إحداث حالات نقص الأكسجة ونقص التروية والالتهابات لنمذجة الاعتلال الدماغي في فئران ما قبل الولادة

الملخص

المصدر: Jantzie, L. L., et. al. نمذجة الاعتلال الدماغي للخداج باستخدام نقص الأكسجة ونقص التروية قبل الولادة مع عديد السكاريد الشحمي داخل السلى في الفئران. J. Vis. Exp. (2015)

يوضح هذا الفيديو بروتوكولا للحث على حالات نقص الأكسجين والحالات الالتهابية في فئران الجنين عن طريق تقييد تدفق الدم في الرحم وحقن LPS ، ونمذجة الالتهاب العصبي واضطراب نمو الدماغ ذي الصلة بدراسات الولادة المبكرة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. وضع مقاطع تمدد الأوعية الدموية

1. ضع مشبك تمدد الأوعية الدموية بوزن 30 جم على كل شريان رحمي. ضمان وقف تدفق الدم ، بما في ذلك النبضات القريبة والبعيدة ، وتغميق الأوعية الرحمية ، بما في ذلك المشيمة الفردية. قم بتغطية القرون المكشوفة والمجال الجراحي بالكامل بالشاش والري بمحلول ملحي معقم. قم بري الحقل كل 10 دقائق تقريبا للحفاظ على رطوبته.
2. بعد 60 دقيقة ، قم بإزالة الشاش وري الحقل. تأكد من ترطيب قرون الرحم وأوعية الرحم بشكل كاف لإزالة المشبك بنجاح. قم بإزالة كل مقطع تمدد الأوعية الدموية برفق باستخدام الملقط. احرص على عدم التسبب في صدمة للوعاء الدموي ، وحافظ على سلامة الأنسجة أثناء الإزالة.
3. قم بري قرون الرحم والحقل جيدا ، مع الحرص على إزالة أي خيوط شاش طائشة من الأكياس الأمنيوسية.

2. حقن عديد السكاريد الدهني في أكياس السلى

1. في قاعدة كل كيس يسوي فردي ، أمام صفيحة المشيمة مباشرة ، قم بحقن 100 ميكرولتر من عديد السكاريد الدهني (LPS) (4 ميكروغرام / كيس) مع صبغة إيفان الزرقاء المخففة في السائل الأمنيوسي. استخدم ملقطا غير حاد لتثبيت وتدوير كل كيس يسلي في الوضع الأمثل للحقن. صبغة ديليت إيفان الزرقاء هي عامل تباين مفيد في تأكيد وضع المحقنة والحقن بشكل صحيح.
   ملاحظة: استخدم فقط حقنة أنسولين فائقة النعومة 0.3 مل مع إبرة 8 مم 31 جم متصلة للحقن داخل السائل السلوي. سيؤدي استخدام إبر قياس أكبر إلى فقدان السائل الأمنيوسي المزمن وموت الجنين وإعادة امتصاص الحمل. يمكن تخفيف كميات صغيرة من تسرب السائل الأمنيوسي عند إزالة المحقنة عن طريق الضغط المباشر على الكيس الأمنيوسي. قد تتحمل بعض أجنة الفئران درجة من قلة السائل السلوي. ومع ذلك ، فإن فقدان السائل الأمنيوسي الحاد من ثقب بإبر كبيرة أو ثقب عرضي يؤدي إلى تسرب السوائل المزمن يؤدي إلى فقدان الجنين ، وفي الحالات الشديدة ، فقدان حالات الحمل المجاورة.
2. ري قرون الرحم 3x بمحلول ملحي معقم.

3. إغلاق شق البطن

1. باستخدام الملقط ، أعد قرون الرحم بعناية إلى التجويف البريتوني. لضمان مساحة كافية بين الأكياس السلوية وشق خط الوسط ، أعد تقريب حواف طبقة اللفافة العضلية باستخدام خياطة حريرية 3-0. كن على دراية بوضع الأكياس السلوية أثناء إغلاق شق العضلات. احرص على عدم الخياطة في الكيس أو من خلاله.
2. أعد تقريب طبقة الجلد ، باستخدام خياطة حريرية 3-0 ، وإغلاق طبقة الجلد.
   ملاحظة: يجب إغلاق شق البطن في طبقتين من الغرز المستمرة للسماح بتمدد الجلد والعضلات مع زيادة الحمل. تسمح الغرز المستمرة بتوتر الجرح الموزع بالتساوي. الغرز المتقطعة أقل رغبة لأن العقد المتعددة مزعجة ويمكن للفئران مضغها بسهولة عند التعافي من التخدير. الدبابيس الجراحية غير مرغوب فيها. يجب قطع ذيول العقد الجراحية قصيرة جدا (<3 مم).
3. حقن 1 مل من 0.125٪ بوبيفاكائين تحت الجلد حول حواف الجرح باستخدام إبرة 26 جرام. يجب تطبيق جرعة واحدة من 0.1 ملغم/كغ بوبرينورفين تحت الجلد في مؤخرة العنق.
4. قم بإيقاف تشغيل الأيزوفلوران وجفف الفئران بالمنشفة حسب الضرورة. ضع الجرذ في قفص منزلي نظيف وراقب تعافيه من التخدير. تأكد من أن الفئران لا تصاب بانخفاض حرارة الجسم.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
Saline Solution, 0.9٪	Sigma	S8776
LPS 011B4	Sigma	L2630
Evan's Blue Dye	Sigma	E2129
Surgical Gloves	Biogel	40870
Kent Scientific Corp.
Blunt Fallps	Roboz	RS-8100
Scissors	Roboz	RS-6808
Roboz	RS-5880
Surgical Scissors	FST<
syringe	BD	309628	1 ml
Needle	BD	305122	25G 5/8
Needle	BD	305128	30G 1
أدوات التطبيق ذات الرأس القطني	23-400-114	small, 6 inch sterile
Cotton Gauze Sponge	Fisherbrand	22-362-178
Needle	Kent Scientific كورب.	INS600109	12.5 cm STR
Vessel Clips	Kent Scientific Corp.	30G Pressure
3-0 Perma Hand Silk Stitches	Ethicon	1684G	black braided, 3-0 (2 metric), 18", nonable pertable, PS-1 24mm need, 3/8 circle
Insulin Syringes	BD	0.3cc 3mm 31G