إجراء الكيمياء المناعية على أنسجة دماغ الرئيسيات غير البشرية

الملخص

المصدر: Eid، L. & Parent، M. تحضير أنسجة دماغ الرئيسيات غير البشرية للكيمياء المناعية والفحص المجهري الإلكتروني. J. Vis. Exp. (2017).

يوضح هذا الفيديو تحضير أنسجة دماغ الرئيسيات غير البشرية المثبتة بالألدهيد باستخدام الكيمياء المناعية المضمنة مسبقا للفحص المجهري الإلكتروني. يحدد خطوات وضع العلامات المناعية على بروتين عصبي معين ، متبوعا بتفاعل بيروكسيداز ينتج راسب ملونا ، مما يتيح تصور البروتين المستهدف في المجهر الإلكتروني.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات من والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

1. الكيمياء المناعية المسبق التضمين (الشكل 1C)

1. قم بإعداد محلول مخزون سعة 4 لتر من محلول ملحي مخزن ل Tris (TBS ، 50 ملي مولار ، درجة الحموضة 7.6) على النحو التالي.
   1. قم بقياس 2 لتر من الماء المقطر في دورق سعة 4 لتر ، أضف 24.....

النتائج

الشكل 1: مخططات للخطوات الأساسية للبروتوكول. يتم تقطيع دماغ ( A ) إلى أقسام تسلسلية مع اهتزاز تبريد (B ). ثم تتم معالجتها لتضمين الكيمياء المناعية والفحص المجهر.......

المواد

<فئة الشكل = 'الجدول' ><فئة الجدول = 'ck-table-resize' النمط = 'collapse border: collapse ؛ font-family: Calibri ؛ حجم الخط: 11pt ؛ تخطيط الجدول: ثابت ؛ 'cellpacing = '0' cellpadding = '0' dir = 'ltr' border = '1' data-sheets root = '1' data-sheets basat = '1' >قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات < td style='border:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;'>Dibasic Dibasic Lahydrous sodium phosphate Fisher Scientific< td style='border-bottom: 1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;border-top:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;'>S374-500 < td style='border-bottom: 1px solid #000000;border-left:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;'>Monobased أحادي الهيدرات فوسفات الصوديوم أحادي القاعدة EM ScienceSX0710-1 Sodium chloride (NaCl)Fisher ScientificS271-3 < td style='border-bottom: 1px solid #000000;border-left:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;boardding:0px 3px;vertical-align:top;'>Hydroxymethyl aminomethane (THAM) Fisher ScientificT370-500 HCl EMDHX0603-31N dillution. المنتج أكال. استخدم مع الجرعة المناسبة.NaOHEMDSX0590-15N dillution. المنتج أكال. استخدم مع الحماية المناسبة.ParaformaldehydeSigmaP61484٪ dillution. المنتج شديد التقلب في شكل مسحوق وشديد السمية. استخدمه بحذر تحت غطاء التهوية مع الحماية المناسبة.Acrolein (90٪)sigma1102213٪ تخفيف. المنتج شديد السمية. استخدمه تحت غطاء التهوية مع الحماية المناسبة. autopsy تنفيس tableMopecCE400 <tr style='height:19px;'>< td style='border-bottom: 1px solid #000000;border-left:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;'>Electronic perfusion pumpcole parmermasterflex L/S 7523-90 Needle (perfusion)terumo NN-1838R18G 1 1/2 needle< td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;boardding:0px 3px;vertical-align:top;'>terumo NN-2713R< td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>21G 1/2Ketamine 20 mg/kgXylazine < td style='border-bottom: 1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;boardding:0px 3px;vertical-align:top;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>4 mg/kgAcepromazine < td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #00000;overflow:hidden;boardding:0px 3px;vertical-align:top;'> 0.5 mg/kg< td style='border-bottom:1px solid #000000;border-left:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;'>Scalpel Scalpel blades Feather lance< td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;'>201011 J9913No.22 للجراحة ورقم 11 ل EM< td style='border-bottom: 1px solid #000000;border-left:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;'>Surgical Scissors< td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;'> Rongeurs < td style='border-bottom:1px solid #000000;border-left:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;'>VibratomeLeicaVT 1200S< td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;boardding:0px 3px;vertical-align:top;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'> Calibrate Blade قبل كل استخدام، عندما يسمح الجهاز بذلكVibratome razor bladeGillette< td style='border-bottom: 1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;'>GIN 642107 GlycerolFisher-ScientificG33-4< td style='border-bottom: 1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;white-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>30٪ تخفيفEthylene glycol Fisher ScientificE178-430٪ dilution< td style='border-bottom: 1px solid #000000;border-left:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;'>Sodium borohydridesigmaS-9125 Normal horsehorse serumJackson immunoResearch Laboratories008-000-1212٪ dilution='height:19px;'> جيلاتين السمك البارد< td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;boardding:0px 3px;vertical-align:top;'>Aurion900.033 Primary Antibody ، SERT < td style = 'border-bottom: 1px solid # 000000 ؛ border-right: 1px solid # 000000 ؛ overflow: hidden ؛ padding: 0px 3px ؛ vertical-align: top ؛ '> سانتا كروز التكنولوجيا الحيوية< td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;boardding:0px 3px;vertical-align:top;'>SC-14581/500 dillution< td style='border-bottom: 1px solid #000000;border-left:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;'>Primary Antibody, ChATChemicon (Millipore)AB144P1/25 dillution Primary antibody , THImmunoStar229411/1000 dilutionbody المضاد الثانوي البيوتينيليت ، الماعزVector-LaboratoriesBA-9500< td style='border-bottom: 1px solid #000000؛ border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;s-space:normal;word-wrap:break-word;wrap-strategy:4;'>1/1000 difltionbody-entry dual biotinylated on, mouse Vector laboratories< td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;'>BA-20001/1000 dilutionVectastain elite ABC kitVector laboratories< td style='border-bottom:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;'>PK61008.8 μL/mL من A و B لكل منهما< td style='border-bottom:1px solid #000000;border-left:1px solid #000000;border-right:1px solid #000000;overflow:hidden;padding:0px 3px;vertical-align:top;'>3'3diaminobenzidine (DAB)SigmaD56370,05٪ تخفيف. المنتج شديد التقلب في شكل مسحوق وسام. لا ترمي النفايات في الحوض.peroxide 30٪ Fisher ScientificH-3230,005٪ تخفيف