الزرع عبر الأنف للخلايا الدبقية البشرية المستحثة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات المشتقة من الخلايا الدبقية الصغيرة في دماغ الفأر

الملخص

المصدر: Parajuli، B.، et.al. زرع الخلايا الدبقية الصغيرة المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة عن طريق الإنسان في دماغ الفئران ذات الكفاءة المناعية عبر طريق الأنف غير الغازي. J. Vis. Exp. (2022).

يوضح هذا الفيديو الزرع عبر الأنف لخلايا الخلايا الدبقية البشرية المستحثة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات (iPSMG) في دماغ الفأر. يتم تطبيق الهيالورونيداز على فتحات أنف الفأر المستنفد من الخلايا الدبقية الصغيرة لتعزيز النفاذية. يتم إعطاء تعليق iPSMG داخل الأنف, ويسمح للفأر بالتعافي. يتم إعطاء وسائل الإعلام الغنية بعامل النمو بانتظام لدعم بقاء iPSMG في أنسجة المخ.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. تحضير وسط الخلية ووسط الزرع وخليط التخدير

1. تحضير وسط الخلية بإضافة 10٪ مصل بقري للجنين و 0.1٪ بنسلين / ستربتومايسين في وسط النسر المعدل (DMEM) من دولبيكو.
2. قم بإعداد وسط الزرع عن طريق إضافة عامل تحفيز المستعمرة البشرية 1 أو hCSF1 (250 نانوغرام / مل) وعامل النمو البشري المحول بيتا 1 أو hTGF-β1 (100 نانوغرام / مل) إلى وسط الخلية.
3. تحضير خليط التخدير للحقن داخل الصفاق عن طريق خلط 0.45 مل من هيدروكلوريد ميديتوميدين ، و 1.2 مل من ميدازولام ، و 1.5 مل من طرطرات البوتورفانول في 11.8 مل من محلول ملحي عادي.

2.....

المواد

< فئة الشكل = نمط الجدول = 'العرض: 100٪ ؛ '>< فئة الجدول = 'ck-table-resize'>< نمط العمود = 'العرض: 25٪ ؛ '>< نمط عمود = 'العرض: 25٪ ؛ '>< نمط العمود = 'العرض: 25٪ ؛'> قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) Thermo Fisher Scientific10566 AIN 93G الشرقية الخميرة الشرقية Co مصل الأبقار الجنينGE Healthcare Life SciencesSH30070.03 مختبر iPSMGShionogi & Co.، Ltd المجمد لاكتشاف الأدوية وأبحاث الأمراضعامل تحفيز المستعمرة البشرية 1 (hCSF1)PeproTech300-25 HyaluronidaseSigma-AldrichH-3506 Medetomidine hydrochlorideMeiji SeikaVETLI5 MidazolamAstellas18005A2 ParaformaldehydeWako Pure Chemical Industries162-16065 Penicillin / StreptomycinThermo Fisher Scientific15140-122 PipetteEppendorf3120000011 طرف الماصةEppendorf30076028 PLX5622أماديس كيماويكالA930097 تحويل عامل النمو-β1 (Tgf-b1)PeproTech100-21