$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
1. تحضير الأدوات
- الجراحية وغير الجراحية< span style='background-color: transparent ؛ color: # 000000 ؛ '> تعقيم الأدوات الجراحية وغير الجراحية في الأوتوكلاف.
- نظف طاولة العمليات الجراحية بنسبة 70٪ من الإيثانول وقم بتسخين وسادة التدفئة إلى 37 درجة مئوية.
- ضع وسادة التدفئة على طاولة العمليات وقم بتغطيتها بستائر جراحية معقمة.
ملاحظة: في جميع إجراءات البقاء على قيد الحياة، يتم استخدام تقنية "No Touch" هنا للحفاظ على العقم.
2. تحضير وإجراء T9-T10 استئصال الصفيحة الفقرية الشوكي
- شراء الفئران الذكور البالغة من العمر 10 أسابيع. تحفيز التخدير في كل باستخدام جهاز الاستنشاق ، بدءا من 5٪ من الأيزوفلوران ثم التقليل إلى 2-3٪ للحفاظ على التخدير لبقية الإجراءات.
- تأكيد التخدير الكامل عن طريق عدم استنباط أي استجابة لتحفيز الألم الناجم عن الذيل / القرصة.
- احلق الشعر على الظهر (من الرأس إلى الذيل) باستخدام ماكينة قص كهربائية، ثم ضعي كريم إزالة الشعر (3 دقائق) لإزالة الشعر المتبقي. أخيرا ، اغسل الظهر بالماء الجاري / المقشر الرطب وأعد إلى أقفاصها.
ملاحظة: هذا ضروري لتجنب تهيج الجلد الإضافي والتلوث الكيميائي في وقت جرح الجلد - في اليوم التالي، ضع مرهم العيون على القرنيات لحماية العينين من الجفاف أثناء العملية الجراحية. بعد ذلك ، افرك الجلد ب 3 مستحضرات بديلة من مقشر البيتادين و 70٪ إيثانول.
- باستخدام مشرط، قم بإجراء شق جلدي (~ 1.0-1.5 سم) على طول خط الوسط على الظهر على مستوى فقرات T8-T12.
ملاحظة: يتم تحديد مستوى الفقرات عن طريق العد الخلفي للفقرة من T13 باستخدام موقع الأضلاع العائمة التي تتوافق مع فقرة T13. - نظف الأنسجة الدهنية تحت الجلد للوصول إلى العضلات المجاورة للنخاعي، ثم قم بتشريحها ببطء لفضح العمليات الشائكة والصفيحة على كلا الجانبين.
ملاحظة: قم بهذا الإجراء بحذر شديد لتجنب النزيف الزائد أو أي إصابة في الحبل الشوكي في هذه المرحلة. - قم بإجراء استئصال الصفيحة الفقرية لكشف الحبل الشوكي (فقرات T9-T10) عن طريق تقشير الصفيحة الشوكية برفق باستخدام ملقط التشريح المجهري.
ملاحظة: قم بإجراء استئصال الصفيحة الفقرية بحيث يتم الكشف عن فائض من الحبل الشوكي لتسهيل حدوث الإصابة. في المجموعة الضابطة ، يتم إجراء استئصال الصفيحة الفقرية فقط.
3. إجراء T9-T10 Complete Spinal Cord Injury (SCI)
- باستخدام الملقط، قم بتأمين العمود الفقري عند T8 ورفعه للمبالغة في انحناء العمود الفقري.
- باستخدام مقص ناعم، قم بتقسيم الحبل الشوكي بين فقرة T9 و T10 وصولا إلى أرضية القناة الفقرية لضمان القطع الكامل.
- بعد مراقبة القطع الكامل تحت المجهر الجراحي، ضع قطعة من الدهون تحت الجلد على موقع استئصال الصفيحة الفقرية لتوفير حماية إضافية للحبل الشوكي قبل إغلاق موقع الجراحة.
- أخيرا، أغلق الجرح وقم بخياطة العضلات المجاورة للفقرات واللفافة السطحية باستخدام خيوط مستمرة، ثم أغلق الجلد باستخدام مشابك خياطة.
- بعد SCI ، راقب حركة الأمعاء في اليوم التالي ؛ ومع ذلك ، قم بإدارة المثانة البولية عن طريق تفريغ المثانة يدويا.
ملاحظة: يمكن استخدام مقياس Basso Mouse (BMS) لمراقبة تقدم التعافي الوظيفي للأطراف الخلفية بعد SCI في اليوم 2 ثم أسبوعيا.