توصيل المواد المستهدفة إلى دماغ الفأر عن طريق التسريب في الشريان السباتي الداخلي

الملخص

المصدر: Leda, A. R., et al. تقنية التسريب بالجراحة المجهرية للفأر لتوصيل المواد المستهدفة إلى الجهاز العصبي المركزي عبر الشريان السباتي الداخلي. J. Vis. Exp. (2017)

يوضح هذا الفيديو إجراء جراحيا مجهريا مصمما لتسهيل التسريب المستهدف لمادة اختبار في الدماغ عبر الشريان السباتي الداخلي (ICA). يتضمن الإجراء خياطة دقيقة ومعالجة الأوعية الدموية لتقييد تدفق الدم مؤقتا ، مما يضمن الولادة الخاضعة للرصد. يتم إدخال أنبوب شعري في الشريان السباتي الخارجي (ECA) ويتقدم نحو التشعب. عند التسريب ، تتجاوز المادة الدورة الدموية الجهازية ، وتعبر الحاجز الدموي الدماغي ، وتحقق التوصيل المستهدف إلى حمة الدماغ.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. تحضير الفئران للجراحة تخدير

1. الفأر بالإيزوفلوران الممزوج بالأكسجين باستخدام نظام التخدير المختبري. استخدم الأيزوفلوران عند الإعداد بين 4-5٪ وتدفق الأكسجين عند 2 لتر / دقيقة على الماكينة التجارية (انظر جدول المواد). انقل إلى سطح الجراحة ، تحت مجهر مجسم ، وحافظ على التخدير باستخدام مخروط الأنف (استخدم إعداد الأيزوفلوران 1.5 - 2.5 وتدفق الأكسجين عند 2 لتر / دقيقة).
   1. تأكد من أن معدل تنفس الفأر حوالي 1-2 تنفس / ثانية دون اللهاث. بالإضافة إلى ذلك ، تأكد من أن لا يظهر شعيرات ورد فعل تحفيز وانعكاس دواسة (قرصة إصبع القدم). راقب معدل التنفس والجهد أثناء الجراحة ، على الأقل كل 5 دقائق. اتبع اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامها والإرشادات البيطرية لمراقبة تخدير القوارض.
2. ضع قطرة من مزلق العين على كل عين باستخدام مسحة معقمة لمنع الجفاف. يوصى بإعطاء مضادات الالتهابات والمسكنات لتخفيف الانزعاج.
3. مع استلقاء على ظهره ، حافظ على التخدير باستخدام مخروط الأنف.
4. نظف منطقة عنق عن طريق مسح المنطقة ثلاث مرات بالإيثانول 70٪ والكلورهيكسيدين. احلق منطقة جراحة باستخدام ماكينة حلاقة (مفصلة أدناه).

2. تشريح الشريان السباتي المشترك (CCA)

1. قم بإجراء الجراحة المجهرية بالكامل تحت مجهر مجسم. باستخدام المقص الجراحي والملقط ، قم بإجراء شق خط الوسط الضحل في الرقبة ، من فوق عظم الصدر إلى أسفل الفك (حوالي 3 إلى 4 سم).
2. باستخدام ملقط ، افصل بعناية الأنسجة الدهنية والضامة لكشف القصبة الهوائية.
3. ضع وسادة (جسم دائري ، قطره حوالي 0.5 سم) على الجزء الخلفي من عنق الفأر لتمديد الرقبة ، مما يزيد من تعريض المنطقة.
4. افصل الأنسجة باستخدام ضام الأنسجة أو الخطافات.
5. على الجانب الأيسر من القصبة الهوائية للحيوان ، قم بفصل النسيج الضام بعناية لفضح CCA الأيسر.
6. باستخدام الملقط ، قم بإزالة جميع الأنسجة الضامة بعناية لفضح تشعب CCA ، وبداية الشرايين السباتية الخارجية والداخلية.

3. تحضير CCA لضخ المواد

1. أدخل جزأين من خياطة النايلون (حوالي 1 سم لكل منهما) تحت الشريان السباتي الخارجي (ECA) ، باستخدام الملقط.
2. ضع عقدة دائمة في أعلى نقطة ممكنة في ECA.
3. عند أدنى نقطة ممكنة من ECA ، مباشرة فوق تشعب CCA ، ضع عقدة قابلة للإزالة. يجب أن تكون هذه العقدة فضفاضة مقارنة بالعقدة العلوية.
4. أغلق CCA باستخدام مشبك وعاء ، في أدنى نقطة ممكنة.
5. أغلق الشريان السباتي الداخلي (ICA) باستخدام مشبك الوعاء الدموي.
6. باستخدام مقص زنبركي التشريح الدقيق ، قم بإجراء قطع صغير في ECA (حوالي 2 مم) ، بين العقدتين.

4. ضخ المواد عبر ICA

1. قم بتجميع نظام التسريب. قم بتوصيل 6 بوصات من الأنابيب الشعرية (الأبعاد المثالية: 2.5 مم × 1.2 مم) بحقنة السل التي تحتوي على 250 ميكرولتر من المادة المراد حقنها (الأدوية ، ومسببات الأمراض ، والحويصلات خارج الخلية ، من بين أمور أخرى) وأدخل الطرف الشعري برفق في الشق الذي تم إجراؤه في الخطوة 3.6.
2. استمر في الانزلاق لأسفل الشعيرات الدموية حتى تصل إلى نقطة المنتصف بين التشعب والمقطع الذي يغلق CCA.
3. اربط عقدة ECA السفلية. تحقق من أن العقدة فضفاضة بما يكفي للسماح بالسيولة الشعرية وضيقة بما يكفي لمنع التسرب.
4. قم بإزالة المقطع من ICA.
5. اضغط برفق على مكبس المحقنة مما يسمح بضخ المادة بحوالي 10 ميكرولتر في الثانية.

5. إجراءات ما بعد التسريب

1. ضع المشبك مرة أخرى على ICA.
2. قم بإزالة الأنبوب الشعري برفق.
3. اربط عقدة ECA السفلية تماما.
4. قم بإزالة المقاطع من ICA و CCA.

6. إغلاق الشق ورعاية ما بعد الجراحة

1. قم بإزالة الضام أو خطافات الأنسجة والوسادة.
2. نظف منطقة الخياطة باستخدام محلول ملحي معقم.
3. أغلق الشق باستخدام خياطة / إبرة من النايلون والملقط.
4. يتناول مضاد للالتهابات ومسكن للتخفيف من الانزعاج بعد الجراحة.
5. ضع في قفص يوضع على وسادة التدفئة لمدة 1 ساعة على الأقل وراقب التعافي.

المواد

<فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-resize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Anesthesia InstrumentVetequip901806 SurgicalSurgical Science Tool14558-09 ملقط جراحي طرف مستقيمأداة العلوم الدقيقة00108-11 ملقط جراحي طرف بزاويةأداة العلوم الدقيقة00109-11 مقص زنبركيأداة العلوم الدقيقة15000-08 خياطة نايلونBraintree ScientificSUT-S 104 أنابيب شعرية (Micro-Renathane 0.010 "× 0.005" لكل قدم)برينتري MRE01050 العلمية خياطة الإغلاقVWR95057-036 إيزوفلورانبيرامال 2،3،5-Triphenyltetrazolium كلوريدفيشر Scientific50-121-8005