مقالة منهجية

التحليل الكمي للهجرة عشوائية من الخلايا باستخدام الوقت الفاصل بين الميكروسكوب فيديو

DOI:

10.3791/3585

⸱

مايو 13, 2012

 ,  , 
1Department of Biochemistry and Molecular Biology, LSU School of Medicine, 2Department of Oral Biology, LSU School of Dentistry, 3Stanley S. Scott Cancer Center, LSU School of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا الأسلوب يسمح للرصد من الخلايا في الوقت الحقيقي، والقياسات الكمية من مختلف المعلمات هجرة الخلية مثل السرعة، والتشريد، والسرعة. وعلى عكس الطرق التقليدية، لا يستند هذا النهج في الوقت الحقيقي على قياسات نقطة النهاية الهجرة كمي وبدلا من ذلك لأنها تتيح مراقبة وحساب معايير مختلفة بشكل مستمر.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هجرة الخلية هي عملية دينامية، وهو أمر مهم لنمو الجنين، وإصلاح الأنسجة، وظيفة نظام المناعة، وغزو ورم 1 و 2. أثناء الهجرة اتجاهي، وخلايا التحرك بسرعة استجابة لإشارة الكيميائي خارج الخلية، أو استجابة لمنبهات جوهري 3 التي قدمتها الحركة الآلية الأساسية. الهجرة العشوائية يحدث عندما خلية تمتلك الاتجاهية جوهري منخفض، مما يسمح للخلايا لاستكشاف بيئتهم المحلية.

هجرة الخلية هي عملية معقدة، في الخلية الاستجابة الأولية يخضع الاستقطاب ويمتد نتوءات في اتجاه هجرة 2. الطرق التقليدية لقياس الهجرة مثل الهجرة بويدن غرفة الفحص هو وسيلة سهلة لقياس الكيميائي في المختبر، والتي تسمح بقياس الهجرة باعتبارها النتيجة النهائية نقطة. ومع ذلك، فإن هذا النهج لا يتيح قياس المعلمات الهجرة الفردية، كما أنها لا تسمح لvisualization من تغيرات شكلية تلك الخلية يمر خلال الهجرة.

هنا، نقدم وسيلة تسمح لنا لرصد الخلايا المهاجرة في الوقت الحقيقي باستخدام الفيديو - المجهر وقت مضي. منذ هجرة الخلية والغزو هي السمات المميزة لمرض السرطان، وهذه الطريقة يمكن تطبيقها في دراسة سرطان الخلية الهجرة والغزو في المختبر. وقد اعتبر هجرة عشوائية من الصفائح الدموية واحدة من المعلمات من 4 وظائف الصفائح الدموية، وبالتالي يمكن لهذا الأسلوب يكون من المفيد أيضا في دراسة وظائف الصفائح الدموية. هذا فحص لديها ميزة كونها وموثوقة السريع، واستنساخه، ولا تحتاج إلى الاستغلال الأمثل للأرقام الخلية. من أجل المحافظة على ظروف ملائمة من الناحية الفسيولوجية للخلايا، وقد تم تجهيز المجهر مع العرض 2 أكسيد الكربون والحرارة درجة الحرارة. ويتم رصد حركة الخلايا من قبل التقاط الصور باستخدام كاميرا مزودة للمجهر على فترات منتظمة. ويمكن حساب هجرة الخلية بواسطة قياس متوسط ​​السرعة والنزوح verage، الذي يحسب بواسطة برنامج Slidebook.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. إعداد لوحة مطلية مع الكولاجين

  1. إضعاف الكولاجين لتركيز النهائي من 10 ميكروغرام / مل في غروب، م وسائل الإعلام.
  2. معطف 6 لوحات بشكل جيد مع الكولاجين، وذلك بإضافة 1.5 مل من الخطوة 1 إلى كل بئر. احتضان بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
  3. في اليوم التالي، وغسل لوحة 2 مرات مع الفوسفات 1X مخزنة المالحة (PBS) وتخزينها في برنامج تلفزيوني.

2. تحضير الخلايا والبذر على طبق من 6 جيد

ملاحظة: استخدام وسائل الاعلام الحارة وبرنامج تلفزيوني لضمان أفضل الظروف لحركة الخلية

  1. تنمو MDA-MB-231 (1 بسرطان الثدي خط خلية) قليلة في متوسطة Dulbecco والنسر المحورة (DMEM) مع 10٪ مصل بقري جنيني (FBS). في هذا المثال، فإننا نستخدم MDA-MB-231، ومع ذلك، يمكن تطبيق هذه الطريقة على أي تمسكا سرطاني وغير خطوط الخلايا السرطانية.
  2. غسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني 1X الحارة وجمع من قبل trypsinization. فحص الخلايا تحت المجهر لجعل سوإعادة أن يتم فصل الخلايا بشكل صحيح عن طريق العلاج التربسين.
  3. جمع الخلايا من خلال إضافة DMEM المتوسطة مع FBS 10٪، وتدور بلطف إلى أسفل الخلايا في ز 1000 لمدة 5 دقائق. Resuspend وبيليه خلية بلطف في المتوسط ​​DMEM مع FBS 10٪.
  4. كسر بيليه الخلية بواسطة pipetting بلطف صعودا ونزولا. من المهم لكسر كتل الخلية إلى الخلايا الفردية إلى أقصى حد ممكن.
  5. عد الخلايا وتمييع لتركيز النهائي من 50000 خلية / مل في وسائل الاعلام DMEM مع FBS 10٪. الاستغناء 2 مل في كل بئر.
  6. احتضان لوحة في 37 درجة مئوية في نسيج حاضنة الثقافة بين عشية وضحاها، حتى بدء المجهري مرور الزمن.
  7. لضمان مساحة واسعة للهجرة، وخلق الجرح باستخدام طرف ماصة، وغسل لوحة مع برنامج تلفزيوني 1X لإزالة الأنقاض (تشكلت نتيجة لجرح) وإضافة DMEM مع FBS 10٪. فحص تحت المجهر للخلايا العائمة. إذا أعداد كبيرة من الخلايا العائمة، كرر الإجراء الغسيل. الآن، لوحة على استعداد ليكون الإعداد علىمجهر لاكتساب صورة.

3. الإعداد الآلي المجهر والحصول على صورة

هناك العديد من حزم البرامج التي تتحكم في التصوير المجهر لاكتساب صورة الآلي. هنا، ونحن نستخدم Slidebook برامج التصوير 5.0 ويتم تنفيذ عمليات الاستحواذ التلقائي على مجهر أوليمبوس (أوليمبوس IX81)، إضافة إلى الكاميرا C9100 EM-هاماماتسو، وهي ممتازة لحية خلية التطبيقات حيث سرعة اقتناء والضيائية الحد الأدنى من أهمية قصوى. ويشمل النظام مرحلة أعلى غرفة التحكم البيئي (نويه لايف الخلية)، ومرحلة XY الآلي وحدة تحكم (Proscan السابقة). يتم الحصول على صور بهدف و10X Ph1/0.30 UPLANFL، في وضع حقل مشرق، وذلك باستخدام فترة زمنية محددة. بروتوكول التالية توضح الحصول على الصور.

  1. تشغيل المجهر، والكاميرا، وجهاز التصوير الحي الخلية. وضع لوحة على مدى مرحلة المجهرية. تغطية لوحة من قبل خلية نويه ENVI لايفronmental غرفة التحكم، وهذا مرتبط مع العرض CO 2 وأجهزة استشعار درجة الحرارة. ضبط الحرارة عند 37 درجة مئوية و CO 2 بنسبة 5٪.
  2. SlideBook البرنامج يسمح مؤتمتة بالكامل اختيار الهدف، واختيار الطول الموجي، وسهولة التبديل بين التقنيات مجال الفلورسنت ومشرق. من أجل وضع معايير مختلفة من تركيز الرقابة، مفتوحة SlideBook البرمجيات> انتقل إلى شريط القوائم> تركيز الرقابة مختارة، وذلك بالنقر> figure-protocol-1 وحدد المعلمات التالية:
    1. في مربع "الهدف" تحديد الهدف عن طريق اختيار من القائمة المنسدلة الإطار. لاحظ اننا نستخدم هدف المرحلة وحددت يدويا عصابة المرحلة المناسبة في المكثف. في حالة استخدام نظام مع مكثف الآلي، سيتم تلقائيا تعيين هذا من خلال برنامج حاسوبي. بدلا من ذلك، فإذا ما آليا لا هدف ولا برج مكثف كل هؤلاء سيتم اختيار دليللاي.
    2. في "تصفية المجموعة" مربع:
      1. تحديد إعدادات لتوجيه مسار الضوء إلى العدسة إما أو الكاميرا من القائمة المنسدلة لترى المرشحات المتاحة ("لايف" عن العدسة، "Widefield" للكاميرا في نظامنا).
      2. اختيار مرشح مناسب لإضاءة brightfield (في مجموعة لدينا ما يصل، وصفت هذا الخيار "مدينة دبي للإنترنت" والذي يمثل موقف فتح للمسار ضوء brightfield).
      3. حدد مصدر الضوء من خلال النقر على "برايت فتح" لفتح مصراع مجال مشرق.
  3. لعرض عينة تحت قطعة العين، واختيار مرشح مجال مشرق (موقف "6" في نظامنا) على برج. بعد عرض في البداية في عينة من خلال العدسة للعثور على الحقول المناسبة وتقديم العينة إلى التركيز (خطوات 3.2.1 إلى 3.2.2.3). نقل برج مرشح لتغيير مسار الضوء إلى الكاميرا لالتقاط الصور (موقف "1" في نظامنا).
  4. المرحلة الآلي يسمح للاختيار من مختلف التنسيقي XYالاحصائيين للقبض على حقول متعددة من الاهتمام خلال الحصول على الصور. في مجال البرمجيات SlideBook، انتقل إلى تركيز الرقابة، وحدد "س ص"، حدد مواقع مختلفة على الرغم من أن قطعة العين، ثم انقر فوق "تعيين نقطة" لوك في كل مكان لالتقاط الصور (الشكل 1).
  5. غرامة تصل قيمتها التركيز في صورة الكاميرا التي يتم عرضها على الشاشة. ويمكن تحقيق هذا باستخدام عناصر التحكم اليدوي في المجهر أو الضوابط الكمبيوتر، والتي يمكن ضبط التركيز بزيادات أدق من ذلك بكثير.
  6. باستخدام عناصر التحكم في إطار "التركيز عناصر"، وضبط الموقف ض المرحلة. للحصول على أفضل النتائج، والتركيز على نتوءات الخلوية شقة بالقرب من الاتصال مع لوحة.
  7. للمساعدة مع التركيز استخدام شريط التمرير لضبط أوقات التعرض ليكون في مجموعة مناسبة للتركيز. إذا تم اختيار العديد من المناصب XY، وضبط التركيز في كل موقف فردي: تحت السيطرة المركزية> زيارة> XY نقطة. ملاحظة: يتم ذلك للتأكد من، الفي المجالات التي تركز بشكل صحيح للحصول على لقطة مثالية.
  8. استخدام البرنامج لإعداد المعلمات التقاط نافذة. في SlideBook، فتح الاستيلاء عن طريق تحديد figure-protocol-2 من شريط القوائم. انظر الشكل 2. نحن ثم تحقق من المعلمات التالية.
    1. تحقق التقاط> كنوع الفاصل الزمني.
    2. تحقق مجموعة التصفية: حقل واسع: مدينة دبي للإنترنت (للصورة حقل مشرق).
    3. "وقت القبض على انقضاء" هو عدد من النقاط الزمنية التي سيتم القبض على (أنه يمكن أن تختلف، اعتمادا على نوع من الخلايا). المدة هو مجموع طول الوقت لتجربة. يمكن اختيار وحدات من الوقت [في ميلي ثانية (مللي ثانية)، ثانية (ق)، دقيقة (م) أو ساعة (ح)] من القائمة المنسدلة.
    4. "الفاصل الزمني" هو التأخير بين بداية واحدة timepoint وبداية timepoint المقبل. كما كنت اكتب في اثنين من هذه القيم، سوف يتم حساب الحقل الثالث تلقائيا.
    5. القبض على عدة XY: تحديد "متعددةقائمة نقطة "لموقف XY أكثر من 1.
    6. اسم الملف. في المثال المذكور، وقد سميت نحن عليه '231 '.
  9. لتجنب اغلاق غير متوقع من الكمبيوتر بسبب صور متعددة، واستخدام "خيار التخزين المؤقت" لحفظ الملف. هذا هو اختياري، ولكن ينصح بشدة. لهذا الغرض، تحت التقاط كنترول ل> تحديد خيارات متقدمة> بكرة> القبض على الذاكرة والحفظ إلى ملف التخزين المؤقت بعد كل مرة نقاط. تصفح موقع لحفظ ملف الكتاب الشريحة (الشكل 3). يمكن استيراد الفيلم ولدت في وقت لاحق من مكان معين. وقد تم تلخيص خطوات الإعداد المجهر في ملف 3.1 .

4. ومعالجة الصور وتحليل للهجرة: حساب سرعة والنزوح

في هذا المثال، ويتم معالجة الصور بواسطة SlideBoموافق 5 و 6 5.0 البرمجيات. هناك برامج أخرى مختلفة مثل يماغيج (7) لمعالجة الصور وتحليلها.

  1. استيراد ملفات SlideBook المتولدة من الصور من مختلف المجالات في نقاط زمنية مختلفة. انتقل إلى شريط القوائم> تحت صورة> استيراد> كتاب الشرائح بكرة> حدد الملف المطلوب (الشكل 4A).
  2. هنا هدفنا هو تتبع حركة الخلايا الفردية. ويمكن أن يتم ذلك باستخدام تتبع الآلي أو تتبع الفردية. في المثال، ونحن قد استخدمت تتبع الخط، لأن هذا يسهل استبعاد القطع الأثرية بسهولة، والذي هو أكثر صعوبة مع التتبع الآلي.
  3. فتح الملف SlideBook، والتي لدينا لأداء تتبع. تحت القائمة: قناع تحديد> الجسيمات بروتوكول تعقب> بروتوكول الجسيمات دليل تتبع الشكل (4B). وسوف تظهر نافذة مع نقطة بداية ونهاية الوقت (الشكل 4C).
  4. Begin لتتبع حركة الخلايا الفردية بواسطة الضغط على مركز كل خلية (نواة). وينبغي اختيار تتبع ما يقرب من 10 خلايا من كل فيلم، وعلى الأقل ثلاثة أفلام مختلفة من مواقع مختلفة بحيث سيتم تحليل ما يقرب من 30 خلايا من تجربة واحدة. وينبغي تكرار التجربة كل ثلاث مرات. للسماح اتباع نهج غير متحيز، حدد الخلايا من مواقع مختلفة مثل بعض الخلايا من الجبهة، وما إلى ذلك وسط الزوايا، انقر على "موافق"، مرة واحدة ويتم تتبع.
  5. ويمكن تحليل الهجرة العشوائية عن طريق قياس التغيرات في سرعة وما إلى ذلك، سرعة أو الإزاحة لتحليل البيانات، تحت القائمة> قناع حدد> تتبع الجسيمات تتبع الجسيمات> بروتوكول. حدد المعلمات تعقب على النحو المبين أدناه: (الشكل 5A):
    1. المسار مع - حدد المعلمة التي ترغب في تتبع من القائمة المنسدلة. في هذا المثال، استخدمنا، وسط منطقة (إحداثيات مركز التوليدject).
    2. انقر على "تعقب ومتابعة". مرة واحدة تتبع كاملة، وهذا سوف تقدم تلقائيا الى الخطوة التالية.
  6. اختيار الاحصاءات المطلوب لكل مسار، مثل التهجير ومتوسط ​​السرعة (انظر الشكل 5B):
    1. متوسط ​​السرعة - سافر تقسيم المسافة الإجمالية من الوقت اللازم لقطع هذه المسافة.
    2. مجموع المهجرين - المسافة الإجمالية التي يقطعها الجسم.
    3. انقر على زر "حساب ومتابعة" إذا كنت ترغب في التقدم إلى الخطوة التالية، أو اختيار "حساب" إذا كنت ترغب في عرض الإحصائيات الخاصة بك من دون الذهاب الى الخطوة التالية. وسيتم إنشاء ملف التي يمكن حفظها في ملف نص ويمكن في وقت لاحق يتم تصديرها إلى Excel.
  7. من أجل تتبع الكائنات باستخدام بروتوكول تتبع الآلي، لأول مرة قناع لابد من خلق.
    1. حدد قناع> صورة قطعة> نافذة قطعة على ما يبدو> حدد حتى يتم تحقيق الحد الأدنى من هذا القبيل أن سبتمبرarating كائن واحد من الآخرين> فوق تطبيق> موافق (انظر الشكل 5C). الخطوة 4.5.1 هو نفسه.
    2. إزالة كائنات أصغر من - حدد هذا المربع لإزالة انتقائي كائنات أصغر من حجم معين. أدخل الحجم في مجال تحرير واختيار إما ميكرون أو بكسل كوحدة. ويستخدم هذا لإزالة الآثار الناجمة عن الحطام في كثير من الأحيان.
    3. حركة الحد الأدنى - دخول أقل عدد من النقاط الزمنية التي يجب أن تتبع من أجل تحديد مسار.
    4. الحد الأقصى لحركة - دخول حركة القصوى التي تتوقعها من أي كائن معطى من نقطة زمنية واحدة إلى أخرى.
    5. خطوات لتحليل البيانات هي نفسها كما تتبع الخط (راجع الخطوات 4.5.2 إلى 4.6.2).

5. ممثل النتائج

مثال لتحليل الهجرة العشوائية كميا كما من حيث السرعة والتشريد (الشكل 6). بعد تصدير ملف تيس Excel، يتم رسم البيانات باستخدام مربع ومؤامرة شعيرات. يتم إجراء التحليل الإحصائي مقارنة التشرد الكلي ومتوسط ​​السرعة بين اختبار ومراقبة استخدام مان ويتني اختبار. عينة الاختبار يظهر زيادة في متوسط ​​السرعة بالمقارنة مع السيطرة. عينة الاختبار يظهر زيادة في عدد الأشخاص النازحين داخليا بالمقارنة مع السيطرة.

وفازت المصنفة تحكم MDA-MB-231 واختبار MDA-MB-231 الخلايا على الكولاجين بين عشية وضحاها: فيلم عن نطاق السيطرة واختبار. تم تنفيذ الوقت الفاصل بين المجهري الفيديو بواسطة مجهر أوليمبوس، بالإضافة إلى كاميرا EM-هاماماتسو. تؤخذ الصور في الفترة الفاصلة من 1 ساعة أي ما مجموعه 18 ساعة خلال الهجرة العشوائية. يرجى الاطلاع على الفيلم 1 و 2 من فيلم الهجرة العشوائية لمراقبة واختبار العينات.

مجهر الإعداد:

figure-protocol-3
الشكل 1. إعداد نقاط متعددة للصورة التقاط.

figure-protocol-4
الشكل 2. الخطوات التي تصور سيطرة الالتقاط. انقر هنا لعرض أكبر شخصية .

figure-protocol-5
الشكل 3. كيفية حفظ صور متعددة.

dflinebreak "> ومعالجة الصور وتحليل للهجرة.

figure-protocol-6
4A شخصية. خطوات لاستيراد صورة لتحليل البيانات.

figure-protocol-7
4B شخصية. خطوات لتحليل البيانات باستخدام بروتوكول الجسيمات تتبع.

figure-protocol-8
4C شخصية. طول النافذة التي تصور مسار الجسيمات مجنزرة.

خطوات لتحليل البيانات.

figure-protocol-9
5A شخصية. الخطوات التي تصور معالم بروتوكول تتبع الجسيمات.

figure-protocol-10
5B شخصية. اختيار الإحصاءات مسار ليتم تحليلها.

figure-protocol-11
الرقم 5C. خطوات لإنشاء قناع لبروتوكول تتبع الآلي.

figure-protocol-12
الشكل 6. متوسط ​​السرعة (الشكليتم رسم 6A) والتشريد، الشكل (6B) في مؤامرة شعيرات. عينة الاختبار يظهر زيادة السرعة والتشريد كما قارن السيطرة عليها.

أفلام

فيلم 1. هجرة الخلايا السيطرة. انقر هنا لعرض الفيلم .

فيلم 2. هجرة الخلايا اختبار. اضغط هنا لمشاهدة الفيلم .

وفازت المصنفة سيطرة MDA-MB-231 واختبار MDA-MB-231 خلايا قليلة على الكولاجين ليلة وضحاها. تم تنفيذ الوقت الفاصل بين المجهري الفيديو بواسطة مجهر أوليمبوس، بالإضافة إلى كاميرا EM-هاماماتسو. تؤخذ الصور في الفترة الفاصلة من 1hour لمدة 18 ساعة خلال الهجرة العشوائية. يرجى الاطلاع على أفلام من الهجرة العشوائية لمراقبة واختبار.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في الوقت الحقيقي فحص الهجرة العشوائية تمكن، حساس دقيق، وتحليل المعلمات هجرة الخلية مثل السرعة والتشريد. لا يقتصر هذا الأسلوب لانهاء نقطة قياس قيمة، وبالتالي فإنه من الكمية. منذ ذلك الحين، ويتم رصد الخلايا في المتوسط ​​DMEM طبيعية مع مصل الدم، فإنه يقلل من التأثير الضار لليعد حضانة في وسائل الإعلام الحرة في المصل. وقد تبين أن الهجرة من الخلايا يعتمد على التنسيق وكسر اتصالات الخلية مع قوام 8، وبالتالي، يمكن أن تستخدم هذه الطريقة لدراسة تأثير مختلف الطبقات التحتية في مجال ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدينا ما يكشف.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فإن الكتاب أود أن أشكر أماندا Struckhoff للمساعدة أولية مع هذه التجربة. وأيد هذا العمل عن طريق منحة من المعاهد الوطنية للصحة 5RO1CA115706.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
اسم كاشف شركة فهرس العدد تعليقات
DMEM الحرارية العلمية SH30243.01
FBS الجوزاء المنتجات الحيوية 100-106
OPTI-م إينفيتروجن 31985-070
الكولاجين دينار بحريني 354231
مجهر مع غرفة خلية حية وتحكم الآلي مرحلة XY أوليمبوس OLYMPUS 1X81
غرفة التحكم البيئي نويه نويه غرفة لايف خلية لنا لديه مخصصة لبناء لوحة زجاجية مستطيلة الشكل الأعلى للبصريات المناسبة من خلال الجزء العلوي من القاعة. على شكل مستطيل يستوعب جيدا لوحات متعددة تستخدم في العديد من التجربه لديناTS.
الآلي XY مرحلة قبل Proscan قبل وهذا يسمح بعودة دقيقة لضرب مواقع مختارة XY خلال الفحص المجهري مرور الوقت.
كاميرا هاماماتسو EM كاميرا C9100
البرنامج شراؤها عادة من خلال بائع مجهر مثل أوليمبوس كتاب الشريحة رقم 5

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lauffenburger, D. A., Horwitz, A. F. Cell migration: a physically integrated molecular process. Cell. 84, 359-369 (1996).
  2. Ridley, A. J. Cell migration: integrating signals from front to back. Science. 302, 1704-1709 (2003).
  3. Petrie, R. J., Doyle, A. D., Yamada, K. M. Random versus directionally persistent cell migration. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 10, 538-549 (2009).
  4. Valone, F. H., Austen, K. F., Goetzl, E. J. Modulation of the random migration of human platelets. J. Clin. Invest. 54, 1100-1106 (1974).
  5. Biehlmaier, O., Hehl, J., Csucs, G. Acquisition speed comparison of microscope software programs. Microsc. Res. Tech. 74, 539-545 (2011).
  6. Struckhoff, A. P. Dynamic regulation of ROCK in tumor cells controls CXCR4-driven adhesion events. J. Cell. Sci. 123, 401-412 (2010).
  7. Abramoff, M. D., Magelhaes, P. J., Ram, S. J. Image Processing with ImageJ. Biophoton. Internat. 11, 36-42 (2004).
  8. Greenberg, J. H., Seppa, S., Seppa, H., Tyl Hewitt, A. Role of collagen and fibronectin in neural crest cell adhesion and migration. Dev. Biol. 87, 259-266 (1981).
  9. Albini, A., Sporn, M. B. The tumour microenvironment as a target for chemoprevention. Nat. Rev. Cancer. 7, 139-147 (2007).
  10. Yu, Y. P., Luo, J. H. Myopodin-mediated suppression of prostate cancer cell migration involves interaction with zyxin. Cancer. Res. 66, 7414-7419 (2006).
  11. Teng, T. S., Lin, B., Manser, E., Ng, D. C., Cao, X. Stat3 promotes directional cell migration by regulating Rac1 activity via its activator betaPIX. J. Cell. Sci. 122, 4150-4159 (2009).
  12. Wozniak, M. A., Kwong, L., Chodniewicz, D., Klemke, R. L., Keely, P. J. R-Ras controls membrane protrusion and cell migration through the spatial regulation of Rac and Rho. Mol. Biol. Cell. 16, 84-96 (2005).
  13. Orr, A. W., Elzie, C. A., Kucik, D. F., Murphy-Ullrich, J. E. Thrombospondin signaling through the calreticulin/LDL receptor-related protein co-complex stimulates random and directed cell migration. J. Cell Sci. 116, 2917-2927 (2003).
  14. Smith, A., Bracke, M., Leitinger, B., Porter, J. C., Hogg, N. LFA-1-induced T cell migration on ICAM-1 involves regulation of MLCK-mediated attachment and ROCK-dependent detachment. J. Cell Sci. 116, 3123-3133 (2003).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Slidebook

مقالات ذات صلة