نمذجة تجديد المحور العصبي الحسي في الفئران باستخدام حقن عقدة الجذر الظهري وإصابة سحق الجذر الظهري

الملخص

المصدر: Cheah, M., et al. حقن العقدة الجذرية الظهرية وإصابة سحق الجذر الظهري كنموذج لتجديد المحور العصبي الحسي. J. Vis. Exp. (2017).

يوضح هذا الفيديو إجراء خطوة بخطوة لحقن معلق فيروسي في العقد الجذرية الظهرية (DRGs) وإحداث إصابة محورية خاضعة للرقابة عن طريق سحق الجذر الظهري في فأر مخدر. يتضمن البروتوكول تعريض DRGs ، وتقديم ناقل فيروسي معزز للنمو لتسهيل التجديد المحوري ، وقطع الوصلات المحورية بالحبل الشوكي لنمذجة إصابة الأعصاب الحسية وتجديدها.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. حقن DRG وإجراء إصابة سحق الجذر الظهري

ملاحظة: هذه عملية جراحية حساسة للغاية. ينصح بالتدرب على عدد قليل من النافقة أولا للتعرف على علم التشريح قبل التقدم إلى جراحة الحية.

1. حدد موقع العمليات الشوكية البارزة C2 و T2 على الجلد. قم بعمل شق جلدي بين العمليات الشائكة C2 و T2 بشفرة مشرط رقم 10 (بمجرد فتح الجلد ، يجب أن يكون خط الوسط الأبيض الليفي مرئيا على الطبقة الأولى من العضلات ؛ الطبقة الأولى من العضلات لها نسيج "يشبه الهلام").
2. قم بعمل شق مماثل الحجم على الطبقة الأولى من العضلات على طول خط الوسط الأبيض باستخدام شفرة مشرط. لا تتجاوز العملية الشائكة T2 البارزة ، حيث يوجد فرع شرياني رئيسي من الشريان الأورطي الهابط يقع بالقرب من هناك.
   ملاحظة: يمكن أن يحدث نزيف حاد في أي مكان من هذه الخطوة فصاعدا. أوقف النزيف دائما وقم بإزالة الدم باستخدام أعواد قطنية معقمة أو إسفنج جراحي قابل للامتصاص للسماح بالرؤية الواضحة في جميع الأوقات. قد يؤدي المضي قدما في الإجراء "بشكل أعمى" إلى تلف غير مرغوب فيه للحبل الشوكي أو DRG أو الجذر الظهري ، مما يؤدي إلى آثار ضارة غير متوقعة على لاحقا.
3. سحب الطبقة الأولى من العضلات باستخدام اثنين من الضاعات, واحد وضعت rostrally والآخر ذيلي; يجب أن تكون الطبقة الثانية من العضلات ، ذات المظهر المخطط ، مرئية.
4. حدد موقع خط الوسط للطبقة الثانية من العضلات (حيث يمكن ملاحظة عضلتين طوليتين متصلتين بنسيج غشائي رقيق). قم بتشريح الأنسجة الغشائية باستخدام زوج من المقصات الدقيقة لفصل العضلات الطولية. تجنب استخدام شفرة مشرط إن أمكن ، فقد يؤدي ذلك إلى تلف العضلات والنزيف غير الضروري.
5. اضبط المباعدات وفقا لذلك لفضح الطبقة الثالثة من العضلات الرقيقة التي تغطي العمود الفقري. يمكن الشعور بالعمليات الشائكة عن طريق اللمس برفق باستخدام زوج من الملقط فوق الطبقة الثالثة من العضلات.
6. قم بعمل شق صغير على الطبقة الثالثة من العضلات باستخدام مقص دقيق واكشط العضلات برفق من العظم باستخدام مكشطة أو مشرط بطريقة جانبية لكشف الفقرات بوضوح. إذا لزم الأمر ، قم بقطع بعض العضلات أو الأوتار لتسهيل استئصال الصفيحة الفقرية.
7. لفضح C5 - C8 DRGs اليسرى ، قم بإجراء استئصال الصفيحة الصفيحية اليسرى على الفقرات C4 - T1 عن طريق إزالة جزء من الصفيحة والعنيق بعناية باستخدام زوج من الرونجور الدقيقة. يقع DRG بالقرب من الثقبة المستعرضة للفقرات.
   ملاحظة: لا تحتوي فقرات C3 - C7 على عملية شوكية بارزة. يقع C5 DRG بين الفقرات C4 و C5 ، ويقع C6 DRG بين الفقرات C5 و C6 ، وهكذا ، بينما يقع C8 DRG بين الفقرات C7 و T1. لا توجد فقرة C8 ، على الرغم من وجود C8 DRG وجزء من الحبل الشوكي C8.
8. بمجرد أن يتم الكشف عن ما يكفي من DRG للحقن ، قم بإعداد المحقنة عن طريق وضع حقنة الميكرولتر المملوءة بالفيروسات والمزودة بإبرة حادة عيار 33 حسب الطلب على حامل الحقنة التجسيمية. قبل الحقن ، استخدم إبرة مشطوفة قياس 30 لعمل فتحة سطحية صغيرة على كل من DRG المستهدفة للمساعدة في إدخال إبرة الحقن.
9. أدخل الإبرة قياس 33 في وسط DRG عن طريق تدوير المقابض برفق لضبط الإحداثيات التجسيمية. لا تفرط في إدخال الإبرة ، فقد يتسبب ذلك في تسرب السوائل من الجانب البطني من DRG. في حالة حدوث تسرب ، اضبط موضع الإبرة على الفور.
   ملاحظة: لا يتم استخدام الإحداثيات التجسيمية الرقمية. ومع ذلك ، من المفيد استخدام الإطار لحمل الإبرة للحقن.
10. حقن 1 ميكرولتر من الفيروس في كل DRG بمعدل 0.2 ميكرولتر / دقيقة باستخدام مضخة حقنة التسريب. انتظر لمدة ثلاث دقائق إضافية قبل سحب الإبرة. أثناء الحقن ، سيتغير لون DRG ببطء إذا كان محلول الفيروس يحتوي على صبغة ملونة.
11. لأداء إصابة سحق الجذر الظهري المتزامنة C5 - C8 ، سحق كل جذر ثلاث مرات لمدة 10 ثوان لكل منها باستخدام زوج من الملقط ذي الرؤوس الدقيقة (Bonn Micro) ، مع معارضة نهايات الملقط تماما ؛ يجب أن يظهر خط أبيض في الأنسجة في موقع السحق. لا تذهب أعمق من المطلوب باستخدام الملقط ، فقد يتسبب ذلك في تلف الجذر البطني.

المواد

< فئة الشكل = نمط الجدول: "العرض: 724pt ؛ '>< فئة الجدول = 'ck-table-ressize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Fast Green FCF dye < td style = 'border-left-style: none ؛ border-top-style: none ؛ width: 172pt ؛ '>Sigma-AldrichF7258لتصور الحل عديم اللون. التركيز الموصى به: 1٪ حامل إبرة Olsen-Hegar < td style = 'border-left-style: none ؛ border-top-style: none ؛ width: 172pt ؛ '>Fine Science Tools < td style = 'border-left-style: none ؛ border-top-style: none ؛ width: 172pt ؛ '>FST 12502-12 < td style = 'border-left-style: none ؛ border-top-style: none ؛ width: 172pt ؛ '> فريدمان بيرسون رونجر منحني 0.7 مم كوب< td style='border-left-style: لا شيء؛ border-top-style: none؛ width: 172pt;'>Fine Science ToolsFST 16121-14 Bonn Micro FallpsFine Science ToolsFST 11083-07for perform the vers-top-scars Tissue Separating Engine ScissorsFine Science ToolsFST 14072-10 Fine ScissorsFine Science ToolsFST 14058-11 Micro-Adson SoftpsFine Science ToolsFST 11018-12 Goldstein RetractorFine Science ToolsFST 17003-03 Vannas Spring Scissors (مستقيم)Fine Science ToolsFST 15018-10 SURGIFOAM Absorbable Gelatin SpongeEthicon1972for ControlMicroliter Syringe RN701 (10 μl)Hamilton80330 Custom-made Removal Needle (لحقن DRG)Hamilton7803-0533 gauge, 38 mm, point style 3UltraMicroPump مع وحدة تحكم SYS-Micro4 < td style = 'border-left-style: none ؛ border-top-style: none ؛ width: 172pt ؛ '>World Precision Instruments < td style = 'border-left-style: none ؛ border-top-style: none ؛ width: 172pt ؛ '>UMP3-1 < td style = 'border-left-style: none ؛ border-top-style: none ؛ '>