الأسلوب يحدد الاجراءات التي من الحبار قصير الذيل هاواي، Euprymna scolopes ولها المتكافل البكتيرية، الضمة fischeri، تربى على حدة ومن ثم قدم للسماح للاستعمار محدد من جانب الجهاز ضوء الحبار بواسطة البكتيريا. وصفت من قبل الكشف عن الاستعمار التلألؤ جرثوميا المشتقة والعد مستعمرة مباشرة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
استعمار Euprymna scolopes الحبار بواسطة الضمة fischeri
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تم العثور على بكتيريا محددة بالتعاون مع الأنسجة الحيوانية 1-5. هذه المضيفة للبكتيريا الجمعيات (symbioses) يمكن أن يكون ضارا (الممرضة)، ليس لديهم نتيجة للياقة البدنية (commensal)، أو أن تكون مفيدة (المنفعة المتبادلة). بينما تم إيلاء اهتمام كبير للتفاعلات المسببة للأمراض، ولا يعرف سوى القليل عن العمليات التي تملي اكتساب استنساخه من المفيد / commensal البكتيريا من البيئة. وتبادل المنافع والمصالح للضوء الجهاز بين هذه البكتيريا سالبة الجرام البحرية V. fischeri وهاواي قصير الذيل الحبار، E. scolopes، يمثل التفاعل محددة للغاية في أي واحد مضيف (E. scolopes) يؤسس علاقة تكافلية مع واحد فقط الأنواع البكتيرية (ف. fischeri) طوال فترة من عمر البطارية 6،7. تلألؤ بيولوجي التي تنتجها V. fischeri خلال هذا التفاعل يعطي فائدة لمكافحة المفترسة إلى E. scolopes خلال الأنشطة الليلية 8،9، في حينالنسيج المضيف الغنية بالمغذيات ويوفر V. fischeri مع مكانة المحمية 10. خلال كل جيل المضيفة، وخصت هذه العلاقة، ويمثل بالتالي عملية يمكن التنبؤ بها والتي يمكن تقييمها بالتفصيل في مراحل مختلفة من التنمية التكافلية. في المختبر، والحبار الأحداث يفقس aposymbiotically (uncolonized)، وإذا تم جمعها في غضون الدقائق ال 30-60 الأولى، ونقل إلى المتكافل خالية من المياه، لا يمكن إلا من قبل المستعمر اللقاح التجريبي 6. هذا التفاعل يوفر بالتالي نظام نموذجا مفيدا في أي لتقييم الخطوات الفردية التي تؤدي إلى اكتساب المحددة لميكروب التكافلية من البيئة 11،12.
نحن هنا وصفا لطريقة لتقييم درجة من الاستعمار الذي يحدث عندما فقست حديثا E. aposymbiotic ويتعرض scolopes إلى (الاصطناعي) التي تحتوي على مياه البحر V. fischeri. هذا الفحص بسيط يصف التلقيح، العدوى الطبيعية، والانتعاشمن المتكافل البكتيرية من الجهاز ضوء الوليدة من E. يؤخذ scolopes. العناية لتوفير بيئة متناسقة لهذه الحيوانات خلال تطوير التكافلية، وخاصة فيما يتعلق بنوعية المياه والعظة ضوء. أساليب لتحديد خصائص السكان التكافلية صفها وتشمل (1) قياس التألق الحيوي جرثوميا المشتقة، و (2) مستعمرة مباشرة عد من المتكافلة استردادها.
البروتوكول
1. إعداد قائح البكتيرية
- اليوم 0
قبل يومين من التلقيح الحبار، لوحة سلالات بكتيرية ذات الصلة على LBS 13 أجار. - احتضان البكتيريا في 25-28 درجة مئوية خلال الليل.
- اليوم 1
تطعيم 3 رطل مل المتوسطة في كوب أنبوب الثقافة مع واحد من كل مستعمرة V. fischeri سلالة للعدوى. إعداد تكرار مثل أنابيب احتياطية. - اليوم 2
(تنسيق الخطوات البكتيرية 1،4-1،6 مع خطوات الحبار 3،7-3،10)
1 ساعة قبل التلقيح، والبكتيريا ثقافة فرعية 1:80 (37.5 ميكرولتر) إلى LBS مل 3 في أنبوب من الزجاج والثقافة، وتنمو لمدة 1 ساعة مع التهوية. - قياس OD 600 من العينة قبل التلقيح. قياسات نموذجية وفقا 0،3-0،6 على السلالة.
- للحصول على اللقاح الهدف من 3-5 × 10 3 كفو / مل حساب حجم اللقاح على النحو التالي: حجم اللقاح (ميكرولتر) = 1.25 / OD 600 (على سبيل المثال، للحصول على التطوير التنظيمي 600 = 0.5، وحجم اللقاح محسوب = 1.25/0.5 = 2.5 ميكرولتر). يضاف هذا المبلغ مباشرة إلى مياه البحر التي تحتوي على الحبار في الخطوة 4.1. قد يكون هذا الحساب يجب أن يتم تعديلها لسلالات مختلفة من V. fischeri أو للتلقيح عند مستويات أدنى أو أعلى من تلك المحددة هنا.
2. إعداد لوحات أجار للتعداد قائح
- لكل معاملة، والتسمية LBS لوحات (2 في العلاج) إلى لوحة عينات من اللقاح في الخطوة 4.1.
- إضافة 5 حبات تصفيح معقم لكل لوحة.
3. مجموعة من الأحداث الحبار
- قياس ملوحة المحيط فورية باستخدام مقياس الإنكسار وضبط إلى 35 ‰.
- تصفية 1 لتر من المحيط فورية باستخدام وحدة الترشيح وجود خط فراغ المرفقة أو مضخة فراغ، لتوليد فلتر تعقيم فورية المحيط (FSIO). الأوكسجين في المياه قبل يحوم بقوة إلى كل صرفها. اليمكن إعادة استخدامها ه مرشح وحدة لمدة 2 ايام.
- قسامة 40-50 مل من FSIO في كل من اثنين (2) السلطانيات عينة يمكن التخلص منها. ملصق واحد كما earlies واحد كما timelies.
- يعد وجود فائض من الماصات نقل من البلاستيك للحصول على الحبار الأحداث من خلال خفض ماصة ما يقرب من 1 سم من الحافة، وفوق التلال أدنى (انظر الشكل 3). هذا يسهل مساحة أوسع من خلالها الحبار يمكن أن تمر على جمع. تجاهل أي الماصات نقل التي يوجد فيها سطح خشن عرضة للخطر.
- باستخدام الماصة نقل معدة سلفا، وجمع E. scolopes التي تحاك بين عشية وضحاها، ونقل إلى وعاء من earlies FSIO. وكانت سلحفاة صغيرة في وقت مبكر من نظام البيض لأكثر من 1 ساعة وتكون عرضة للتلوث من قبل الاستعمار V. fischeri في نظام البيض. لا تستخدم earlies للتجارب الاستعمار الحساسة.
- تحقق الدبابات بيضة كل دقيقة 30-45 لسلحفاة صغيرة جديدة. ضمان أن يتم مسح جميع سلحفاة صغيرة خلال كل جهيك. سلحفاة صغيرة مع إزالة ماصة، ونقل وديعة في وعاء من timelies FSIO. الحيوانات التي تم جمعها في الوقت المناسب غير متوفرة للتجارب الاستعمار.
- عندما انتهى جمع (~ 45 دقيقة بعد غروب الشمس)، ونقل الحبار إلى المختبر الرئيسي. تجريبيا فإنه من المفيد لاستعمار الحيوانات تحت ظروف الإضاءة دون انقطاع المخبرية اللازمة للتحصين ح 3.
- لكل معاملة، وإعداد وعاء مع FSIO مل 40. إضافة إلى الحبار الطاسات لفحص (الحد الأقصى ن = 40 في وعاء).
- إعداد وعاء إضافية كعنصر تحكم (السلبية) aposymbiotic.
- إعداد ماصة مخصصة لنقل كل معاملة.
- الموت ببطء الحبار اضافية في الإيثانول بنسبة 2٪.
4. الحبار الاستعمار
- اليوم 2 - استخدام Pipetman P10، صرف قسامة محسوب من البكتيريا (الخطوة 1.5) في كل وعاء الحبار (الخطوة 3.8) عن كل معاملة. بدء الموقت H 3 على الفور بعدمن التلقيح الأول.
- لكل معاملة، وخلق "دوامة" في وعاء مع ماصة نقل مخصصة عن طريق وضع ماصة بالقرب من حافة وعاء وpipetting صعودا وهبوطا عدة مرات لخلط المياه والحبار لحوالي 10 ثانية. خلط شامل أمر بالغ الأهمية.
- لوحة 50 ميكرولتر من كل وعاء على طبق آجار رطل من الخطوة 2.2 (لأسباب تقنية مكررات، لوحة لوحات كل منهما 50 ميكرولتر لكل معاملة). احتضان في 25-28 درجة مئوية خلال الليل.
- إعداد الأطباق غسيل (100 مل FSIO / EA) عن كل معاملة.
- تعد ذبابة الفاكهة قارورة (4 مل FSIO / EA) لكل الحبار.
- بعد 3 ساعات بالضبط، ونقل إلى الحبار غسيل الاطباق ومنها (كامل لكافة أنواع المعاملة). هذا يتوقف على التلقيح.
- والمضي قدما لنقل كل فرد الحبار إلى قارورة فيها ذبابة الفاكهة الخاصة مع FSIO. استخدم ماصة مخصصة لنقل كل معاملة.
- نقل الصواني من قوارير ذبابة الفاكهة إلى مرفق الحبار للعودة الى يوم / ندورة ضوء ight شهدت هذه الحيوانات خلال مرحلة التطور الجنيني.
- يوم 3 - إعداد ذبابة الفاكهة قارورة (4 مل FSIO / EA) لكل الحبار.
- قبل الغسق في 22-24 ساعة تلقيح ما بعد، نقل كل الحبار إلى قارورة ذبابة الفاكهة الجديدة. استخدم ماصة مخصصة لنقل كل معاملة.
- إعداد وصفت 1،5 أنابيب microcentrifuge مل (1/squid) - يوم 4.
- قبل الغسق في 46-48 ح التدبير، في مرحلة ما بعد التلقيح وتسجيل كل من التألق الحبار في قارورة ذبابة الفاكهة (مجموعة luminometer للتكامل 6 ق، وعلى إغلاق غطاء السيارات للقراءة).
- كوسيلة لمراقبة سلبية على خلفية التألق، وقياس قارورة مع FSIO التي لا تحتوي على أي الحبار.
- نقل كل الحبار في وبلغ حجم التداول نحو 700 ميكروليتر إلى أنبوب مل microcentrifuge 1،5 من 4،12 الخطوة. الانتقال إلى مربع المجمد من الورق المقوى. مرة واحدة يتم وضع غطاء على مربع، لا إزالته كما اشارات ضوء لطرد البكتيريا ليست أهلا وسهلاL-مفهومة.
- تجمد أنابيب microcentrifuge في -80 درجة مئوية خلال الليل.
5. تحديد مستويات الاستعمار
- لكل والحبار، وإعداد اثنين من أنابيب microcentrifuge (2)، ولكل منها 475 FSIO ميكروليتر (أو تعقم المحيط الفوري 70٪).
- إعداد المدقات باستخدام لأول مرة Kimwipe لتنظيف مدقة وإزالة الأنقاض الإجمالي و / أو الأنسجة.
- مكان المدقات تلميح إلى أسفل في دورق 50 مل يحتوي على الايثانول بنسبة 95٪. ينبغي أن يضاف إلى الإيثانول على ارتفاع ما يقرب من 3 سم.
- لكل مدقة، وإزالة من الدورق وامسح رأس مع Kimwipe.
- تراجع المدقه مرة أخرى في حمام الايثانول، لإزالة وإدراج (نصيحة متابعة) الى microcentrifuge رف أنبوب، والسماح للتعبير جاف تماما لحوالي 15 دقيقة.
- الحبار ذوبان في microcentrifuge رف أنبوب (الحد الأقصى ن = 8).
- إذا كان ذلك ضروريا، ضبط حجم الصوت إلى 700 ميكروليتر.
- استخدام مدقة من الخطوة 5.5، تعطيل أنسجة الحيوانات حتى الحبر كيس روبتوريس (الماء سوف يتحول لون رمادي مظلم).
- إزالة مدقة، وضمان جميع الأنسجة يبقى في الأنبوب.
- دوامة لفترة وجيزة الأنسجة لبالضبط 10 ثانية (استخدام جهاز توقيت).
- السماح للنسيج للراحة لمدة 10 دقيقة. وسوف تستقر في الأنسجة، والبكتيريا والحبر تبقى في حل. للحسابات التي تتبع، والبكتيريا / حل الحبر هو [A] تخفيف (أي ضوء scolopes E. جناسة الجهاز في 700 ميكرولتر). التخفيفات 1:20 مسلسل ([B]، [C]) وصفها أدناه.
- لتخفيف [B]، أضف 25 ميكرولتر [A] إلى واحدة من أنابيب microcentrifuge أعدت في الخطوة 5.1. دوامة.
- لتخفيف [C]، أضف 25 ميكرولتر [B] إلى واحدة من أنابيب microcentrifuge أعدت في الخطوة 5.1. دوامة.
- لوحة 50 ميكرولتر من كل تخفيف على أجار LBS، 2 مكررات لكل معاملة.
- احتضان لوحات في 25-28 درجة مئوية خلال الليل.
6. تحليل البيانات
- لحساب CFU / الجهاز ضوء (LO)، اشعرتي المستعمرات على لوحة لكل معاملة في المستعمرات التي 10-400 موجودة، واستخدام الصيغة المناسبة:
CFU / LO = (المستعمرات في لوحة [A]) × 14؛ أو
CFU / LO = (المستعمرات في لوحة [B]) × 280، أو
CFU / LO = (المستعمرات في لوحة [C]) × 5600. - رسم نقاط البيانات الفردية والوساطات على مقياس لوغاريتمي.
- غالبا ما تكون البيانات التي لم يتم توزيعها بشكل طبيعي، مع تباينات مختلفة، والقيم المتطرفة قد تحتوي على معلومات ذات معنى من الناحية البيولوجية. لذلك، غير بارامترية الاختبارات توفر طريقة مفيدة لتحديد ما إذا كانت العلاجات تختلف اختلافا كبيرا.
- استخدام البرمجيات GraphPad بريزم للتحليل الإحصائي. لاثنين من العلاجات، واستخدام المبلغ رتبة اختبار يلكوكسون. لإجراء مقارنات بين أكثر من اثنين من العلاجات، واستخدام اختبار كروسكال واليس، مع مناسبة الاختبارات اللاحقة.
7. ممثل النتائج
وأظهرت نتائج فحص عينة من الاستعمار في الشكل 4. سلالتين من V. وكانت fischeri الذي يحمل مختلف المستويات النسبية من التألق كل تلقيح في ستة الحبار، مع ستة الحبار الذي شغل منصب والضوابط (uncolonized) aposymbiotic. وE. scolopes المتكافل، ES114 14، وأكثر إشراقا في Sepiola المتكافل روبوستا، SR5 15،16. اللقاح مستويات مماثلة (الشكل 4A) تؤدي إلى الاستعمار 100٪ خلال 3 ساعات. في 48 ساعة، تم تحديد مستويات التلألؤ (الشكل 4B) وتعول CFU (الشكل 4C) لتقييم الكفاءة الاستعمار من سلالة. تقرير من التلألؤ محدد (الشكل 4D؛ جرثومة لكل) يسمح لتحديد درجة وضوح كل سلالة بكتيرية خلال التكافل.
الرسم البياني رقم 1 التدفق. الإجراء الاستعمار. ويتم حصاد البكتيريا والحبار على حدة، ثم يخلط في اللقاح المحدد. تغسل الحبار، ثم نقل إلى مياه جديدة في 3 ساعات، 24 ساعة، و 4 8 تطعيم آخر ساعة. بعد 48 ساعة يتم قياس التألق ويتم تجميد هذه الحيوانات، والذي يعمل على سطح تعقيم الحيوانات. استعمرت الخفيف الجهاز البكتيريا لا تزال قابلة للحياة على -80 درجة مئوية من خلال واحدة ذوبان (أي إضافية تجميد ذوبان دورات).
الرسم البياني رقم 2 التدفق. يوضح التجانس وتصفيح التخفيف من البكتيريا. مسلسل 20 ضعفا التخفيفات تقديم مجموعة مناسبة حيوية لتعداد الجراثيم المستعمرة.
الشكل 3. نقل ماصات مع تفتق رمح ضيق مناسب لتتحمل ضيق (A) التي من شأنها أن تضر الحبار الأحداث. المعالجة عن طريق قطع أضيق الباب مع مقص أو شفرة حلاقة ينتج أداة مناسبة (B) لنقل الأحداث الحبار.
s/ftp_upload/3758/3758fig4.jpg "/>
الشكل 4. بيانات عينة لفحص الاستعمار. (أ) مستويات من البكتيريا الموجودة في الأوعية اللقاح. (ب) التلألؤ من الحبار الفردية. (ج) من مستعمرة تهم الحبار الفردية. (د) التألق محددة من الحبار الفردية. APO، Aposymbiotic (uncolonized سيطرة سلبية).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الفحص الاستعمار صفها يسمح لتحليل عملية تكافلية الطبيعية في بيئة مختبر للرقابة. على هذا النحو، يمكن استخدامه لتقييم من قبل الاستعمار سلالات متحولة، من عزلة طبيعية مختلفة، وتحت مختلف النظم الكيماوية. ويشيع استخدام الاختلافات في التجارب المذكورة لتقييم مختلف جوانب التعايش. ويمكن قياس حركية من الاستعمار عن طريق فحص التألق خلال 24 ساعة الأولى، والتي يمكن الكشف عنها تلقائيا في عداد التلألؤ الذي تمت إزالة للكشف عن صدفة. وعلاوة على ذلك، يمكن قياس قدرة الاستعمار النسبية للسلالة واحدة بالنس...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
المؤلفان بالشكر ماتياس Gyllborg للحصول على دعم مرفق الحبار وللتعليقات على هذه المخطوطة، مايكل هادفيلد ومختبر البحرية Kewalo للحصول على المساعدة خلال الجمع الميداني، وأعضاء في مختبر روبي ومكفال نجاي، لما قدمته من مساهمات في هذا البروتوكول. ويدعم العمل في مختبر ماندل بواسطة جبهة الخلاص الوطني 0843633-IOS.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم كاشف | شركة | فهرس العدد | تعليقات |
| الثقافة أنابيب الزجاج، و 16 مم القطر | VWR | 47729-580 | |
| قبعات للأنابيب الثقافة زجاج | الصياد | NC9807998 | |
| مرئية معمل تقدير OD 600 | Biowave | CO8000 | فإن أي معمل قادرة على قياس OD 600 عمل. وهذا يمكن وحدة قياس OD 600 من السائل مباشرة في أنابيب زجاجية ثقافة. قد يكون بعض التعديل لحساب اللقاح يكون من الضروري تبعا للأداة المستخدمة. |
| GloMax 20/20 Luminometer واحدة انابيب | Promega | E5311 | تعادل Luminometer تيرنر 20/20n النظم البيولوجية. ويشمل حامل أنبوب microcentrifuge. |
| GloMax 20/20 ضوء قياسي | Promega | E5341 | لمعايرة luminometer. |
| الإنكسار، المحمولة | الحاضنة والسباحة سميث | CD-14035 | معايرة قبل كل استعمال مع ماء منزوع الأيونات. شطف بعد كل استخدام مع ماء منزوع الأيونات لمنع تراكم الأملاح. |
| لحظة المحيط (اصطناعي مياه البحر المركزة) | فوستر والسباحة سميث | CD-16881 | تعد في 35 ‰ في الماء منزوع الأيونات، وذلك باستخدام مقياس الإنكسار، ثم مرشح من خلال مرشح ميكرومتر SFCA 0.2. |
| وحدة الترشيح | Nalgene | 158-0020 | بالسطح خالية من خلات السليلوز (SFCA) غشاء، 0.2 ميكرون. وقد لاحظنا النتائج متغير مع بعض المرشحات التي تحتوي على PES بالسطح. |
| نقل الماصات | الصياد | 13-711 -09:00 | باستخدام مقص أو شفرة حلاقة، وقطع رأس نظيفة فوق التلال الأولى لزيادة القطر من طرف ماصة، وتجنب الضغط على سلحفاة صغيرة الحبار. |
| السلطانيات عينة يمكن التخلص منها (البهلوانات البلاستيك) | المذنب | T9S (9 أونصة.) | الطاسات لتلقيح، مع قطرها العلوي 3 ¼ "، وانخفاض قطرها 2 ¼"، ارتفاع 3 ". السلطانيات خلق بيئة متجانسة وأنها لا تملك حافة القاع، والتي يمكن الحصول على المحاصرين الحبار في مكانة منخفضة الأوكسجين. تم تحسين حجم لمدة 40 مل اللقاح. متاح في webstaurantstore.com، # 619PI9. |
| ذبابة الفاكهة قوارير | VWR | 89092-720 | قطر قارورة مباريات الافتتاح في PMT luminometer. |
| 1.5 مل أنابيب Microcentrifuge | ISC Bioexpress | C-3217-1CS | يجب أن أنابيب تناسب شكل من المدقات. |
| الايثانول، و 200 والدليل | الصياد | BP2818-100 | |
| المدقات | كيمبل تشيس / Kontes | 749521-1500 | |
| الخرز تصفيح، 5 مم القطر | كيمبل تشيس | 13500 5 | إعداد 5 في أنبوب والتعقيم. |
المراجع
- Aas, J. A., Paster, B. J., Stokes, L. N., Olsen, I., Dewhirst, F. E. Defining the normal bacterial flora of the oral cavity. J. Clin. Microbiol. 43, 5721-5732 (2005).
- Mandel, M. J., Wollenberg, M. S., Stabb, E. V., Visick, K. L., Ruby, E. G. A single regulatory gene is sufficient to alter bacterial host range. Nature. 458, 215-218 (2009).
- Grice, E. A., Segre, J. A. The skin microbiome. Nat. Rev. Microbiol. 9, 244-253 (2011).
- Malic, S. Detection and identification of specific bacteria in wound biofilms using peptide nucleic acid fluorescent in situ hybridization (PNA FISH). Microbiology. 155, 2603-2611 (2009).
- Turnbaugh, P. J. The human microbiome project. Nature. 449, 804-810 (2007).
- Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. The winnowing: establishing the squid-Vibrio symbiosis. Nat. Rev. Microbiol. 2, 632-642 (2004).
- Ruby, E. G. Lessons from a cooperative, bacterial-animal association: the Vibrio fischeri-Euprymna scolopes light organ symbiosis. Annu. Rev. Microbiol. 50, 591-624 (1996).
- McFall-Ngai, M. J., Ruby, E. G. Symbiont recognition and subsequent morphogenesis as early events in an animal-bacterial mutualism. Science. 254, 1491-1494 (1991).
- Jones, B., Nishiguchi, M. Counterillumination in the Hawaiian bobtail squid, Euprymna scolopes Berry (Mollusca: Cephalopoda). Marine Biology. 144, 1151-1155 (2004).
- Graf, J., Ruby, E. G. Host-derived amino acids support the proliferation of symbiotic bacteria. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 1818-1822 (1998).
- Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. A squid that glows in the night: development of an animal-bacterial mutualism. J. Bacteriol. 174, 4865-4870 (1992).
- Lee, P. N., McFall-Ngai, M. J., Callaerts, P., de Couet, H. G. The Hawaiian bobtail squid (Euprymna scolopes): a model to study the molecular basis of eukaryote-prokaryote mutualism and the development and evolution of morphological novelties in cephalopods. Cold Spring Harbor Protocols. , (2009).
- Stabb, E., Visick, K., Millikan, D., Corcoran, A. The Vibrio fischeri-Euprymna scolopes symbiosis: a model marine animal-bacteria interaction. Recent Advances in Marine Science and Technology. , PACON International. Honolulu, Hawaii. (2001).
- Boettcher, K. J., Ruby, E. G. Depressed light emission by symbiotic Vibrio fischeri of the sepiolid squid Euprymna scolopes. J. Bacteriol. 172, 3701-3706 (1990).
- Fidopiastis, P. M., von Boletzky, S., Ruby, E. G. A new niche for Vibrio logei, the predominant light organ symbiont of squids in the genus Sepiola. J. Bacteriol. 180, 59-64 (1998).
- Bose, J. L. Contribution of rapid evolution of the luxR-luxI intergenic region to the diverse bioluminescence outputs of Vibrio fischeri strains isolated from different environments. Appl. Environ. Microbiol. 77, 2445-2457 (2011).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
