التحليل الكمي للهجرة عشوائية من الخلايا باستخدام الوقت الفاصل بين الميكروسكوب فيديو

Summary

هذا الأسلوب يسمح للرصد من الخلايا في الوقت الحقيقي، والقياسات الكمية من مختلف المعلمات هجرة الخلية مثل السرعة، والتشريد، والسرعة. وعلى عكس الطرق التقليدية، لا يستند هذا النهج في الوقت الحقيقي على قياسات نقطة النهاية الهجرة كمي وبدلا من ذلك لأنها تتيح مراقبة وحساب معايير مختلفة بشكل مستمر.

Abstract

هجرة الخلية هي عملية دينامية، وهو أمر مهم لنمو الجنين، وإصلاح الأنسجة، وظيفة نظام المناعة، وغزو ورم ^{1 و 2.} أثناء الهجرة اتجاهي، وخلايا التحرك بسرعة استجابة لإشارة الكيميائي خارج الخلية، أو استجابة لمنبهات جوهري ³ التي قدمتها الحركة الآلية الأساسية. الهجرة العشوائية يحدث عندما خلية تمتلك الاتجاهية جوهري منخفض، مما يسمح للخلايا لاستكشاف بيئتهم المحلية.

هجرة الخلية هي عملية معقدة، في الخلية الاستجابة الأولية يخضع الاستقطاب ويمتد نتوءات في اتجاه هجرة ^2. الطرق التقليدية لقياس الهجرة مثل الهجرة بويدن غرفة الفحص هو وسيلة سهلة لقياس الكيميائي في المختبر، والتي تسمح بقياس الهجرة باعتبارها النتيجة النهائية نقطة. ومع ذلك، فإن هذا النهج لا يتيح قياس المعلمات الهجرة الفردية، كما أنها لا تسمح لvisualization من تغيرات شكلية تلك الخلية يمر خلال الهجرة.

هنا، نقدم وسيلة تسمح لنا لرصد الخلايا المهاجرة في الوقت الحقيقي باستخدام الفيديو - المجهر وقت مضي. منذ هجرة الخلية والغزو هي السمات المميزة لمرض السرطان، وهذه الطريقة يمكن تطبيقها في دراسة سرطان الخلية الهجرة والغزو في المختبر. وقد اعتبر هجرة عشوائية من الصفائح الدموية واحدة من المعلمات من ⁴ وظائف الصفائح الدموية، وبالتالي يمكن لهذا الأسلوب يكون من المفيد أيضا في دراسة وظائف الصفائح الدموية. هذا فحص لديها ميزة كونها وموثوقة السريع، واستنساخه، ولا تحتاج إلى الاستغلال الأمثل للأرقام الخلية. من أجل المحافظة على ظروف ملائمة من الناحية الفسيولوجية للخلايا، وقد تم تجهيز المجهر مع العرض ₂ أكسيد الكربون والحرارة درجة الحرارة. ويتم رصد حركة الخلايا من قبل التقاط الصور باستخدام كاميرا مزودة للمجهر على فترات منتظمة. ويمكن حساب هجرة الخلية بواسطة قياس متوسط ​​السرعة والنزوح verage، الذي يحسب بواسطة برنامج Slidebook.

Protocol

1. إعداد لوحة مطلية مع الكولاجين

1. إضعاف الكولاجين لتركيز النهائي من 10 ميكروغرام / مل في غروب، م وسائل الإعلام.
2. معطف 6 لوحات بشكل جيد مع الكولاجين، وذلك بإضافة 1.5 مل من الخطوة 1 إلى كل بئر. احتضان بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
3. في اليوم التالي، وغسل لوحة 2 مرات مع الفوسفات 1X مخزنة المالحة (PBS) وتخزينها في برنامج تلفزيوني.

2. تحضير الخلايا والبذر على طبق من 6 جيد <....

Discussion

في الوقت الحقيقي فحص الهجرة العشوائية تمكن، حساس دقيق، وتحليل المعلمات هجرة الخلية مثل السرعة والتشريد. لا يقتصر هذا الأسلوب لانهاء نقطة قياس قيمة، وبالتالي فإنه من الكمية. منذ ذلك الحين، ويتم رصد الخلايا في المتوسط ​​DMEM طبيعية مع مصل الدم، فإنه يقلل من التأثير الضار لليعد حضانة في وسائل الإعلام الحرة في المصل. وقد تبين أن الهجرة من الخلايا يعتمد على التنسيق وكسر اتصالات الخلية مع قوام ^8، وبالتالي، يمكن أن تستخدم هذه الطريقة لدراسة تأثير مختلف الطبقات التحتية في مجال .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
اسم كاشف	شركة	فهرس العدد	تعليقات
DMEM	الحرارية العلمية	SH30243.01
FBS	الجوزاء المنتجات الحيوية	100-106
OPTI-م	إينفيتروجن	31985-070
الكولاجين	دينار بحريني	354231
مجهر مع غرفة خلية حية وتحكم الآلي مرحلة XY	أوليمبوس	OLYMPUS 1X81
غرفة التحكم البيئي	نويه	نويه غرفة لايف خلية	لنا لديه مخصصة لبناء لوحة زجاجية مستطيلة الشكل الأعلى للبصريات المناسبة من خلال الجزء العلوي من القاعة. على شكل مستطيل يستوعب جيدا لوحات متعددة تستخدم في العديد من التجربه لديناTS.
الآلي XY مرحلة	قبل	Proscan قبل	وهذا يسمح بعودة دقيقة لضرب مواقع مختارة XY خلال الفحص المجهري مرور الوقت.
كاميرا		هاماماتسو EM كاميرا C9100
البرنامج	شراؤها عادة من خلال بائع مجهر مثل أوليمبوس	كتاب الشريحة رقم 5