تحضير البلازما الغنية بالصفائح الدموية من الدم المحيطي البشري

الملخص

يوضح هذا الفيديو تحضير البلازما الغنية بالصفائح الدموية عالية الجودة (PRP) عن طريق فحص عدد الصفائح الدموية وجمع الدم وطرده المركزي وعزل الصفائح الدموية. يستخدم هذا البلازما الغنية بالصفائح الدموية في التطبيقات العلاجية لتجديد الأنسجة والشفاء.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تشمل المشاركين البشريين وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية والوطنية والدولية لرعاية الإنسان وتم مراجعتها من قبل مجلس المراجعة المؤسسية المحلية.

1. جمع العينات

1. فحص المرضى باستخدام تعداد الدم الأولي لاستبعاد قلة الصفيحات وتحديد عدد الخلايا الأساسية. للقيام بذلك ، استخدم مقياس الدم السريري لعد الخلايا. تأكد من أن عدد الصفائح الدموية أعلى من 150,000 خلية / ميكرولتر.

2. } تأكد من ترطيب المريض جيدا قبل جمع العينة. يمكن ضمان ذلك عن طريق الفحص البصري للسان وتورم الجلد وقياس ضغط الدم.

3. اجمع 100 مل من الدم الوريدي المحيطي من الوريد الأمامي للمريض باستخدام محاقن 2 × 50 مل مملوءة ب 5 مل من مضادات التخثر حمض السترات وسكر العنب والأدينين (ACDA) بنسبة 1:10. قم بإمالة المحاقن المجمعة للخلط الصحيح لمضادات التخثر لتجنب تخثر عينة الدم قبل الانتقال إلى الخطوة التالية.
   ملاحظة: قد يؤدي سحب الدم البطيء إلى عدم كفاية الاختلاط بين الدم الذي تم جمعه مع مضاد التخثر والتخثر. وبالتالي ، استخدم قنية 18G على الأقل لجمع الدم.

4. انقل 100 مل من الدم في المحاقن إلى 15 مل من أنابيب الطرد المركزي القاعية المخروطية مع 10 مل في كل أنبوب.

2. الطرد المركزي والعزل

1. ضع أنابيب الطرد المركزي في آلة طرد مركزي منضدية من الدرجة السريرية يتم الحفاظ عليها في درجة حرارة الغرفة في بيئة معقمة وقم بتشغيل الدوران الناعم الأولي بسرعة 100 × g لمدة 15 دقيقة. ينفصل الدم المضاد للتخثر إلى ثلاث طبقات ، أي خلايا الدم الحمراء في الأسفل ، والبلازما في الأعلى ، والمعطف المصقول في المنتصف.

2. ماصة الطبقة العليا من العينة ثلاثية الطبقات بطريقة معقمة باستخدام إبرة شوكية معقمة 18G وجمعها في أنبوب طرد مركزي سفلي مخروطي منفصل. تأكد من وجود أنابيب فردية لكل 10 مل من البلازما التي يتم جمعها.
   ملاحظة: يعتمد قرار تضمين طبقة المصفرة على طبيعة البلازما الغنية بالصفائح الدموية التي نحاول عزلها ، والتي تعتمد بدورها على طبيعة تطبيقها السريري. إذا كان البلازما الغنية بالصفائح الدموية الفقيرة بالخلايا البيضاء هي المنتج المطلوب ، فامتنع عن تضمين طبقة الطبقة المصفرة ، بينما إذا كان البلازما الغنية بالبلازما الغنية بالكريات البيض هي المنتج المطلوب ، سحب طبقة البلازما العليا جنبا إلى جنب مع الطبقة المصفرة للجولة الثانية من الطرد المركزي.

3. أخضع البلازما المجمعة في أنابيب طرد مركزي سعة 15 مل مع 10 مل من البلازما لكل منها للطرد المركزي الصلب عند 1600 × جم لمدة 20 دقيقة. الصفائح الدموية الموجودة في حبيبات البلازما في الجزء السفلي من أنبوب الاختبار. اجمع المادة الطافية في أنبوب منفصل.

4. قم بتقطيع حبيبات الصفائح الدموية في حقنة سعة 5 مل بمساعدة إبرة شوكية معقمة 18 جم. اجمع كل أنابيب الاختبار مع الكريات في حقنة واحدة سعة 5 مل للتطبيق.

5. إعادة تكوين الحبيبات المجمعة بكميات كافية للاستخدام السريري مع البلازما الطافية في أنبوب الطرد المركزي بعد الجولة الثانية من الطرد المركزي.

3. التحقق من الصحة

1. قم بإخضاع البلازما الغنية بالصفائح الدموية النهائية المعدة لعد الخلايا باستخدام مقياس الدم السريري لحساب عدد الصفائح الدموية وحساب عدد الصفائح الدموية المطلق في البلازما الغنية بالصفائح الدموية ، وتدرج تركيز الصفائح الدموية الذي تم تحقيقه على خط الأساس ، وفعالية استعادة الصفائح الدموية للبروتوكول باستخدام الصيغة التالية.
   عدد الصفائح الدموية المطلق = عدد الصفائح الدموية في البلازما الغنية بالصفائح الدموية في ميكرولتر × 1000 × حجم البلازما الغنية بالصفائح الدموية بالملل
   تدرج تركيز الصفائح الدموية =
   كفاءة استعادة الصفائح الدموية =
   على سبيل المثال ، يتم استخدام 100 مل من الدم مع عدد الصفائح الدموية الأساسي البالغ 200,000 / ميكرولتر لتحضير البلازما الغنية بالصفائح الدموية ، ويتم الحصول على 5 مل من البلازما الغنية بالصفائح الدموية مع عدد الصفائح الدموية النهائي 3،000،000 / ميكرولتر. يتم حساب المعلمات المذكورة أعلاه على النحو التالي:
   العدد المطلق للصفائح الدموية = 3,000,000 × 1000 × 5 = 15 مليار صفيحة دموية
   تدرج تركيز الصفائح الدموية = 3,000,000 / 200,000 = 15
   كفاءة استعادة الصفائح الدموية = 3,000,000 × 1000 × 5 / 200,000 × 1000 × 100 = 75٪

2. ضمان كفاءة استرداد البروتوكول من خلال دورات متكررة. يوفر البروتوكول الفعال المستخدم تدرجا تركيزا أعلى من 5 أضعاف خط الأساس بكفاءة استرداد >80٪. بناء على الاستخدام المطلوب لحجم البلازما الغنية بالصفائح الدموية ، يمكن معايرة عدد الصفائح الدموية التي يجب تسليمها وفقا لذلك.

المواد

< فئة الشكل = "الجدول" النمط = "العرض: 540 نقطة ؛" ><فئة الجدول = "ck-table-resize" >< col style = "العرض: 31.85٪ ؛ ">قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات محلول سكر العنب المضاد للتخثر IPFresenius Kabi ، الهندACDAIP / L / A / 19/00 BD Quincke NeedleBecton Dickinson ، إسبانيا405125نمط 18G DISPOVAN حقنة 50 ملمحاقن هندوستان للأجهزة الطبية المحدودة ، الهند  < td style = "الارتفاع: 14.5pt ؛" > DISPOVAN حقنة 5 ملمحاقن هندوستان والأجهزة الطبية المحدودة ، الهند  < td style = "الارتفاع: 14.5pt ؛ "> Spinwin Tube مخروطي القاعTarsons ، الهند546021 < td style = "الارتفاع: 14.5pt ؛ ">Sysmex XN-350Sysmex Inc. ، الولايات المتحدة الأمريكيةXN 350 آلة الطرد المركزي السريرية على الطاولةREMI ، الهندR-8C4x4 دوار يتأرجح جيدا