إحداث كدمة في الحبل الشوكي في نموذج فأر باستخدام منصة متحدة المحور لإصابة الحبل الشوكي

الملخص

المصدر: Elzat، E.Y.Y.، وآخرون، إنشاء نموذج إصابة الحبل الشوكي لكدمة الفئران بناء على تقنية طفيفة التوغل. J. Vis. Exp. (2022).

يوضح هذا الفيديو طريقة إحداث إصابة كدمة على مستوى T9 في نموذج فأر ، باستخدام منصة متحدة المحور لإصابة الحبل الشوكي. يتم إسقاط الوزن على الحبل الشوكي على مستوى T9 مما يؤدي إلى كدمة تسبب على الفور تغير لون الأنسجة وتورمها.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. تحديد موقع واستئصال الصفيحة الفقرية للفقرة الصدرية التاسعة (T9)

< p style = 'text-align: justify;'> ملاحظة: تم شراء إناث الفئران C57BL / 6J التي تتراوح أعمارها بين 9 و 10 أسابيع من شركة Jinan Pengyue Experimental Animal Company (جينان ، الصين).

1. الأوتوكلاف مجموعة من الأدوات الجراحية للتجربة وتعقيم طاولة العمليات بالكحول بنسبة 75٪ قبل الجراحة.
2. حقن البوبرينورفين للتسكين (0.05-2.0 ملغم/كغ، تحت الجلد) قبل 30 دقيقة من التخدير لعمليات الإصابة. ثم قم بتخدير الفأر بالأيزوفلوران (الحث: ~ 3-5٪ ، الصيانة: ~ 1.5-2٪). تحقق مما إذا كان مخدرا تماما عن طريق ردود أفعال قرص الذيل أو إصبع القدم. بمجرد أن يبدأ التخدير حيز التنفيذ ، ضع الفأر في وضع الانبطاح في جزء مخصص من طاولة العمليات وقم بتغطية القرنية بمرهم للعيون (ضع مرهم العيون على القرنيات لحماية العينين من الجفاف أثناء الجراحة).
   1. احلق الشعر من الذيلية إلى المنقارية باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية فوق العمود الفقري الصدري القطني. تعقيم الجلد عدة مرات بحركة دائرية باستخدام اليودوفور لمدة 30 ثانية ، متبوعا بالكحول بنسبة 75٪. ضع ستارة جراحية معقمة وقم بعمل شق طولي يبلغ حوالي 1.5 سم على الجلد من الفقرة الصدرية السادسة تقريبا (T6) إلى الفقرة الصدرية 13 (T13) بمشرط وشفرة.
      ملاحظة: ملامسة على طول الهامش الساحلي إلى خط الوسط, حيث 12 الفقرة الصدرية 12 (T12) - T13 الفضاء بين الشوكي. قم بعمل شق 1.5 سم في المنخرطة ، ويكون الشق متدفقا تقريبا مع فقرات T6-T13.
3. استكشف الضلع 13 على جانب واحد من الجزء العظمي تحت مجهر التشغيل. استكشف العملية الشائكة في خط الوسط عن طريق لمس منطقة الزاوية الفاصلة ثم باتجاه المنقار لتحديد المساحة بين الشوك ل T12-T13. استكشف المساحة الفاصلة للفقرة^{الصدرية} T9 - 10 (T10) من مساحة T12-T13 إلى الجانب المنقاري. (الشكل 1 أ ، 2 أ)
4. قم بتشريح العضلة المجاورة الشوكية على طول العملية الشائكة ل T9 إلى مفاصل الوجه الأمامية والخلفية لكلا الجانبين باستخدام مقص دقيق (الشكل 2 ب). اسحب العضلات المجاورة الشوكية باستخدام ضاغطات دقيقة ونظف الأنسجة الرخوة على الصفيحة وفي الفضاء بين الشوك للفقرة الصدرية الثامنة (T8) - T9 و T9-T10 بمقص صغير.
5. قم بإجراء استئصال الصفيحة الفقرية T9 ، وقم بتثبيت العملية الشائكة ل T9 باستخدام ملقط الجراحة المجهرية ، وارفعها قليلا ، وأدخل المقص الدقيق بالتوازي على طول الجانب الظهري الأيمن من الصفيحة ، وتجنب تلف الحبل الشوكي ، وقطع الصفيحة بمقص صغير. كرر على الجانب الأيسر ، ويمكن أن ينكشف الحبل الشوكي (الشكل 1 ب ، 2 ج).
6. قبل تثبيت الفقرة، قم بفك الذراع العالمية وقم بتثبيت المفاصل الجانبية من 9 إلى 10 ببطء على جانبي الفقرة باستخدام ملقط البعوض الصغير لمثبت العمود الفقري. شد البراغي على ملقط البعوض الصغير ، وبالتالي يتم تثبيت الفقرة. اضبط الحبل الشوكي على المستوى الأفقي ، وشد الذراع العام ، وقم بإصلاح الفقرة (الشكل 2 د).

<نمط الامتداد = 'لون الخلفية: شفاف ؛ اللون: # 000000 ؛ '>2. إصابة كدمة T9

بمجرد تعرض الحبل الشوكي على مستوى T9 وتثبيت الفقرة، استهدف الحبل الشوكي من الطرف الموجود داخل الكم تحت مجهري التشغيل (الشكل 2E).

2. تحقق مما إذا كان سطح الطرف موازيا للحبل الشوكي من الجوانب الخلفية والجانبية للحبل الشوكي حيث أنه من السهل ملاحظة العلاقة بين الحبل الشوكي والطرف تحت المجهر، ويمكن قلب طاولة العمليات بسهولة.
3. تحقق مما إذا كان سطح الطرف موازيا للحدود الثنائية للصفيحة المحفوظة قبل أن يتلامس الطرف مع الحبل الشوكي بعد استئصال الصفيحة الفقرية لأنه مستوى مرجعي طبيعي مواز للحبل الشوكي.
4. بعد تحديد موقع المساحة بين الشوك ل T12-T13 ، اخفض الغلاف حتى تكون نهاية الأداة متوافقة مع العلامة الموجودة على نافذة المراقبة ويتم الوصول إلى الارتفاع المحدد البالغ 22 مم. اسحب دبوس السحب للخارج لتحرير الوزن (1.3 جم أو 2.0 جم أو 2.7 جم وفقا للمجموعة ، حيث تضم كل مجموعة 3 فئران ولكل مجموعة فأر واحد لكل نقطة زمنية).
   ملاحظة: يجب أن يكون الحبل الشوكي موازيا للأرض وعموديا على الحافة؛ حرك طاولة العمليات لضمان المجال البصري المجهري، لأن الطاولة مضغوطة للغاية.
5. قم بإزالة الاصطدام عند الانتهاء من الكدمة ولاحظ درجة إصابة الحبل الشوكي (SCI) تحت مجهر التشغيل. في المجموعة الخفيفة ، يمكن رؤية تغيير في اللون الأحمر الفاتح ، بينما في المجموعة المعتدلة ، يظهر موقع الإصابة أحمر داكن في 3-4 ثوان ، وربما يمكن ملاحظة الشهرة. في المجموعة الشديدة ، قد تظهر المظاهر الحمراء الداكنة على الفور ، وتتجلى البروز الواضح في الجافية ، لكن الجافية لا تزال في شكل ثابت (الشكل 2F).

النتائج

الشكل 1. رسم بياني تصويري لطريقة تحديد موقع الفقرات الضلعية T13. (أ)^الضلع 13 و T13 عبارة عن هياكل تشريحية ثابتة نسبيا. يمكن اكتشاف زاوية T13 بسهولة تحت المجهر ، والتي يمكن للمشغل من خلالها التحقيق نحو العملية الشائكة والعثور على الفضاء بين الشوك T12-T13. بعد ذلك ، قم بالتحقيق باتجاه الجانب المنقاري على التوالي للعثور ...

المواد

<فئة الشكل = نمط "الجدول" = "العرض: 914pt;'> device < td style = 'width: 278pt ؛ '> مقص العيون ، ملقط البعوض الصغير ، ملقط الجراحة المجهرية ، مقص دقيق < td style = 'الارتفاع: 15.5pt ؛ العرض: 260pt ؛ '>محطة التخدير الاستنشاقية المختبرية RWD < td style = 'width: 223pt ؛ '>RWD Life Science Co., Ltd < td style = 'width: 153pt ؛ '>R550 < td style = 'width: 278pt ؛ '>

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
Ethanol	Fuyu Reagent	64-17-5
المجهر الفلوري	KEYENCE	BZ-X800
Mîs	Jinan Pengyue Experimental AnimalCompany	C57BL / 6J
-microsurgery	Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd	جميع أدوات الجراحة مصنوعة حسب الطلب
صغير في الجسم الحي نظام التصوير المصغر	PerkinElmer	Quantum GX2
Spinal Injury Cell Axial Platform	Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd	Custom-made (Feng's standard)	(https://shop43957633.m.youzan.com/wscgoods/detail/367x5ovgn69q18g?banner_id=f.81386274~goods.7~1~ b0yRFKOq&alg_ id=0&slg=tagGood List-default٪2COpBottom٪2Cuuid ٪2CabTraceId&components_style_ layout=1&reft=1659409105184&sp m=g.930111970_f.. 81386274 &Alis = 367x5ovgn69q18g &from_uuid = 136 2cc46-ffe0-6886-2c65-01903dbacbb a&sf=qq_sm&is_share=1&shopAuto Enter = 1&share_cmpt=native_ wechat&is_silence_auth=1)