إعطاء الأدوية داخل الأنف في الفئران عن طريق الماصة والقنية العكسية لتوصيل الأدوية من الأنف إلى الدماغ

الملخص

المصدر: Kanazawa, T., et al. طرق جديدة للإعطاء داخل الأنف تحت التخدير الاستنشاقي لتقييم توصيل الأدوية من الأنف إلى الدماغ. J. Vis. Exp. (2018)

يوضح هذا الفيديو إعطاء الأدوية المصنفة بالإشعاع داخل الأنف في فأر مخدر لتحقيق توصيل الأدوية من الأنف إلى الدماغ. يشرح كيف تعبر المخدرات ظهارة الأنف وتنتقل عبر المسارات العصبية للوصول إلى الدماغ ، وكذلك كيف تؤثر الحركة الهبية على الاحتفاظ بالمخدرات وإزالتها. بالإضافة إلى ذلك ، يصف الفيديو طريقة بديلة للقنية العكسية ، والتي تتضمن إدخال قنية عبر المريء لتوصيل الأدوية ضد الحركة الهدبية ، وتعزيز الاحتفاظ وتحسين كفاءة النقل.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. المستخدمة في الإعطاء داخل الأنف تحت التخدير بالاستنشاق

1. تضع الفئران التجريبية في أقفاص من الفولاذ المقاوم للصدأ تحت دورة إضاءة / مظلمة مدتها 12 ساعة (ضوء من الساعة 8:00 صباحا إلى 8:00 مساء) ، مع الحفاظ على درجة حرارة يتم التحكم فيها عند 23 ± 1 درجة مئوية ، ورطوبة 50٪ ± 10٪ ، والوصول إلى الطعام والماء.
2. قبل التجربة ، قم بتخدير الفئران عن طريق استنشاق 2٪ من الأيزوفلوران ، بعد البدء بتركيز 4٪. تأكد من المستوى المطلوب للتخدير عن طريق التحقق من اختفاء تصحيح السطح.

2. تحضير محلول الإعطاء

1. تحضير محلول إعطاء [¹⁴درجة مئوية] - إينولين (50 ميكرومتر ، 0.5 ميكرو Ci / مل لكل فأر) عن طريق التخفيف في محلول ملحي مخزن بالفوسفات ، وتخزينه في 4 درجات مئوية حتى الاستخدام.

3. طريقة الإعطاء داخل الأنف للفئران

1. باستخدام قناع استنشاق قابل للفتح مؤقتا (الشكل 1)
   1. قم بتثبيت الفئران في وضع ضعيف على لوح الفلين عن طريق لصق أطرافها تحت التخدير بالاستنشاق باستخدام 2٪ isoflurane (الشكل 1 أ).
   2. قم بإدارة حجم إجمالي من محلول الإعطاء 25 ميكرولتر لكل فأر على فترات 30 ثانية ، عبر جرعات من 1 إلى 2 ميكرولتر يتم إعطاؤها بدلا من ذلك في فتحتي الأنف اليمنى واليسرى بينما يتم تثبيت الفئران تحت التخدير بالاستنشاق (الشكل 1 ب و ج).
   3. ملاحظة: يتم مسح نفايات غاز التخدير بالوسائل النشطة (غطاء الدخان ، خزانة السلامة الحيوية ذات الأنابيب الصلبة ، الفراغ ، إلخ) عند فتح القناع وبالوسائل السلبية (علبة غاز التخدير النفايات) عند إغلاقها.
2. طريقة القنية العكسية من جانب مجرى الهواء عبر المريء (الشكل 2)
   1. قم بتثبيت الفئران في وضع ضعيف على لوح الفلين عن طريق لصق أطرافها تحت التخدير الاستنشاقي باستخدام 2٪ إيزوفلوران.
   2. يتم حلق شعر الرقبة وتحضيره عن طريق تطبيق البيتادين أو الكلورهيكسيدين ، متبوعا بشطف الكحول.
   3. كشف القصبة الهوائية والمريء عن طريق توسيع الجلد تحت الحلق بالملقط بعد عمل شق صغير (1.5 سم) بالمقص.
   4. قم بعمل شق (1 مم) في القصبة الهوائية باستخدام المقص.
   5. أدخل قنية (القطر الداخلي: 0.58 مم ، القطر الخارجي: 0.965 مم) بطول 1.2 سم وقم بتوصيل الطرف المقابل للقنية بداخل قناع الاستنشاق.
   6. قم بعمل شق (1 مم) في المريء باستخدام المقص ، وأدخل قنية (القطر الداخلي: 0.28 مم ، القطر الخارجي: 0.61 مم) بطول 1.4 سم باتجاه الجزء الخلفي من تجويف الأنف ، وربطها (الشكل 2 أ و ب). ملاحظة: نفذت الإجراءات من 3-2-2 إلى 4-2-3 تحت مجهر مجسمي بتكبير ×10.
   7. قم بتوصيل إبرة (27G × 1/2) بحقنة سعة 1 مل مملوءة بمحلول إداري وقم بتوصيلها بمضخة حقنة صغيرة قابلة للبرمجة.
   8. قم بتوصيل الإبرة أعلاه بالقنية التي تم إدخالها في المريء عند 3.2.5 (الشكل 2 ج).
   9. إدارة حجم إجمالي قدره 25 ميكرولتر [¹⁴درجة مئوية] محلول الأنسولين بمعدل ثابت (5 ميكرولتر / دقيقة) (الشكل 2C و 2D).

النتائج

فئة الشكل = 'الصورة image_resized image-style-align-center' style='display: table؛ margin-left: auto؛ margin-right: auto ؛ width: 75٪ ؛ '>

الشكل 1: الإعطاء داخل الأنف باستخدام ماصة دقيقة بالتزامن مع قناع استنشاق قابل للفتح مؤقتا. صور فوتوغرافية تظهر فأرة ثابتة (A) بقناع مغلق قبل الإعطاء ، (B) لقطة مقربة ، و (C) مناظر كاملة للقناع المفتوح أثناء الإعطاء داخل الأنف باستخ...

المواد

< فئة الشكل = 'الجدول' >< فئة الجدول = 'ck-table-ressize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ddY mouseJapan SLC, Inc. ذكر ، 4-6 أسابيع ، 20-30 جمإيزوفلورانفايزرv002139 إعداد الأيزوفلورانSHINANO manufacturing CO. LTD.SN-487-OTAir ، SN-489-4 قناع الأيزوفلورانSHINANO التصنيع المحدودة. للقوارض الصغيرة قناعIsoflurane (نوع Opneable) SHINANO manufacturing CO. LTD. طلبات خاصةصندوق التخديرSHINANO التصنيع المحدودة.SN-487-85-02 مقص تجارب-1NATSUME SEISAKUSHO CO.، LTD.B-27H مقص تجارب-2NATSUME SEISAKUSHO CO.، LTD.B-13H ملاقط -1شركة أدوات العلوم الدقيقة11272-30دومون # 7 ملاقط دوموكسل-2NATSUME SEISAKUSHO CO.، LTD.A-12-1 أنبوب قنية (PE-50) بيكتون وديكنسون وشركاه.5069773معرف: 0.58 مم ، OD: 0.965 ممأنبوب قنية (SP-10) NATSUME SEISAKUSHO CO.، LTD.معرف KN-392: 0.28 مم ، OD: 0.61 ممماكينة حلاقةMARUKAN، LTD.DC-381 مجهر مجسيميأوليمبوس كوربوريشنSZ61 إبرة 27G 1/2 في 13 ممTERUMO CORPORATIONNN-2738R 1 مل حقنةTERUMO CORPORATIONSS-01T مضخة حقنةالعلوم العصبيةNE-1000 ملعقة صغيرةShimizu Akira Inc.91-0088 ماصة دقيقة (0.5-10 ميكرولتر)رقاقة ماصة Eppendorf AGZ368083 Eppendorf AG0030 000.811 TapeTimeMed Labeling System، Inc.T-534-Rلتثبيت الماوس [¹⁴C] -InulinAmerican Radiolabeled Chemicals Inc.ARC0124A0.1 مللي Ci / ملEtOHواكو للصناعات الكيميائية النقية المحدودة.054-00461