$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
1. تجميع النظارات للفئران
- تحضير الأجزاء اللازمة لتجميع النظارات (الشكل 1 أ). لكل ماوس ، قم بإعداد كل ما يلي: عصا نايلون مثبتة على الرأس ، وإطار أعلى وآخر أسفل من التيتانيوم ، وعدستان بقوى مناسبة وفقا للغرض من التجربة ، وبرغي بحجم M1.4 بطول 10 مم ، وصمولة واحدة لبرغي بحجم M1.4 ، وغسالة عادية واحدة لبرغي بحجم M1.4 بسمك 0.3 مم ، واثنين من أطراف الأظافر الاصطناعية. ملاحظة: يوجد نوعان من الإطارات بارتفاعات مختلفة. بالنسبة لماوس واحد ، يتم استخدام إطار أعلى وإطار سفلي كمجموعة. يجب وضع إطارات أعلى فوق الإطارات السفلية لجعل مجالات الرؤية متماثلة. تم تصميم الإطارات والعدسات وتصنيعها خصيصا من قبل مجموعة أبحاث المؤلفين. هذه متاحة عن طريق الاتصال بالمؤلفين المراسلين لهذه المقالة. يمكن العثور على أجزاء أخرى في متاجر أدوات البيع بالتجزئة.
- قم بتجميع إطار العين اليمنى واليسرى بشكل منفصل.
- رتب طرف الظفر لمواجهة الاتجاه الخارجي لتحقيق أفضل تأثير وقائي. اضبط الزاوية بين طرف الظفر والإطار لتكون حوالي 130 درجة لتجنب إخفاء مجال رؤية الماوس (الشكل 1 ب). قم بلصق أطراف الأظافر الاصطناعية بالإطار باستخدام مادة لاصقة cyanoacrylate.
NOTE: يمكن أن تساعد أطراف الأظافر في حماية العدسة من الخدش بواسطة الماوس. يجب أن يكون اتجاه أطراف الأظافر معاكسا لأن الإطار الأعلى والإطار السفلي يستخدمان للعين اليمنى والعين اليسرى ، على التوالي. - انتظر لمدة 12 ساعة على الأقل للسماح للمادة اللاصقة بالجفاف تماما ، ثم استخدم مقص الأظافر لضبط شكل أطراف الأظافر ليكون حوالي 1 سم × 1 سم عن طريق القص والتشذيب.
- قم بلصق العدسة بالإطار باستخدام مادة لاصقة cyanoacrylate. ضع العدسة على الإطار يدويا وأمسك الإطار أفقيا. قم بحقن مادة لاصقة cyanoacrylate من حافة العدسة واترك المادة اللاصقة تنتشر عن طريق التوتر السطحي.
NOTE: ستؤدي المادة اللاصقة إلى تآكل العدسة والتأثير على شفافيتها ، لذا تأكد من أن المادة اللاصقة تلامس الجزء المحيطي من العدسة فقط. استخدم عدسة بلانو 0 ديوبتر (D) كعنصر تحكم وناقص عدسة للحث على قصر النظر. تم وصف تأثير القوى المختلفة للعدسات الناقص (-10 D إلى -50 D) في مكان آخر4. لتعظيم إحداث قصر النظر ، يوصى باستخدام عدسة -30 D لإحداث قصر النظر. يمكن أيضا تحفيز FDM بنفس الجهاز ببساطة عن طريق تغيير العدسة إلى غطاء الأنبوب الدقيق سعة 1.5 مل كناشر.
- ربط المسمار في عصا النايلون مع الغسالة من الجانب المسطح من العصا. قم بإعداد النظارات والعصي قبل التجربة على التوالي وقم بتخزينها لاستخدامها مرة أخرى (الشكل 1 ج).
ملاحظة: يمكن إيقاف البروتوكول مؤقتا هنا.
2. تثبيت الإطار على جمجمة الماوس.
- ضع قطرة واحدة من قطرة العين هيالورونات الصوديوم المنقى بنسبة 0.1٪ لمنع جفاف كل عين.
NOTE: ستؤثر قطرات العين على سطح العين على قيم قياسات الانكسار والطول المحوري. لا تستخدم قطرة العين بعد التخدير حتى يتم الانتهاء من جميع القياسات. - ضع ذقن الفأر المخدر على منحدر مصنوع من الطين أو أي شيء يمكن استخدامه كوسادة لجعل المستوى الأمامي للجمجمة أفقيا.
- عقيم الشعر وفروة الرأس بين الأذنين والعينين باستخدام قطعة قطن تحتوي على 70٪ من الإيثانول.
- اقطع الجلد بين الأذنين والعينين لكشف الجمجمة لمدة 0.8 sq.cm تقريبا باستخدام المقص الجراحي والملاقط. استخدم سائل نقش الأسنان وقطعة قطن لإزالة السمحاق. تعقيم المقص والملاقط الجراحية بنسبة 70٪ من الإيثانول قبل جراحة كل فأر.
NOTE: قد تكون هناك حاجة إلى قص الشعر وارتداء قفازات معقمة. تحقق من أحكام لجنة رعاية ذات الصلة قبل هذا الإجراء. في معظم الحالات ، يكون سائل نقش الأسنان أحد المرفقات في نظام لاصق الأسنان ذاتي العلاج. إذا لم يكن سائل نقش الأسنان متاحا ، فاستخدم 70٪ من الإيثانول بدلا من ذلك. - قم بتجميع مجموعة من الإطارات بدون عدسة للمساعدة في تثبيت العصا في الموضع الصحيح. ضع الإطارات على رأس الماوس. اضبط موضع الإطارات بعناية للتأكد من أن كلتا العينين في منتصف الإطار الفارغ.
- استخدم نظاما لاصقا للأسنان ذاتي المعالجة لربط العصا برأس الماوس. احرص على عدم ترك سائل نظام الالتصاق يتدفق إلى عين الفأر.
ملاحظة: تختلف طريقة استخدام نظام لاصق الأسنان ذاتي المعالجة بين المنتجات. راجع التعليمات بعناية.
تنبيه: قد تكون بعض الكواشف في نظام لاصق الأسنان سامة. - انتظر لمدة 5 دقائق تقريبا وانزع الإطار والجوز بعناية دون تغيير موضع العصا (الشكل 2 أ).
- حقن 0.75 ملغ/كغ من هيدروكلوريد أتيبامزول داخل الصفاق لمساعدة الفأر على التعافي من التخدير بسرعة أكبر. ضع الماوس في قفص فردي حتى يتعافى تماما. لا تترك الفأر دون رقابة حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الاستلقاء القصي. يمكن إيقاف البروتوكول مؤقتا هنا.
3. بدء تحريض قصر النظر والصيانة بعد ذلك
- انتظر لمدة 24 ساعة على الأقل بعد الجراحة للسماح للفأر بالتعافي من التخدير تماما. أمسك العصا ووضعت على الإطارات مع العدسات. يبدأ الإغراء في هذه المرحلة الزمنية (الشكل 2 ب).
NOTE: لتقليل الانزعاج أثناء التعافي من التخدير وإعطاء الوقت الكافي لتخثر نظام لاصق الأسنان ، يوصى بشدة بوضعه على الإطار بعد أن تتعافى الفئران تماما من التخدير. سيغطي الأسمنت الراتنجي للنظام اللاصق قطع فروة الرأس بالكامل. لذلك ، ليست هناك حاجة إلى علاج محدد بعد الجراحة لمنع العدوى وتخفيف آلام ما بعد الجراحة. مباشرة بعد وضع الإطار لأول مرة ، ستكون الفئران مفرطة في الوعي بوجود العدسة وتخدشها كثيرا. سيعود السلوك الإجمالي إلى طبيعته بعد بضع ساعات. يمكن الاحتفاظ بالفئران ذات العدسات بنفس كثافة الفئران العادية. - قم بإزالة الإطار وتنظيف العدسات وأطراف الأظافر بمسحات قطنية مرتين على الأقل في الأسبوع للحفاظ على شفافية العدسة.
NOTE: ليس من الضروري وضع الماوس تحت التخدير لإزالة الإطار ووضعه. يمكن أن يؤدي توفير الدعم للفئران للجلوس عليها ، بدلا من تعليقها أثناء العمل معها ، إلى تقليل الضيق.- if كان القياس المؤقت ضروريا، ضع الماوس تحت التخدير وقم بقياس الماوس كما هو موضح سابقا. يمكن أن يستمر الإغراء بعد تعافي الفأر من التخدير.
- نظف القفص مرتين على الأقل في الأسبوع.
NOTE: يساعد هذا في الحفاظ على وضوح العدسة. قد يكون من المفيد أيضا وضع شبكة بين الفأر وقاع القفص لترشيح بقايا الطعام. - مراقبة وزن الجسم والسلوك الإجمالي. قارنها بالفئران التي لم تمسها نفس العمر خلال العملية التجريبية بأكملها.
NOTE: باستثناء بعض سلوكيات الخدش، لم يتم العثور على تغيير كبير، بما في ذلك وزن الجسم، بين الفئران التي أجريت على الفئران غير المعالجة.
