Method Article

تخصيب خلايا NK من دم الانسان مع مجموعة من تقنيات RosetteSep StemCell

DOI:

10.3791/326

October 1st, 2007

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخلايا القاتلة الطبيعية هي مجموعة صغيرة من الخلايا الليمفاوية. هنا نبين كيفية عزل هذه الخلايا من الدم البشري عن طريق الانتقاء السلبي ، وذلك باستخدام مجموعة من تقنيات StemCell. ويتم الحصول على الخلايا قادرة على البقاء وبمنأى عن الأجسام المضادة ، وبالتالي على استعداد لاستخدامها في عدد من الإجراءات.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الطبيعية القاتلة (ناغورني كاراباخ) الخلايا الليمفاوية كبيرة السامة للخلايا الحبيبية التي تنتمي إلى نظام المناعة الفطرية وتلعب أدوارا رئيسية في القتال ضد السرطان والالتهابات ، ولكن هي أيضا متورطة في المراحل الأولى من الحمل ورفض الزرع. هذه الخلايا موجودة في الدم المحيطي ، والتي يمكن عزلها. يمكن عزل الخلايا باستخدام اختيار إما إيجابية أو سلبية. لاختيار إيجابي نستخدم الأضداد الموجهة إلى علامة السطحية موجودة فقط على الخلايا التي تهم لاختيار سلبية في حين نستخدم خليط من الأجسام المضادة التي تستهدف علامات موجودة على سطح الخلايا ولكن كل الخلايا ذات الاهتمام. يقدم هذا الأسلوب الأخير في الاستفادة من ترك خلايا مصلحة خالية من الأجسام المضادة ، مما يقلل من خطر تنشيط الخلايا غير المرغوب فيها أو differenciation. في هذا البروتوكول عن طريق الفيديو نظهر كيفية فصل الخلايا القاتلة الطبيعية من الدم البشري عن طريق الانتقاء السلبي ، وذلك باستخدام مجموعة من التقنيات RosetteSep StemCell. الإجراء ينطوي على الحصول على الدم المحيطي الإنسان (تحت المراجعة المؤسسية التي أقرها المجلس التنفيذي لبروتوكول حماية الموضوعات البشرية) وخلطها مع مزيج من الأجسام المضادة التي من شأنها ربط علامات غائبا عن الخلايا القاتلة الطبيعية ، ولكنها موجودة على كل الخلايا وحيدة النواة الأخرى الموجودة في الطرفية الدم (مثل الخلايا اللمفية تي ، وحيدات...). الأجسام المضادة الموجودة في الكوكتيل هي مترافق إلى الأجسام المضادة الموجهة إلى glycophorin وكريات الدم الحمراء في. وبالتالي فإن جميع الخلايا غير المرغوب فيها وتكون خلايا الدم الحمراء محاصرين في المجمعات. ثم يتم تخفيف المزيج من الكوكتيل الدم والأجسام المضادة ، overlayed على التدرج Histopaque ، وطرد. ويمكن جمع الخلايا القاتلة الطبيعية (> 80 ٪ نقية) في واجهة بين Histopaque والبلازما المخفف. زجاجات مماثلة متوفرة للتخصيب السكان خلية أخرى ، مثل الخلايا اللمفية تي الإنسان.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم تضمين بروتوكول مفصلة مع كل العزلة روزيت كوكتيل سبتمبر ومتاحة على الانترنت على موقع التكنولوجيات StemCell 1.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويمكن عزل الخلايا باستخدام هذه التقنية فصل السكان الى مزيد من مجموعات أخرى مختلفة باستخدام العازل الخلية.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

ولا بد من تقديم برنامج تلفزيوني تستكمل مع FCS 2 ٪ والحلول Histopaque إلى درجة حرارة الغرفة قبل بداية العملية.

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Procedures and instruction manuals. , http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx Forthcoming.
....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

NK Cell EnrichmentNegative SelectionRosetteSep KitHuman BloodHistopaque GradientFlow CytometryCell IsolationAntibody CocktailCentrifugation ProtocolNatural Killer Cells

Related Articles