مقالة منهجية

الكهربائية الميدانية التي تسيطر عليها هجرة إخراج من الخلايا العصبية السلف في البيئات 2D و 3D

DOI:

10.3791/3453

⸱

فبراير 16, 2012

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Dentistry, Cardiff Institute of Tissue Engineering & Repair, Cardiff University , 2Shandong Qianfoshan Hospital, Shandong University School of Medicine, 3Dermatology and Ophthalmology Research, Institute for Regenerative Cures, University of California at Davis

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا البروتوكول يوضح الأساليب المستخدمة في تهيئة بيئات 2D و 3D في غرف electrotactic مصمم خصيصا، والتي يمكن تعقب الخلايا في الجسم الحي / خارج الحي استخدام الوقت الفاصل بين تسجيل على مستوى خلية واحدة، من أجل التحقيق في انجذاب غلفاني / انجذاب كهربي والاستجابات الخلوية الأخرى إلى تيار مباشر (DC) المجالات الكهربائية (EFS).

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الحقول الكهربائية الذاتية (EFS) بشكل طبيعي في الجسم الحي، وتلعب دورا حاسما خلال الأنسجة / جهاز تنمية والتجديد، بما في ذلك من 1،2 الجهاز العصبي المركزي. يتم إنشاء هذه الأجزاء التماثلية الصور الذاتية عن طريق التنظيم الخلوي للنقل الأيونية جنبا إلى جنب مع المقاومة الكهربائية من الخلايا والأنسجة. فقد أفيد أن التطبيقية EF العلاج يمكن أن يشجع على إصلاح وظيفي من إصابات في النخاع الشوكي في الحيوانات والبشر 3،4. على وجه الخصوص، وقد تجلى EF الموجه هجرة الخلية في مجموعة واسعة من أنواع الخلايا 5،6، بما في ذلك الخلايا العصبية السلف (الشخصيات) 7،8. تطبيق مباشر الأجزاء التماثلية الصور (DC) الحالية ليست تقنية متاحة عادة في معظم المختبرات. وقد وصفت نحن بروتوكولات مفصلة لتطبيق الأجزاء التماثلية الصور DC إلى الخلايا والأنسجة الثقافات 5،11 سابقا. هنا نقدم تظاهرة الفيديو من الأساليب القياسية استنادا إلى قوة الحقل المحسوب لاقامة 2D 1د بيئات 3D لاللجان التحضيرية الوطنية، والتحقيق في الاستجابات الخلوية لتحفيز EF في كل الظروف نمو الخلايا واحد في 2D، وعضوي النمط شريحة الحبل الشوكي في 3D. وcordslice الشوكي هو نسيج المتلقي المثالي لدراسة السلوكيات مجلس الوطنى المجراة سابقا، في مرحلة ما بعد زراعة الأعضاء، لأنه يتم الحفاظ عليها بشكل جيد في تنظيم أنسجة التهندس الخلوي ضمن هذه الثقافات 9،10. وبالإضافة إلى ذلك، وهذا النموذج الحي السابقين يسمح أيضا الإجراءات التي لم تكن ممكنة من الناحية التقنية لتعقب الخلايا في الجسم الحي باستخدام الوقت الفاصل بين تسجيل على مستوى خلية واحدة. من الضروري للغاية لتقييم السلوكيات خلية في بيئة ليس فقط 2D، ولكن أيضا في حالة من عضوي النمط 3D التي mimicks على البيئة في الجسم الحي. وسوف يسمح هذا النظام عالية الدقة التصوير باستخدام غطاء زجاجي على أساس الأطباق في الأنسجة أو ثقافة الجهاز مع تتبع 3D الهجرة خلية واحدة في المختبر، والمجراة سابقا ويمكن أن تكون خطوة وسيطة قبل الانتقال الى السادسنماذج فو.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. العصبية العزلة السلف الخلية

  1. تشريح دماغ كامل من E14-16 الفئران والمتوسطة في مكان بارد DMEM/F12 القاعدية. إزالة جميع السحايا تحت مجهر تشريحي والعقول نقل في طبق بيتري 35 ملم.
  2. استخدام ملقط غرامة على فصل ميكانيكيا العقول إلى أجزاء الأنسجة ونقلها إلى أنبوب 15 مل، أجهزة الطرد المركزي ثم العينات في 800 دورة في الدقيقة لمدة 3 دقائق لإزالة الأنقاض.
  3. إضافة DMEM/F12 bFGF والتي تحتوي على صندوق تعديل العولمة الأوروبي ويسحن مع ماصة 1 مل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتستند البروتوكولات التي نستخدمها في الدراسات السابقة 5،11. يمكن الحفاظ على الأوضاع الحالية باستخدام هذه الأساليب، ثقافة مستقرة والكهربائية في حين بتطبيق EF عبر الجسور أجار، حل شتاينبرغ، والأقطاب الكهربائية AG / أجكل، إلى خلايا أو شرائح تربيتها في غرف electrotactic مصمم خصيصا من أبعاد موحدة ودقيقة. ويمكن تعديل عمق الغرف لاستيعاب لعينة مختلفة سمك 11، وذلك في حالة من الخلايا، ويمكن تعديل حجم غرفة لاستيعاب لكن هناك حاجة العديد من الخلايا (على سبيل المثال تحليل ل.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدينا ما يكشف.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل من قبل المنحة الملكية URF المجتمع UF051616، المملكة المتحدة، ومجلس البحوث الأوروبي STG منحة 243261 إلى BS. كما يدعم العمل في مختبر MZ من معهد كاليفورنيا للالتجدد الطب منحة RB1-01417.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
اسم كاشف شركة فهرس العدد تعليقات
جمعية جيل المستقبل، من حقوق الإنسان الأساسية المؤتلف إينفيتروجن PHG0026 20 نانوغرام / مل
EGF الإنسان المؤتلف إينفيتروجن PHG0311 20 نانوغرام / مل
N2-الملحق (100X) السائل إينفيتروجن 02048
DMEM/F12 المتوسطة (الجلوكوز عالية) إينفيتروجن 31330-095
بولي-D-ليسين ميليبور A-003-E
الطبيعية الماوس Laminin إينفيتروجن 23017-015
تخفيض عامل النمو البدروم مصفوفة غشاء (Matrigel) العلوم البيولوجية دينار بحريني 354230
HEPES العازلة Gibco 15630
McIlwain الأنسجة المروحية وMickle مختبر الهندسة المحدودة TC752-PD
داو كورنينج الشحوم سيليكون عالية فراغ سيغما الدريخ Z273554

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Huttenlocher, A., Horwitz, A. R. Wound healing with electric potential. N. Engl. J. Med. 356, 303-303 (2007).
  2. McCaig, C. D., Rajnicek, A. M., Song, B. Controlling cell behavior electrically: current views and future potential. Physiol. Rev. 85, 943-943 (2005).
  3. B....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة