تلطيخ المناعة للخلايا العصبية في شرائح دماغ الفأر بعد التهجين الموضعي

الملخص

المصدر: Baleriola, J., et . al. ، الكشف عن mRNAs المترجمة محوريا في أقسام الدماغ باستخدام التهجين في الموقع عالي الدقة. J. Vis. Exp. (2015)

يوضح هذا الفيديو اكتشاف mRNA داخل المحاور الكولينية في شرائح الحصين الثابتة للفأر باستخدام تهجين الفلورسنت في الموقع وتلوين الأجسام المضادة. يكشف المجهر الفلوري عن التوطين المكاني ل mRNAs الموسومة بالمسبار وأستيل ترانسفيراز الكولين في الخلايا العصبية كولينية.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات من والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

1. مقايسة FISH متبوعة بالكيمياء المناعية باستخدام مستضد / RNA الناجم عن الحرارة
   1. قبل البدء ، قم بإعداد جميع المواد المطلوبة:
      1. سخني فرن التهجين إلى 40 درجة مئوية وضعي صينية تحتوي على ماء مقطر في الفرن لخلق بيئة رطبة. <....

المواد

<فئة الشكل = نمط الجدول = 'العرض: 540 نقطة ؛ '><فئة الجدول = 'ck-table-ressize'>< col style = 'width: 26.3٪ ؛ '>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات مسبار مخصص يستهدف المخلفات 20-1381 من الماوس Atf4 mRNA (NM_009716) < td style = 'width: 139pt ؛ '> Advanced Cell Diagnostics < td style = 'width: 114pt ؛ '>-< td style = 'width: 142pt ؛ '> probeمسبار مخصص يستهدف المخلفات 15-1256 من ATF4 mRNA البشري (NM_001675.2)Advanced Cell Diagnostics-ProbeNegative control probe-DapBAdvanced Cell Diagnostics310043 Probe< td style='height::29.0pt ؛ العرض: 145pt ؛ '> مسبار التحكم الإيجابي Polr2A (اختياري) < td style = 'width: 139pt ؛ '>Advanced Cell Diagnostics < td style = 'text-align: right; width: 114pt ؛ '>312471 Probe الماعز متعدد النسيلة المضاد للجسم المضاد ل ChAT < td style = 'العرض: 139pt ؛ '>Millipore < td style = 'width: 114pt ؛ '>AB144P < td style = 'width: 142pt ؛ '> < td style = 'الارتفاع: 29.0pt ؛ العرض: 145pt ؛ ' >وسيط تركيب ProLong Gold مع نمط DAPILife Technologies < td style = 'width: 114pt ؛ '>P36935 < td style = 'width: 142pt ؛ '> < td style = 'height: 43.5pt ؛ width: 145pt ؛ '> RNAscope Fluorescent Multi Reagent Recode Kit (للكشف عن التألق ) < td style = 'width: 139pt ؛ '>Advanced Cell Diagnostics < td style = 'width: 114pt ؛ '> 320850 < td style = 'width: 142pt ؛ '> in situ situ hybrid kit