نموذج الحد الأدنى من إصابة الحبل الشوكي لدراسة تنشيط الخلايا الجذعية العصبية وهجرتها

الملخص

المصدر: لاكشمان ، ن. ، وآخرون . اختبار الغلاف العصبي لتقييم تنشيط الخلايا الجذعية العصبية الذاتية في نموذج فأر للحد الأدنى من إصابة الحبل الشوكي. J. Vis. Exp. (2018).

يوضح هذا الفيديو تنشيط وهجرة الخلايا الجذعية العصبية (NSCs) في نموذج إصابة الحبل الشوكي للفأر. لفضح الحبل الشوكي ، تتم إزالة فقرة من المنطقة الصدرية من العمود الفقري من فأر مخدر. ثم يتم إنشاء إصابة سطحية في المادة البيضاء للحبل الشوكي باستخدام إبرة مثنية تحافظ على القناة المركزية. بعد الإصابة ، يتم تنشيط الخلايا العصبية المحيطة بالقناة وتهاجر إلى موقع الإصابة للمساعدة في إصلاح الأنسجة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. جراحة إصابات الحبل الشوكي البسيطة

ملاحظة: قبل الجراحة تأكد من تعقيم جميع الأدوات والمواد الجراحية بالطرق المناسبة ( الشكل 1A).

1. قم ببناء قوس دعم صدري عن طريق لف 4-5 مربعات من الشاش وربطها معا في المنتصف للحصول على لفة ثابتة من الشاش.
2. ضع الفأر في غرفة الحث وابدأ التخدير بنسبة 5٪ من الأيزوفلوران. تأكد من عدم وجود منعكس قرصة إصبع القدم قبل المتابعة ، وكذلك طوال الإجراء. نظرا لأن الجراحة يمكن أن تستغرق ما يزيد عن 30 دقيقة حتى تكتمل ، قم بتحسين الحد الأدنى من التعرض للأيزوفلوران (5 دقائق عند 5٪ والوقت المتبقي بنسبة 2-3٪).
3. انقل الفأر إلى مخروط أنف متصل بجهاز التخدير بجرعة صيانة 2-3٪ من الأيزوفلوران. استخدم مقصات الشعر لإزالة الفراء من ظهر من منتصف الظهر إلى الرقبة / الأذنين لكشف منطقة مستطيلة واسعة من الجلد لإجراء الجراحة.
4. انقل الماوس إلى أداة تجسيمية عن طريق وضع أنفه في مخروط الأنف المرفق وتثبيت الجمجمة بقضبان الأذن. حافظ على الأيزوفلوران عند 5٪ أثناء وضع قضبان الأذن وأسفل الظهر إلى 2-3٪ بمجرد تثبيت الماوس في الجهاز التجسيمي.
5. تطبيق الأدوية المسكنة قبل الجراحة داخل الصفاق — ميلوكسيتام (2.0 ملغ/كغ). ضع تزييت العين بسخاء على عيون الفأر المفتوحة لمنع جفاف القرنية عند التخدير.
6. ضع قوس الدعم الصدري أسفل بطن الفأر أثناء تقويم جسم الفأر والعمود الفقري عن طريق سحب قاعدة الذيل برفق. استخدم شريط الملصقات المختبري لتأمين الذيل وجميع الأطراف الممتدة في وضع يشبه النجمة. بمجرد تأمينه، ادفع قوس الدعم الصدري بشكل مستقيم، من بطن الفأر باتجاه الجزء العلوي من الصدر — من أجل دعم العمود الفقري الصدري ( الشكل 1 ب ).
7. قم بإعداد حقل جراحي معقم عن طريق تطهير منطقة الجلد المقطوع بالفراء المحضرة في الخطوة 1.3 بنسبة 70٪ من الإيثانول ، متبوعا ببوفيدون - اليود. كرر مرتين. ضع ستارة جراحية معقمة للحفاظ على مجال معقم واسع.
8. باستخدام شفرة مشرط # 10 ، قم بعمل شق رأسي مواز للمحور الطولي للحيوان من منتصف لوحي الكتف إلى انحناء العمود الفقري الصدري. اسحب الجلد لكشف الأنسجة الرخوة ومحيط العمود الفقري ( الشكل 1C ).
9. حدد الحد السفلي للوسادة الدهنية فوق الكتف (هذا يحدد مستوى العمود الفقري T4 / 5). بنفس الشفرة # 10 ، بعناية ولكن بقوة ، قم بقص جانبي عظم العمود الفقري T5-T8 / 9 لفصل أوتار العضلات الخلفية عن العمود.
10. أدخل أسنان الضاعرات في مواقع الشق على جانبي العمود الفقري. اضبط التعريض عن طريق توسيع الضاعات لرفع العمود الفقري بشكل كاف دون وضع الكثير من الضغط على طبقات العضلات المتراجعة ( الشكل 1D ).
11. تحت المجهر الجراحي ، قم بتنظيف العضلات المتبقية والأنسجة الرخوة الأخرى التي تغطي العمود الفقري بعناية لكشف عظم العمود الفقري ( الشكل 1E ). حدد الفقرات التي سيتم إزالتها عن طريق ربط العملية الشائكة للفقرات بالملقط المسنن وتحريكها قليلا لأعلى ولأسفل.
    ملاحظة: يجب أن يسمح ذلك بتحديد المفاصل الفقرية وكشف الفتحات الصغيرة (الثقبة الفقرية) أسفل الفقرات ذات الأهمية.
12. أدخل رأسا واحدا من المقص المنحني في جانبي الثقبة الفقرية المكشوفة ، والذيلية إلى الصفيحة الفقرية المراد استئصالها ، وقطع المفاصل الفقرية المتصلة ثنائيا.
13. ارفع الصفيحة لأعلى واقطع الملحق العلوي للصفيحة لعزل العظم وإزالته.
    ملاحظة: سيؤدي ذلك إلى كشف الكيس الجافوي السليم الذي يحتوي على الحبل الشوكي ( الشكل 1F ). قد يكون هناك نزيف مفرط يمكن السيطرة عليه عن طريق وضع شاش مقطوع مسبقا مقاس 1 سم × 1 سم على المناطق المصابة و / أو غسله بمحلول ملحي معقم مخزن بالفوسفات (PBS).
14. مع عمل الوريد الظهري لخط الوسط كمعلم بارز ، أدخل عمودا منحنيا بزاوية 45 درجة من طرف إبرة 30 جم (مع إبرة مائلة متجهة لأعلى) في السطح الظهري الجانبي للحبل الشوكي (بعمق 1 مم تقريبا) عند حوالي 0.5 مم جانبيا إلى جانبي خط الوسط.
15. حرك الإبرة ~ 2 مم من الذيلية إلى المنقارية (بالتوازي مع خط الوسط) بحيث يتم إدخال طول شطبة الإبرة بالكامل في الحبل. قم بإزالة الإبرة عن طريق التتبع عبر مسار الإدخال ( الشكل 1G ).
    ملاحظة: يجب ألا يكون هناك نزيف ولكن يمكن رؤية تورم في الأنسجة الشوكية في هذه الخطوة.
16. لإغلاق الجرح ، قم بإزالة الضام وخياطة عضلات الظهر على جانبي الإصابة معا في خط الوسط باستخدام خياطة قابلة للامتصاص 6-0. استخدم خياطة حريرية معقمة 4-0 لإغلاق الجلد المغطى لاحقا.

النتائج

الشكل 1: الإجراء الجراحي. (A) تخطيط كل ما هو مطلوب ، مرقمة للرجوع إليها. (B) صورة للفأر في جهاز تجسيمي مع جسم مستقيم وعمود فقري وأطراف منتشرة ومسبوقة جنبا إلى جنب مع قوس دعم الصدر الموضوع تحتها. (C) صورة للفأر مع شق جلدي عمودي يكشف الطبقة العضلية ومحيط العمود الفقري. (D) صورة لجسم الفأر بعد الشقوق العضلية والتعرض والعزل للعمود الفقري ...

المواد

<فئة الشكل = نمط "الجدول" = "العرض: 1010pt;'> < td style = 'width: 149pt ؛ '>Fine Science Tools < td style = 'width: 332pt ؛ '> 15370-50 < td style = 'width: 292pt ؛ '> تخصيص عند الطلب للحصول على نصائح ضعيفة < td style = 'height: 14.5pt ؛ width: 237pt ؛ '>Graefe Fallps (مستقيم ، 1 × 2 أسنان) < td style = 'width: 149pt ؛ '>Fine Science Tools < td style = 'width: 332pt ؛ '> 11053-10 < td style = 'width: 292pt ؛ '> < td style = 'height: 14.5pt; العرض: 237pt ؛ ' >ملقط Graefe Extra Fine Graefe (منحني ، مسنن) < td style = 'width: 149pt ؛ '>Fine Science Tools < td style = 'width: 332pt ؛ '> 11152-10 < td style = 'width: 292pt ؛ '> أو أي ملقط آخر للخياطة < td style = 'الارتفاع: 14.5pt ؛ العرض: 237pt ؛ '>Hartman Hemostats (Straight) < td style = 'width: 149pt ؛ '>Fine Science Tools < td style = 'width: 332pt ؛ '> 13002-10 < td style = 'width: 292pt ؛ '> أو أي شيء آخر مناسب للخياطة آخر مناسب آخر مناسبرعاية< td style='الارتفاع:29.0pt;width:237pt;'>Tears Naturale P.M.< td style='width:292pt;'> injection injections< td style='width:292pt;'>

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
Agricola Retractor	Fine Science Tools	17005-04
Moria مقص زنبركي Vannas-Wolff (منحني)
مقبض مشرط #3	Fine Science Tools	10003-12	or أي نمط
Hair clippers	amazon.ca	https://www.amazon.ca/Wahl-Professional-8685-Classic-Clipper/dp/B00011K2BA	or أي طريقة أخرى مناسبة
Stereotaxic Instrument	Stoeling	51500	or أي نمط
Meloxicam			or أي مناسبة تقرها منشأة
Alcon	https://www.amazon.ca/Alcon-Tear-Gel-Liquid-Eye-Gel/dp/B00HHXGUXE	or any other suitable
Isoflurane	Baxter International Inc	DIN 02225875	or أي نمط آخر مناسب للتخدير
Q-tips Cottom Swabs	amazon.ca	https://www.amazon.ca/Q-Tips-Cotton-Swabs-500-Count/dp/B003M5UO6U/ref=pd_lpo_vtph_194_bs_tr_img_1/140-7113119-8364127?_encoding=UTF8&psc=1&refRID=JC16N542KVRF2N62N3DS
Cotton Gauze	Fisher Scientific	13-761-52
30G Needles	Becton Dickinson	305106	For Injury
25G Needles	Becton Dickinson	305122	for drug
1mL	Becton Dickinson	3090659	for drug
3mL Syringes	Becton Dickinson	309657	for Fluid Injections
4-0 Suture	uoftmedstore.com	2297-VS881	for skin suturing
6-0 Suture	uoftmedstore.com	VS889	for muscle suturing
Standard Disتشري Tools	Fine Science Tools
تشريح المجهر	Zeiss	Stemi 2000