تأخر فرط نوع (DTH) هو رد فعل التهابية بوساطة الخلايا الليمفاوية الذاكرة CCR7 - المستجيب (تيم) تي. نحن هنا لشرح كيفية تنشيط خلايا محددة مستضد TEM ، لحث DTH بالتبني في الفئران لويس ومراقبة الاستجابة للالتهابات.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الاستقراء والرصد من فرط الحساسية المتأخرة نوع بالتبني في الفئران
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تأخر فرط نوع (DTH) هو رد فعل التهابية بوساطة CCR7 - المستجيب الخلايا اللمفية تي الذاكرة التي اختراق موقع من حقن ضد مستضد التي كانت تستعد للنظام المناعي. ويتسم رد فعل التهابية بواسطة احمرار وتورم في موقع التحدي مستضدي. ذلك هو نموذج مناسب لتحديد فعالية في الجسم الحي للمناعة. يمكن أن يتسبب DTH الجلدي إما عن طريق نقل بالتبني من الخلايا الليمفاوية T مستضد محددة أو عن طريق التحصين النشط مع مستضد ، وتحديا لاحقة مع الأدمة للمستضد للحث على رد فعل التهابية في منطقة الجلد معين. يمكن أن يتسبب ردود DTH لمستضدات مختلفة ، على سبيل المثال ovalbumin ، التوبركولين ، التيتانوس ، أو ثقب المفتاح هيموسيانين اللزيق. ويمكن أيضا أن يتسبب مثل هذه التفاعلات ضد مستضد ذاتي ، على سبيل المثال لبروتين النخاعين الأساسي (MBP) في الفئران التي يسببها التهاب الدماغ و النخاع مع التجريبية الذاتية مع MBP ، نموذج حيواني لمرض التصلب المتعدد (1). نحن هنا لشرح كيفية تحفيز رد فعل بالتبني DTH في الفئران لويس. فإننا سوف تحفز الخلايا التائية first ovalbumin محددة في المختبر ، وحقن هذه الخلايا intraperitoneally تفعيلها للفئران ساذجة. بعد السماح للخلايا للتوازن في الجسم الحي لمدة 2 يوم ، فإننا سوف تحد من الفئران مع ovalbumin في الصيوان للأذن واحدة ، في حين أن الأذن الأخرى فيل تلقي المالحة. سيكون رد فعل التهابية تكون مرئية 3-72 ساعات في وقت لاحق ، وسيتم قياس سماكة الأذن كمؤشر لشدة DTH.
البروتوكول
1. تحفيز الخلايا اللمفية تي ovalbumin محددة
يتم تحفيز يستريح ovalbumin محددة مع الخلايا التائية ovalbumin في حضور المشع thymocytes الفئران لويس (30 غراي) وخلايا مولدة تقديم (ناقلات الجنود المدرعة) ، في تحفيز متوسطة (في تحضير الفيتامينات DMEM + + NEAA RPMI + قلم / بكتيريا / L - تخمة وأشار + + 2ME الجرذ المصل + Ovalbumin ، في تركيزات النهائي في قائمة المواد.)
إعداد مصل الجرذان
- نأخذ مصل من الفئران نضحي الجهات....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
ويمكن أيضا التحدي مستضدي أن يؤديها في مواقع أخرى ، على سبيل المثال في جلد الظهر (2). ومع ذلك نجد أن التحدي. استخدام الصيوان للأذن ، كما هو مبين في هذا الفيديو ، ويسمح لقياس أكثر دقة للتفاعل DTH.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
نشكر الدكتور الكسندر Flugel (Martinsried والمانيا) لتزويدنا GFP المسمى ، ovalbumin محددة خط الخلايا التائية المستخدمة في هذا البروتوكول.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| DMEM | GIBCO, بواسطة Life Technologies | 12430-062 | 500ml |
| بيروفات الصوديوم | Sigma-Aldrich | S8636 | التركيز النهائي 1 mM، في وسط التحفيز |
| البنسلين – الستربتومايسين – L-Glutamine | Cambrex/BioWhittaker | 17-718R | التركيزات النهائية على التوالي: 100 u/ml - 100 μg/ml - 4 mM، في وسط التحفيز |
| أحماض أمينية غير أساسية | Sigma-Aldrich | R7131 | NEAA، بتركيز نهائي 1%، في وسط التحفيز |
| فيتامينات RPMI | Sigma-Aldrich | R7256 | بتركيز نهائي 1%، في وسط التحفيز |
| بيتا-مركابت–إيثانول | Sigma-Aldrich | M6250 | 2ME، بتركيز نهائي 50 μM، في وسط التحفيز |
| مصل جرذ متماثل جينياً | بتركيز نهائي 1%. راجع الشرح في البروتوكول. | ||
| أوفالبومين | Sigma-Aldrich | A5503 | بتركيز نهائي 10 μg/ml، في وسط التحفيز. |
المراجع
- Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. , 166-936 (2001).
- Beeton, C., Chandy, K. G.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
