تصور ورسم خرائط لويحات الأميلويد المسماة بالميثوكسي-X04 في قسم دماغ الفئران بمرض الزهايمر

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Bisht, K., et. al. الفحص المجهري للضوء والكهرباء المترابط لدراسة التفاعلات الدبقية الدقيقة مع لويحات β-أميلويد. J. Vis. Exp. (2016)

} يوضح هذا الفيديو تصور ورسم خرائط لويحات الأميلويد المسماة بالميثوكسي-X04 في دماغ الفأر المصاب بمرض الزهايمر الأقسام التي تستخدم الفحص المجهري الفلوري والحقل الساطع ، مما يتيح الارتباط الدقيق بين اللويحات والهياكل التشريحية لدراسة أمراض مرض الزهايمر.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات من والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

1. فحص القسم لوجود لوحات ملطخة بالميثوكسي-X04

بمساعدة أطلس دماغ الفأر التجسيمي ، حدد أقسام الدماغ التي تحتوي على منطقة الاهتمام ، على سبيل المثال ، الحصين CA1 كما هو مستخدم في المثال الحالي. ضع كل قسم في بئر داخل صفيحة استزراع 24 بئرا تحتوي على محلول تجميد كاف لمنع الأقسام من الجفاف.
افحص كل قسم على التوالي لتجنب جفاف الأقسام باستخدام الإجراء التالي:
1. أضف قطرة من المحلول الملحي المخزن بالفوسفات (PBS) إلى شريحة مجهرية باستخدام ماصة يمكن التخلص منها وضع القسم على القطرة.
2. افحص القسم تحت المجهر الفلوري لتحديد المناطق التي تحتوي على لويحات ميثوكسي-X04 المسماة Aβ.
  ملاحظة: يمكن تصور methoxy-X04 بسهولة باستخدام مرشح الأشعة فوق البنفسجية الفلورية (UV) (الإثارة 340 - 380 نانومتر).
التقط صورا للمناطق ذات الأهمية (ROI) في المجال الساطع وكذلك في وضع التألق دون تحريك مرحلة المجهر ، حيث يجب أن تظهر كل صورة نفس المنطقة في كلا المجالين من أجل ربط وجود اللويحات مباشرة بالمنطقة الهيكلية لقسم الأنسجة.
احفظ الصور الملتقطة وتسميتها وفقا لرقم. قم أيضا بتسجيل رقم البئر في اللوحة وحقل الصور الملتقطة. على سبيل المثال ، على سبيل المثال: 9978A1B ؛ رقم: 9978; رقم البئر: A1 ؛ الحقل: مشرق. ضع القسم مرة أخرى في البئر المخصص له بمجرد اكتمال التصوير.
ملاحظة: في النهاية ، لكل قسم يتم فحصه ، يتم الحصول على صورتين ، واحدة في المجال الساطع والأخرى في مجال الأشعة فوق البنفسجية.
افتح صورتي نفس عائد الاستثمار (واحدة في مجال ساطع والأخرى في مجال الأشعة فوق البنفسجية) في الصورة J ، وباستخدام المكون الإضافي MosaicJ ، قم بمحاذاة حواف الصورتين واحفظ الصورة المحاذاة والمدمجة وفقا لرقم البئر الذي أتت منه.
احفظ الصورة في مجلد منفصل برقم المعين. اجمع بين الصور لتحديد اللويحات في قسم الأنسجة وتوطينها واحصل على رؤية كاملة للقسم بأكمله في المجالين المختلفين (ساطع والأشعة فوق البنفسجية).
بعد اكتمال عملية الفحص ، قم بتخزين الأقسام التي تم فحصها عند -20 درجة مئوية في صفيحة مزرعة مكونة من 24 بئرا تحتوي على مادة لاصقة بالتبريد حتى يتم إجراء تلطيخ مناعي أو مزيد من المعالجة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

<فئة الشكل = 'الجدول' ><فئة الجدول = 'ck-table-resize' النمط = 'collapse border: collapse ؛ font-family: Calibri ؛ حجم الخط: 11pt ؛ تخطيط الجدول: ثابت ؛ 'cellpacing = '0' cellpadding = '0' dir = 'ltr' border = '1' data-sheets - root = '1' data-sheets - baot = '1'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Roboto ؛ حجم الخط: 7pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '> Methoxy-X04 < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Roboto ؛ حجم الخط: 7pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ '>Tocris Bioscience4920< td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Roboto ؛ حجم الخط: 7pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ > 10 مجم ركيزة لكل قرصشرائح المجهر فيشر العلمي < نمط td = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Roboto ؛ حجم الخط: 7pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ >12-550-15 < td style = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: الروبوت ؛ حجم الخط: 7pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ لوحات ثقافة الأنسجة > 24 بئر فيشر العلمي < نمط td = 'لون الخلفية: #ffffff ؛ اللون: #1a202c ؛ عائلة الخط: Roboto ؛ حجم الخط: 7pt ؛ وزن الخط: عادي ؛ الفائض: مخفي ؛ الحشو: 0 بكسل 3 بكسل ؛ المحاذاة الرأسية: أسفل ؛ المساحة البيضاء: عادي ؛ التفاف الكلمات: كلمة فاصلة ؛ استراتيجية التفاف: 4 ؛ >353047 ethylene glycolFisher BioReagentsBP230-4 GlycerolFisher BioReagentsBP229-4

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن