الإعطاء الوريدي لنواقل الفيروسات المؤتلفة المرتبطة بالغدة في نموذج الفئران

الملخص

المصدر: Grames, M. S., et al. طرق ونصائح للإعطاء عن طريق الوريد للفيروس المرتبط بالغدة إلى الفئران وتقييم نقل الجهاز العصبي المركزي. J. Vis. Exp. (2017)

يوضح هذا الفيديو حقن وريد الذيل للفيروس المؤتلف المرتبط بالغدة (AAV) في الفئران. بعد الحقن في الوريد الجانبي ، يدخل الفيروس إلى مجرى الدم ، ويدور عبر القلب ، ويصل إلى الدماغ ، حيث يدخل الخلايا العصبية ويسهل إنتاج البروتين المستهدف لتطبيقات العلاج العصبي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. قم بإعداد نمط الفئران

1. اقلب الأكسجين حتى 1 لتر / دقيقة واضبط تخدير الأيزوفلوران على 5٪. تأكد من تدفق التخدير بالغاز إلى غرفة الحث عن طريق فحص جميع خراطيم التوصيل واتجاهات محبس.
2. ضع الجرذ في غرفة تحريض التخدير بالغاز لمدة 3 دقائق تقريبا حتى لا يستجيب الجرذ.
3. تأكد من عمق التخدير الكافي عن طريق الضغط على إصبع القدم. يجب ألا تكون هناك حركة في القدم أو الساق بعد قرصة إصبع القدم.
4. قلل تخدير الأيزوفلوران إلى 2٪ للصيانة واضبط محبس التثبيت بحيث يتدفق التخدير إلى قناع التخدير.
5. ضع أنف الجرذ في قناع التخدير واضبط الجرذ بحيث يكون مستلقيا على جانبه.
6. حدد وريد الذيل الجانبي.
   ملاحظة: تقع عروق الذيل الجانبية عند حوالي الساعة 10 و 2 ، مع الجزء العلوي الظهري من الذيل عند موضع الساعة 12. مع استلقاء الجرذ على جانبه ، يجب أن يكون وريد الذيل الجانبي متجها لأعلى.
7. امسح منطقة الحقن بضمادة تحضير الكحول. يقع موقع الحقن على بعد ثلثي طول الذيل.

2. حقن المتجه

1. أمسك الذيل بإحكام فوق منطقة الحقن بإصبع واحد مباشرة فوق وريد الذيل الجانبي ؛ سيؤدي ذلك إلى توسيع الوريد.
2. مع توجيه الشطبة لأعلى ، قم بمحاذاة الإبرة مع وريد الذيل المرئي في نفس الاتجاه.
3. اخترق الجلد فوق وريد الذيل مع الحرص الشديد على تجنب إمساك اليد الأخرى بالذيل والضغط على وريد الذيل.
4. حرر الضغط من وريد الذيل للسماح بتدفق الدم الطبيعي.
5. حرك الإبرة في الوريد. للتأكد من أن الإبرة قد ثقبت الوريد الذيل ، اسحب قليلا على المكبس. إذا كانت الإبرة في الوريد ، فسوف يتدفق الدم إلى الإبرة.
   1. أعد وضع الإبرة حسب الحاجة. بعد ذلك ، لتثبيت الإبرة ، حرك اليد فوق موقع الحقن إلى أسفل موقع الحقن وامسك نهاية المحقنة بالذيل.
قم
6. بحقن المتجه ببطء في الذيل (حوالي 20 ميكرولتر / ثانية).
   ملاحظة: قد يفقد الوريد لونه أثناء تدفق المتجه من خلاله. تشمل العلامات التي تدل على حقن المحلول خارج الوريد الفقاع أو ابيضاض الجلد أو المقاومة عند حقن الناقل. مع الممارسة ، يمكن تقليل التعرض خارج الأوعية الدموية.
7. بعد إعطاء الناقل ، قم بإزالة الإبرة من الجرذ واضغط على وسادة شاش على موقع الحقن للمساعدة في وقف النزيف لمدة 30 - 60 ثانية.

3. تنظيف

1. قم بإيقاف تشغيل التخدير والأكسجين الأيزوفلوران. راقب الجرذ حتى يستعيد وعيه ، ثم أعده إلى قفصه.

المواد

< فئة الشكل = 'الجدول' >< فئة الجدول = 'ck-table-ressize'> قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 1 مل حقنةBD309626يأتي مع إبرة 25 جراما متصلة. استبدلها بإبرة 27-30 جم للحقن30 جم إبرةBD305106 IsofluranePiramal Healthcare66794-013-25Isoflurane USP 250 ملقناع التخديرKopf Instruments906 GauzeHenry Schein100-25242 "× 2" (5 سم × 5 سم) مبخر تخدير الغازSurgiVet4214322كلاسيك T3زبال التخدير بالغازSurgiVet32373B10Enviro-PUREوسادة تسخينسيرز17280 70٪ مختبرات الإيثانولديكون ، Inc.2401140 برهان70٪ إيزوبروبانولVWR89108-160