طرف مقياس توتر العين بحيث يلامس قليلا منطقة القرنية المركزية بشكل عمودي. احصل على 3-5 متوسطات موثوقة تم إنشاؤها آليا ومتوسطها. يتم حساب كل متوسط تلقائيا بواسطة الجهاز بعد ستة قياسات فردية ناجحة.
   1. قم بتحميل مقياس توتر العين الارتدادي بمسبار واضغط على زر القياس مرة واحدة لتشغيله ، مع وضع طرف الجهاز لأعلى لتجنب سقوط المسبار. بعد تشغيله ، ستعرض الشاشة 00 مما يشير إلى أن الجهاز جاهز للقياس.
   2. ضع الجهاز بطرف المسبار على بعد 1-4 مم من القرنية واحصل على القياسات بالضغط بسرعة وبعناية على زر القياس ، دون تحريك الجهاز. يتم تحديد كل مقياس ناجح من خلال صوت تنبيه قصير وبعد ست مرات ، يتم عرض المتوسط على شاشة الجهاز.
      ملاحظة: على الرغم من الخبرة الطويلة في مقياس توتر العين ، لتحسين الإجراء بأكمله ، يوصي المؤلفون باستخدام مقياس توتر العين الارتدادي ، والذي يوفر اكتسابا أسهل لقياس IOP الموثوق به.
7. ضع في وضع الاستلقاء الجانبي الطفيف تحت مجهر استريو ، وخطط للجراحة بعناية عن طريق فحص العين التجريبية بتكبير 40 ضعفا. لا تنس الحفاظ على ترطيب العين للتحكم المقابل أثناء العملية عن طريق غرس قطرة من الصوديوم الكرميلوز أو هيالورونات الصوديوم.
8. بمساعدة ملقط منحني ، ادفع مقلة العين التجريبية برفق للأمام لكشف الأوعية الدموية التي تحيط بزاوية 360 درجة من الأطراف. من ناحية أخرى ، قم بكي الأوعية الدموية برفق في جميع أنحاء القرنية باستخدام كي العين بدرجة حرارة منخفضة (1,300 درجة فهرنهايت ؛ Bovie Medical, USA) ( الشكل 1B-E).
   ملاحظة: يحتوي الكي المذكور على طرف دائري يجب أن يلمس الأوعية الدموية القزحية طوليا.
9. احرص على عدم كي محيط القرنية ، لأن هذا قد يؤدي إلى عتامة القرنية بعد الجراحة ، مما يمنع في الجسم الحي تقييم وظيفة الشبكية.
10. لاحظ ظهور علامات دائرية صغيرة من الكي على الأطراف الصلبة ، وطمس الأوعية الدموية الحزفية ، وتمدد حدقة العين في العين التي تم تشغيلها ، وهي علامات على نجاح عملية جراحية.
    ملاحظة: نظرا لأن الأوعية الدموية القزحية للفئران والفئران متشابهة تشريحيا وأن الكي المستخدم له طرف صغير لطيف ، يمكن أن يعمل هذا البروتوكول مع عين الفأر أيضا دون أي تكيف.
11. بعد الجراحة، تحقق من IOP بعد الجراحة مباشرة في كلتا العينين كما هو موضح في الخطوة 1.5.
12. ضع قطرة من أسيتات بريدنيزولون العينية (1.2 ملغم/مل) وحافظ على ملامستها للسطح الأمامي للعين التجريبية لمدة 40 ثانية تقريبا، ثم استبدلها بمرهم عيون من المضادات الحيوية (أوكسي تتراسيكلين هيدروكلوريد 30 ملغم/جم بالإضافة إلى بوليميكسين ب 10,000 ملغ/غرام؛ أو سيبروفلوكساسين 3.5 ملغ/غ). إجراء الحقن العضلي من ترامادول هيدروكلوريد (جرعة واحدة؛ 2 ملغ/كغ) لمنع الألم بعد العملية.

النتائج

الشكل 1: الكي الحراري للضفيرة الوعائية القصوية والنتائج على وظيفة الشبكية في الجسم الحي . (A ) طرق بديلة لقياس IOP في الفئران: قياس توتر العين الارتدادي (متفوق) ، وقياس توتر العين (أدنى). (B-E) إجراء جراحي؛ رأس السهم: الضفيرة الوعائية الحزوية. السهم: ملقط منحني يستخدم لفضح السطح الأمامي لمقلة العين وتحسين التقييم الجراحي للأوع...

المواد

<فئة الشكل = نمط الجدول = 'العرض: 872pt ؛ '><فئة الجدول = 'ck-table-ressize'> قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات < td style = 'height: 14.5pt ؛ '> cautery low temp fine tip 10 / bxBovie Medical CorporationAA00Low-Temperature Ophthalmic CauteryCetaminSyntec do Brasil Ltda000200-3-000003هيدروكلوريد الكيتامين 10٪EcofilmCristália Produtos Químicos Farmacêuticos LtdaMS-1.0298.0487Carmellose sodium 0.5٪HyabakUnião Química Farmacêutica Nacional S / AMS-8042140002هيالورونات الصوديوم 0.15٪Icare TonolabIcare فنلندا OyTV02 (رقم الموديل)مقياس توتر العين المحمول باليد الارتدادMaxifloxCristália Produtos Químicos Farmacêuticos LtdaMS-1.0298.0489Ciprofloxacin 3.5 mg / gSter MDUnião Química Farmacêutica Nacional S / AMS-1.0497.1287Prednisolone acetate 0.12٪TerolacCristália Produtos Químicos Farmacêuticos LtdaMS-1.0497.1286Ketorolac trometamol 0.5٪TerramicinaLaboratórios Pfizer LtdaMS-1.0216.0024أوكسي تتراسيكلين هيدروكلوريد 30 مجم / جم + بوليميكسين ب 10,000 U / gTono-Pen XLReichert Technologies230635 مقياس توتر العين الرقمي المحمول مجهر كارل زايس ستيريو للجراحة وتشريح الشبكية