تقنية تشريح يوضح قلع العين الماوس لتثبيت الأنسجة لأداء phenotyping في شاشات عالية الإنتاجية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
سمل العيون الماوس لPhenotyping عالي الإنتاجية عن بعد
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
العين الماوس نموذجا هاما لدراسة وراثية للمرض العيون متعدية الإنسان. وقد لخص الأمراض المسببة للعمى في البشر، مثل التنكس البقعي، تنكس مبصرة، والساد، الزرق، والشبكية، واعتلال الشبكية السكري في الفئران المعدلة وراثيا، وقد تم إنشاؤها 1-5 الفئران المعدلة وراثيا ومعظم خروج المغلوب من قبل مختبرات لدراسة طب العيون الأمراض غير، ولكن حفظ الوراثية بين نظم الجهاز تشير إلى أن العديد من نفس الجينات قد تلعب أيضا دورا في تطوير العين والمرض. وبالتالي، فإن هذه الفئران تمثل موردا هاما لاكتشاف الجديد الوراثي، النمط الظاهري الارتباطات في العين. لأن تنتشر هذه الفئران في جميع أنحاء العالم، فإنه من الصعب الحصول على، والحفاظ على، والنمط الظاهري لهم بطريقة فعالة من حيث التكلفة الفعالة. وهكذا، وتقتصر معظم phenotyping العيون عالية الإنتاجية شاشات لبعض المواقع التي تتطلب في الموقع والخبرة لدراسة طب العيون في عيون الفئران الحية. 6-9 وثمة نهج بديل وضعتها مختبرنا هو وسيلة لاكتساب النائية الأنسجة التي يمكن استخدامها في عمليات المسح كبيرة أو صغيرة الحجم من العيون الماوس المعدلة وراثيا. إجراءات موحدة للفيديو المستندة إلى نقل المهارات الجراحية، تثبيت الأنسجة، والشحن تسمح لأي مختبر لجمع العيون كلها من الحيوانات متحولة وإرسالها لphenotyping الجزيئية والمورفولوجية. في هذه المقالة الفيديو، نقدم التقنيات لنقل كل من استأصل وغير المثبتة ونضح عيون الماوس الثابتة لتحاليل phenotyping البعيد.
البروتوكول
1. تشريح حادة: قلع العين الماوس في العينات غير المثبتة
- مزق الجفون لتحسين التعرض والوصول إلى العالم الخلفي (مقلة العين) عن سطح البحر.
- وضع forcep خلع الملابس منحني وراء العالم و(تحت) في المدار (محجر العين). وSharptip ماهاجان خلع الملابس forcep هو أداة مخصصة مع نصائح لجعل مدببة هذه الخطوة أسهل (انظر المواد والكواشف الجدول).
- إغلاق forcep وفهم النسيج الضام المدارية والعصب البصري وراء العالم مع الحرص على تجنب الضغط على العالم.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الفئران المعدلة وراثيا أكثر توجد في المختبرات التي لا تفحص العينين. أسلوبنا الفيديو يوضح بسيطة، طريقة موحدة لنقل المهارات الجراحية عن بعد لتحسين اكتساب الأنسجة من المختبرات مع خبرة قليلة مع العينين. هذه التقنية تساعد في التغلب على الفيديو شرك كبير في الإنتاجية العالية phenotyping، والذي هو استخدام عدد محدود من المواقع الخبير بسبب أساليب غير موحدة جمع الأنسجة والتي تمنع تثبيت مغزى المقارنة الدراسات المظهري والجزيئي. لإنشاء وصيانة مختبر مراقبة الجودة مع أي النائية وفني جديد، من المه.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
البحث للوقاية من العمى؛ Bartly J. Mondino MD، مدير معهد جول شتاين العين، UCLA، وراميرو راميريز سوليس، جاكي الأبيض، وجين Estabel في معهد سانجر، ويلكوم ترست الجينوم الحرم الجامعي. هذا البحث يتفق مع بيان أرفو لاستخدام الحيوانات في العيون والبحوث البصرية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم | شركة | كتالوج رقم | تعليقات |
| منحني Forcep خلع الملابس | STORZ Ophthalmics | E1408 | |
| ماهاجان Sharptip خلع الملابس forcep | STORZ Ophthalmics | E1406 (REF-SP7 64520) | |
| منحني مقص يستكوت | STORZ Ophthalmics | E3321 WH | |
| 15 ° BD بيفر المجهرية بليد | بيكتون ديكنسون | 374881 | |
| 0.22-الجميلة Castroviejo الملقط خياطة | STORZ Ophthalmics | E1805 | |
| 0،12 COLIBRI ملقط | STORZ Ophthalmics | 2/132 | |
| 30-قياس الإبرة | بيكتون ديكنسون | 305128 | |
| بيولوجية ميلر | الصياد | 03-523-4 | |
| Parafilm | الصياد | 13-374-10 | |
| الزجاج قارورة التلألؤ | ويتون | 4500413033 | |
| PBS، درجة الحموضة 7.4 | إينفيتروجن | 70011-044 | |
| 16٪ لامتصاص العرق | علوم المجهر الإلكتروني | 15700 | |
| 2.5٪ لامتصاص العرق / غلوتارالدهيد 2.5٪ من الصوديوم 0.1M العازلة الفوسفات | علوم المجهر الإلكتروني | 15700 16300 & | مختلطة في المختبر |
| 50٪ غلوتارالدهيد | علوم المجهر الإلكتروني | 16300 | |
| 0.25٪ Formvar | علوم المجهر الإلكتروني | 15810 | |
| شرطيفي الشبكة فتحة | علوم المجهر الإلكتروني | M2010-CR | |
| 4٪ الأزميوم رابع أكسيد | علوم المجهر الإلكتروني | 19140 | |
| الأجسام المضادة لمكافحة SOD3 | Abcam | Ab21974 | |
| الماعز المضادة للأرنب اليكسا فلور 488 | إينفيتروجن | A11070 | |
| Spurr لتضمين الراتنج | علوم المجهر الإلكتروني | 14300 |
المراجع
- Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -S. Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy. Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).
- Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. A high-throughput Mouse Eye Phenomics System. Cold....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
