طريقة تطهير الأنسجة الكارهة للماء لعينة من أنسجة دماغ الفئران

الملخص

المصدر: كيرشنر ، ك. ، وآخرون ، طريقة لإزالة الأنسجة الكارهة للماء لأنسجة دماغ الفئران. J. Vis. Exp. (2020).

يوضح هذا الفيديو طريقة إزالة الأنسجة الكارهة للماء لعينة من أنسجة دماغ الفئران. يتم تجفيف العينة بالتتابع في الميثانول ، ومعالجتها بمزيج ثنائي كلورو الميثان والميثانول لإذابة الدهون والأصباغ ، ونقلها إلى ثنائي بنزيل الأثير لإزالة الأنسجة بالكامل ، مما يتيح التصوير التفصيلي دون تقطيع رقيق.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات من والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

1. إزالة الأنسجة

1. احتضان العينة في محلول ماء منزوع الأيونات بنسبة 20٪ من الميثانول / 80٪ لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة (RT).
2. احتضان العينة في محلول ماء منزوع الأيونات بنسبة 40٪ من الميثانول / 60٪ لمدة ساعة واحدة في RT.
3. احتضان العينة في محلول ماء منزوع الأيونات بنسبة 60٪ / 40٪ لمدة ساعة واحدة في RT.
4. احتضان العينة في محلول ماء منزوع الأيونات بنسبة 80٪ / 20٪ لمدة ساعة واحدة في RT.
5. احتضان العينة في 100٪ ميثانول لمدة ساعة واحدة في RT.
6. احتضان في الميثانول الطازج بنسبة 100٪ طوال الليل في RT.
7. احتضان في 66٪ ثنائي كلورو ميثان (DCM) / 33٪ ميثانول لمدة 3 ساعات ، مع الاهتزاز ، في RT.
8. احتضان في ثنائي بنزيل الأثير (DBE) دون اهتزاز. اترك العينة في DBE حتى تصبح واضحة وتخزينها في DBE حتى التصوير.

المواد

<فئة الشكل = نمط "الجدول" = 'العرض: 601pt;'>

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
DBE	Sigma-Aldrich	108014-1KG
DCM	Sigma-Aldrich	270997-100mL
Methanol	Sigma-Aldrich	34860-1l-R