يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

إعداد الخلايا متعلق بالنخاع الشوكي المكثف المشتقة (MDSC) من الفئران الحاملة للورم ساذجة والبنكرياس باستخدام التدفق الخلوي والفرز الآلي المغناطيسي خلية المنشط (AutoMACS)

25.8K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/3875

⸱

يونيو 18, 2012

 ,  ,  , 
1Department of Molecular Medicine, University of South Florida Morsani College of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

هذا هو أسلوب سريع وشامل للالمناعي الظاهري متعلق بالنخاع الشوكي الخلايا المشتقة المكثف (MDSC) وإثراء GR-1 + الكريات البيض من الطحال الماوس. هذا الأسلوب يستخدم التدفق الخلوي والخلية AutoMACS الفرز لإثراء لقابلة للحياة 1 غرام + الكريات البيض قبل FACS فرز MDSC للاستخدام في الجسم الحي و في المختبر المقايسات.

الملخص

MDSC هي مجموعة من السكان غير متجانسة من غير ناضجة الضامة، الخلايا الجذعية والمحببة التي تتراكم في الأجهزة اللمفاوية في الحالات المرضية بما في ذلك العدوى الطفيلية، والالتهابات، الصدمة، مرض الطعم ضد المضيف والسكري والسرطان 1-7. في الفئران، MDSC صريحة ماك-1 (CD11b) وGR-1 (Ly6G وLy6C) مستضدات سطح 7. من المهم أن نلاحظ أن تدرس جيدا في MDSC المضيفين الحاملة للورم مختلف حيث يتم توسيع كبير هم وقمع المضادة للورم الاستجابات المناعية مقارنة مع نظرائهم من السذاجة 7-10. ومع ذلك، تبعا للحالة المرضية، وهناك مجموعات سكانية فرعية مختلفة من MDSC مع آليات متميزة وأهداف قمع 11،12. ولذلك، طرق فعالة لعزل السكان MDSC قابلة للحياة هي مهمة في توضيح الآليات الجزيئية المختلفة للقمع في التجارب المختبرية والحية.

في الآونة الأخيرة، ومجموعةوذكرت مجموعة hansah توسيع MDSC في نموذج سرطان البنكرياس الفئران. لدينا الحاملة للورم MDSC عرض فقدان التوازن، وزيادة وظيفة قمعية مقارنة MDSC ساذجة 13. النسب المئوية MDSC هي أقل بشكل ملحوظ في مقصورات اللمفاوية من الفئران السذاجة مقابل الورم الحاملة لل. وهذا هو التحذير الرئيسية، مما يعيق في كثير من الأحيان تحليلات مقارنة دقيقة لهذه MDSC. لذلك، وإثراء GR-1 + الكريات البيض من الفئران السذاجة قبل الإسفار الفرز خلية المنشط (FACS) يعزز نقاء، والسلامة، ويقلل كثيرا من الوقت نوع. ومع ذلك، والإثراء من الكريات البيض + GR-1 من الفئران الحاملة للورم هو اختياري لأن هذه هي في وفرة لنظام مراقبة الأصول الميدانية السريعة الفرز. ولذلك، في هذا البروتوكول، وصفنا أسلوبا كفاءة عالية من المناعي الظاهري MDSC وإثراء GR-1 + الكريات البيض من الطحال من الفئران ساذجة لفرز MDSC في الوقت المناسب. يتم تلقيح مناعيا C57BL / 6 الفئران مع اوربا Panc02 الفئرانLLS تحت الجلد في حين الفئران السذاجة تلقي 1XPBS. ما يقرب من 30 يوما بعد التلقيح، ويتم حصاد الطحال ومعالجتها إلى وحيدة الخلية تعليق باستخدام خلية تفكك غربال. ثم يتم Splenocytes خلايا الدم الحمراء (RBC) هي lysed وملطخة 1 قسامة من هذه الكريات البيض باستخدام ملون تألقي مترافق أجسام مضادة ضد ماك-1 و 1 غ إلى النسب المئوية نمط ظاهري مناعي MDSC باستخدام التدفق الخلوي. في تجربة موازية، وملطخة الكريات البيض كله من الفئران السذاجة مع الأجسام المضادة GR-1-مترافق فلوري، حضنت مع PE-MicroBeads واختيارها بصورة إيجابية باستخدام الفرز الآلي المغناطيسي خلية المنشط (autoMACS) برو فاصل. المقبل، وملطخة 1 قسامة من GR-1 الكريات البيض + مع الأجسام المضادة-1 ماك لتحديد الزيادة في نسب MDSC باستخدام التدفق الخلوي. الآن، وهذه الكريات البيض المخصب + GR1 مستعدون لنظام مراقبة الأصول الميدانية فرز MDSC لاستخدامها في تحليل مقارن (السذاجة مقابل الورم الحاملة لل) في في والمجراة في المختبر

البروتوكول

قبل البدء، وإعداد الحلول التالية:

3٪ وسائل الإعلام تلطيخ (SM):

-3٪ الجنين مصل بقري (FBS) في المؤسسة العامة لتحلية 1X الفوسفات عازلة (PBS)

MACS العازلة (MB):

- 0.5٪ الزلال من المصل البقري (BSA) في 1XPBS

1. حصاد الطحال من الفئران

  1. حقن تحت الجلد 6-8 أسبوع من C57BL سن / 6 الفئران (هارلان) مع 1.5 × 10 5 الفئران Panc02 الخلايا علقت في 100 برنامج تلفزيوني 1X ميكروليتر (الحاملة للورم، مرض السل). السيطرة على الفئران (ساذج) على 100 1XPBS ميكرولتر.
  2. ما يقرب من 4 أسابيع حقن آخر، الموت ببطء الفئران خنقا غاز ثاني أكسيد الكربون.
  3. حصاد الطحال من الفئران عن طريق تشريح حادة باستخدام ملقط ومقص ثم يزن باستخدام ميزان. الطحال في مكان منفصل، وصفت 50 مل أنابيب مخروطية الشكل التي تحتوي على 1 × برنامج تلفزيوني.

2. إنشاء Suspensio وحيدة الخليةن من الكريات البيض من الطحال

يجب أن يتم تنفيذ جميع الإجراءات في بيئة معقمة تحت غطاء السلامة البيولوجية والخلايا والأجسام المضادة أبقى على الجليد.

  1. تجميع خلية تفكك غربال بإضافة شاشة شبكة في افتتاح كأس نحو القاع. ثم، تضاف حلقة الاحتفاظ في المنطقة مترابطة مع الجانب فترة زمنية محددة واستخدام المفتاح الدائري لإحكام الطوق الاحتفاظ، وبالتالي عقد الشاشة في مكان. وضع غربال تجميعها في طبق بتري تحتوي على 10 مل 1 × برنامج تلفزيوني.
  2. الطحال تجمع واستخدام مدقة الزجاج لطحن الطحال ضد شاشة شبكة للخلية تفكك غربال والى طبق بيتري. كرر لكل مجموعة من الفئران المعالجة.
  3. مرشح تعليق الخلية في أنبوب 50 مل مخروطي باستخدام خلية ميكرون 70 مصفاة وماصة 5 مل المصلية. الطرد المركزي في 12000 دورة في الدقيقة (250-300 XG) لمدة 5 دقائق.
  4. إزالة وطاف بيليه resuspend في 5 مل العازلة × 1 تحلل RBC في الطحال. الماصة صعودا وهبوطا بقوة. احتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. وقف رد فعل من خلال إضافة 20 مل من برنامج تلفزيوني × 1. الماصة صعودا وهبوطا بقوة. الطرد المركزي في 12000 دورة في الدقيقة (250-300 XG) لمدة 5 دقائق.
  5. إزالة وطاف بيليه resuspend في 20 مل العقيمة PBS × 1. الماصة صعودا وهبوطا بقوة.
  6. عد الخلايا باستخدام التريبان زرقاء وعدادة الكريات وresuspend في تركيز المطلوب في SM 3٪ حتى 50 ميكرولتر ما يعادل 5x10 الخلايا 6 5-1x10 (1x10 7 خلية / مل - 2x10 7 خلية / مل).

3. سطح الخلية تلطيخ / المناعي الظاهري من MDSC باستخدام التدفق الخلوي

  1. تسمية آبار لوحة 96-جيدا أسفل الخامس للرقابة ونماذج تجريبية والبقع واحد لضوابط التعويض (لا وصمة عار، NS؛ ماك-1-FITC؛ GR-1-APC ودابي).
  2. إضافة 5x10 1x10 5-6 خلايا تعادل 50 ميكروليتر / جيد من splenocytes إلى الآبار كل منها في لوحة V-96-أسفل أيضا. نبذلوحة في 12000 دورة في الدقيقة (250-300 XG) لمدة 5 دقائق.
  3. تعد "ماستر ميكس" (MM) من نادي الفأر بلوك دينار بحريني (الجرذ مكافحة فأر CD16/32 ريتوكسيماب) المخفف في SM 3٪، في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل على الجليد. كنقطة انطلاق، واستخدام 1 بلوك التيسير ميكروغرام في SM 3 في المائة عن الحجم النهائي من 50 ميكرولتر، لكل بئر.
  4. إزالة بعناية طاف من كل بئر من لوحة V-96-أسفل بشكل جيد من قبل لوحة للقلب بسرعة فوق ومرة ​​أخرى، أكثر من حاوية النفايات أو بالوعة دون انقطاع من الكريات الخلية.
  5. دوامة، أجهزة الطرد المركزي لفترة وجيزة التيسير MM بلوك لمدة 5 ثوان، وإضافة 50 ميكروليتر لجميع الكريات في لوحة V-96-أسفل أيضا. مزيج جيد من قبل pipetting بلطف صعودا ونزولا، وترك العينات في آبارهم. احتضان لوحة لمدة 15 دقيقة في الظلام على الجليد. لوحة أجهزة الطرد المركزي في 12000 دورة في الدقيقة (250-300 XG) لمدة 5 دقائق.
  6. تعد "ماستر ميكس" (MM) من ملون تألقي مترافق الأجسام المضادة المخفف في SM 3٪ في أنبوب microcentrifuge 1.5ml على الجليد، في حين أن العينات احتضان مع كتلة لكرة القدم. وينبغي معاير الأضدادلتحديد التخفيفات الأمثل لتلطيخ الاجراءات. كنقطة بداية، تجمع بين تخفيف 1:25 من ماك FITC-1 و 1:20 تخفيف من GR-APC-1 في SM 3 في المائة عن الحجم النهائي من 50 ميكرولتر، لكل نموذج جيد.
  7. إزالة بعناية طاف من كل بئر من 96-جيدا أسفل-V كما هو موضح سابقا.
  8. دوامة، أجهزة الطرد المركزي لفترة وجيزة ملم من الأجسام المضادة تلطيخ فلوري، مترافق لمدة 5 ثوان، وإضافة 50 ميكروليتر إلى مراقبة وكريات التجريبية. مزيج جيد من قبل pipetting بلطف صعودا ونزولا. عن واحد وصمة عار التعويضات، إضافة إلى تخفيف 1:25 من ماك FITC-1، 1:20 تخفيف من GR-APC-1 و 75 نانوغرام / مل من دابي، في SM 3 في المائة عن الحجم النهائي من 50 ميكروليتر لكل بئر إلى الآبار الخاصة بكل منها. إضافة 50 ميكرولتر SM 3٪ لغير ملوثين جيدا (لا اللطخة). تخلط جيدا واحتضان خلايا في 96-V-جيدا لوحة أسفل لمدة 30 دقيقة في الظلام على الجليد.
  9. التسمية FACS أنابيب (5 مل، 12 مم × 75 مم البوليسترين أنابيب أسفل وإيابا) لتتوافق مع كل بئر في لوحة 96-V-أسفل جيدا. إضافة 200 ميكروليتر SM 3٪ لكل FACSأنبوب.
  10. لوحة أجهزة الطرد المركزي في 12000 دورة في الدقيقة (250-300 XG) لمدة 5 دقائق وإزالة supernatants. غسل الكريات وذلك بإضافة 100 ميكروليتر SM 3٪ لكل بيليه ومزيج جيد من قبل pipetting بلطف صعودا ونزولا. لوحة أجهزة الطرد المركزي في 12000 دورة في الدقيقة (250-300 XG) لمدة 5 دقائق. تكرار غسل الخطوة مرة واحدة أكثر.
  11. إزالة بعناية طاف من كل بئر من 96-جيدا أسفل-V كما هو موضح سابقا. Resuspend كل بيليه في SM ميكرولتر 100 3٪، وتخلط جيدا.
  12. نقل 100 ميكروليتر بيليه معلق من كل بئر من لوحة V-96-أسفل جيدا لأنبوب من نظام مراقبة الأصول الميدانية وصفت على التوالي.
  13. قبل تحليل التدفق الخلوي، إضافة 75 نانوغرام / مل دابي لمراقبة ونماذج تجريبية ودابي واحدة تحكم تعويضات وصمة عار.
  14. أداء اكتساب تدفق البيانات cytometric النسب المئوية MDSC. أداء التعويض باستخدام السلبية (أي سيطرة وصمة عار)، والضوابط واحدة إيجابية. تشكيل لمؤامرة نقطة الذي يعرض المبعثر إلى الأمام (FSC) مقابل الجانب (SSC) في نطاق السجل بحيث الكريات البيض من السكانويمكن تحديد الفائدة. رسم بوابة كبيرة على كل الكريات البيض، مع استبعاد كتل الحطام ومع أدنى إلى الأمام والتشرذم الجانب. من هذا الباب الرئيسي، وخلق مؤامرة نقطة جديد يعرض أمن الدولة مقابل دابي وبوابة على خلايا دابي-(حي). حدد هذه الفئة من السكان بوابات حديثا، وخلق نقطة مؤامرة التي تعرض ماك-1 مقابل 1 غ وعلى بوابة إيجابي الخاص مزدوجة (ماك-1 + GR-1 +) MDSC.

4. المغناطيسي إثراء GR-1 + الكريات البيضاء

  1. قسامة 1x10 7 الكريات البيض غير ملوثين المتبقية في أنابيب نظام مراقبة الأصول الميدانية وصفت بشكل مناسب وأجهزة الطرد المركزي في 12000 دورة في الدقيقة (250-300 XG) لمدة 5 دقائق.
  2. إعداد ملم غرام-1-PE الضد في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل. لمدة تصل إلى 10 7 خلايا، واستخدام الموارد الوراثية تخفيف 1:10-1-PE الأجسام المضادة في 50 ميغابايت ميكرولتر، لكل عينة. بالنسبة لأعداد أكبر خلية، زيادة حجم وفقا لذلك. أجهزة الطرد المركزي لفترة وجيزة لمدة 5 ثوان، إضافة إلى الكريات البيض في أنابيب نظام مراقبة الأصول الميدانية، واحتضان لمدة 15 دقيقة في 4 درجات مئوية في الظلام.
  3. أضف 2 مل من ميغابايت إلى أنابيب نظام مراقبة الأصول الميدانية، الطرد المركزي في 12000 دورة في الدقيقة (250-300 XG) لمدة 5 دقائق وتجاهل طاف.
  4. إعداد MM المضادة للPE MicroBeads في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل. لمدة تصل إلى 10 7 خلايا، استخدم تخفيف 01:04 المضادة للPE MicroBeads في 200 ميغابايت ميكرولتر، لكل عينة. بالنسبة لأعداد أكبر خلية، زيادة حجم وفقا لذلك. أجهزة الطرد المركزي لفترة وجيزة لمدة 5 ثوان، إضافة إلى الكريات البيض في أنابيب نظام مراقبة الأصول الميدانية، واحتضان لمدة 15 دقيقة في 4 درجات مئوية في الظلام.
  5. أضف 2 مل من ميغابايت إلى أنابيب نظام مراقبة الأصول الميدانية، الطرد المركزي في 12000 دورة في الدقيقة (250-300 XG) لمدة 5 دقائق وتجاهل طاف. Resuspend بيليه في 3 مل من بينالي الشارقة. تصفية من خلال مصفاة ميكرون 70 إلى جديد، وصفت أنبوب 50 مل مخروطي.
  6. إعداد ورئيس سيارات فاصل برو أجهزة ماكينتوش. إعادة ملء الزجاجات مع جميع الحلول المناسبة وإفراغ زجاجة من النفايات، وإذا لزم الأمر. بدوره على صك ودراسة وضع حاويات السوائل والعمود (ق) بعد التهيئة. وينبغي أن تكون جميع الرموز الخضراء. في القائمة، حدد "الفصل" من أعلى شريط القوائم تليها "غسل الآن" من شريط أدنى القائمة. حدد "شطف" من خيار المنبثقة تليها "تشغيل" لبدء عملية فتيلة. وبمجرد الانتهاء بنجاح عملية فتيلة، فإن صك ثم عرض على انه "جاهز للفصل" في ظل الحالة القائمة.
  7. اختيار مناسب رف أنبوب مبرد لأحجام الأنابيب ومكان 50 مل أنبوب مخروطي مع الخلايا المسماة مغناطيسيا في صف، أنبوب 50 مل مخروطي لجمع جزء سلبي في صف B و 15 مل أنبوب مخروطي الشكل لجمع جزء إيجابي في صف جيم
  8. اختيار "POSSEL_S" فصل خلية برنامج لاختيار إيجابي من الخلايا المستهدفة وصفت في وضع حساس من العينات. يتم الاحتفاظ الخلايا المستهدفة وصفت مغناطيسيا على العمود automats؛ يتم الافراج الخلايا غير المسماة في أنبوب جمع جزء سلبي في صف باء على تراجع الآلي من المغناطيس، وسوف يتم الافراج عن الخلايا المستهدفة وصفت في أنبوب جمع إيجابي في C صف من أنبوب رف.

> 5. بعد فرز تحليل GR-1 + الكريات البيضاء اليورانيوم

  1. إعادة فرز الأصوات GR-1 + و GR-1 - الكسور باستخدام التريبان الزرقاء وعدادة الكريات أ. Resuspend الخلايا في تركيز المطلوب في المتوسط ​​تلطيخ 3٪ حتى 50 ميكرولتر ما يعادل 5x10 الخلايا 6 5-1x10 (1x10 7 خلية / مل - 2x10 7 خلية / مل)، وتحويل 50 ميكروليتر إلى أنابيب نظام مراقبة الأصول الميدانية في المقابل وصفت.
  2. إعداد ملم ماك-1 فقط، حتى التخفيف 01:25 في SM 3 في المائة عن الحجم النهائي من 50 ميكروليتر لكل عينة. وصمة عار الخلايا وإعداد التعويضات وصمة عار واحد من GR-PE FITC ماك-1، ودابي لتحليل التدفق الخلوي. إضافة 200 ميكروليتر SM 3٪ ودابي صبغ البقاء كما هو موضح سابقا.
  3. أداء اكتساب تدفق البيانات cytometric لتحديد GR-1 + و GR-1 - النسب المئوية ومقارنة أيضا النسب المئوية MDSC تخصيب اليورانيوم قبل وبعد autoMACS.

6. ممثل النتائج

هنا نعرض ص epresentative النتائج لتخصيب autoMACS من الكريات البيض + GR-1 من الطحال، مجمعة ساذجا لنظام مراقبة الأصول الميدانية لاحق من فرز MDSC (الشكل 1). تم صبغ 1x10 6 الكريات البيض ساذجا مع ماك FITC-1 والأجسام المضادة GR-1-APC لتحديد النسب المئوية MDSC باستخدام أداة LSRII دينار بحريني، وذلك قبل الفرز autoMACS. تم صبغ ثم 1x10 7 الكريات البيض ساذجا مع المضادة للGR-1-PE الأجسام المضادة وMicroBeads PE-لتخصيب اليورانيوم من الكريات البيض + GR-1 باستخدام فاصل برو autoMACS. بعد autoMACS التخصيب، GR-1 النسب المئوية في GR-1 + و GR-1 - تم تقييم الكسور جمعها باستخدام التدفق الخلوي. أزيلت 1x10 6 GR-1 + الكريات البيض وملطخة ماك-1-FITC الأجسام المضادة لتحليل ومقارنة نسب MDSC من اليورانيوم، تجمع الكريات البيض المخصب من السذاجة عدم، مجمعة الحاملة للورم الكريات البيض من قبل التدفق الخلوي.

fig1.jpg "/>
تخصيب AutoMACS الرقم 1. من السذاجة الكريات البيض + GR-1 لنظام مراقبة الأصول الميدانية MDSC الفرز. كانت تحصد الطحال من الفئران الحاملة للورم البنكرياس والسذاجة ومعالجتها إلى وحيدة الخلية تعليق. تدفق تحليل الخلوي من سطح الكريات البيض ساذجا ملطخة ماك-1 و GR-1-الأضداد فلوري مترافق، وذلك قبل لتخصيب autoMACS (A). تدفق تحليل الخلوي من GR-1 + (ب) والصف 1 - (ج) في مرحلة ما بعد الكسور autoMACS تخصيب خلايا + GR-1 من السذاجة leuckocytes المجمعة ملطخة GR-1-PE الأجسام المضادة والمعادية للMicroBeads PE. تدفق تحليل الخلوي من MDSC وغرام 1 + النسب المئوية بعد autoMACS تخصيب GR-1 + خلايا الكريات البيضاء من السذاجة المجمعة (D) بالمقارنة مع غير المخصب الكريات البيض المجمعة من الفئران الحاملة للورم (E) (الفئران ساذجا، ن = 5 ؛ الفئران الحاملة للورم، ن = 3). MDSC والنسب المئوية GR-1 هي بوابات في المؤامرات كفاف ممثل ورسوم بيانية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

هذه هي طريقة مفصلة لتجهيز وimmunophentyping السكان MDSC التي تنطبق على الأنسجة اللمفاوية المختلفة من مختلف النماذج الحيوانية. على وجه الخصوص، يمكن استخدام تخصيب autoMACS لعزل السكان الكريات البيض المختلفة بما في ذلك استنزاف-1 غرام من splenocytes 4، وتنقية الدم النخاعي من مجموعات فرعية من splenocytes والغدد الليمفاوية 5، والعزلة من العدلات نخاع العظم 14 و تنقية من CD8 + الخلايا التائية من الطحال الغدد الليمفاوية و 15. بغض النظر...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

نعترف التدفق الخلوي USF مرفق الأساسية. نود أن نشكر الدكتور دنيس كوبر لتقاسم الموارد. ونود أيضا أن نشكر مايا كوهين، بندلتون لورا لاتور وديانا لما قدموه من مساعدة في إعداد وتصوير هذا الفيديو. NN بدعم من جبهة الخلاص الوطني FG-LSAMP جسر لتنمية الموارد البشرية دكتوراه زمالة # 0929435. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل الجمعية الأميركية للسرطان المؤسسية للبحوث غرانت # مركز السرطان 93-032-13/Moffitt منحت لTG.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
فيوميرات شركة CATALOG # تعليقات
التخزين المؤقت 1X الفوسفات المالحة الحرارية العلمية Hyclone SH30028.02 كاليفورنيا 2 + / 2 ملغ + / الفينول الأحمر خالية
الزلال من المصل البقري (BSA) سيغما الدريخ A7906 اسمحوا BSA حل دون عائق في برنامج تلفزيوني، والبيئة المعقمة
الجنين المصل البقري (FBS) الحرارية العلمية Hyclone SV3001403HI المعطل الحرارة، وبيئة معقمة
الفئران لمكافحة فأر CD16/32 ريتوكسيماب (اف سي بلوك) العلوم البيولوجية دينار بحريني 553142 عقيم البيئة
مكافحة فأر CD11b (ماك-1) FITC eBiosciences 11-0112 عقيمبيئة
مكافحة فأر Ly6G (GR-1) APC eBiosciences 17-5931 عقيم البيئة
مكافحة فأر Ly6G (GR-1) PE eBiosciences 12-5931 عقيم البيئة
دابي إينفيتروجن D1306 مسلسل البيئة التخفيف العقيمة
خلية التفكك المنخل سيغما الدريخ CD1-1KT الأوتوكلاف قبل الاستخدام
70 ميكرومتر مصفاة العلوم البيولوجية دينار بحريني 352350 عقيم البيئة
1X الواق RBC تحلل eBiosciences 00-4333-57 الحارة إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستعمال؛ بيئة معقمة
أطباق بتري فيشر العلمية 08-757-12 عقيم البيئة
50ml يخدعكال أنابيب الحرارية العلمية 339652 عقيم البيئة
5ml جولة أنابيب البولي ستايرين أسفل 12X75mm العلوم البيولوجية دينار بحريني 352054 العقيمة البيئة؛ المعروفة باسم أنابيب FACS
96-V-جيدا أسفل لوحات كورنينج 3897 عقيم البيئة
زرقة التريبان Cellgro 25-900-CI عقيم البيئة
PE MicroBeads Miltenyi بيوتيك 130-048-801 عقيم البيئة
AutoMACS برو فاصل Miltenyi بيوتيك 130-092-545
أعمدة AutoMACS Miltenyi بيوتيك 130-021-101
AutoMACS تشغيل مخزن Miltenyi بيوتيك 130-091-221

المراجع

  1. Goni, O., Alcaide, P., Fresno, M. Immunosuppression during acute Trypanosoma cruzi infection: involvement of Ly6G (Gr1(+))CD11b(+) immature myeloid suppressor cells. Int. Immunol. 14, 1125-1134 (2002).
  2. Zhu, B. CD11b+Ly-6C(hi) suppressive monocytes in experimental autoimmune encephalomyelitis. J. Immunol. 179, 5228-5237 (2007).
  3. Makarenkova, V. P., Bansal, V., Matta, B. M., Perez, L. A., Ochoa, J. B. CD11b+/Gr-1+ myeloid suppressor cells cause T cell dysfunction after traumatic stress. J. Immunol. 176, 2085-2094 (2006).
  4. Ghansah, T. Expansion of myeloid suppressor cells in SHIP-deficient mice represses allogeneic T cell responses. J. Immunol. 173, 7324-7330 (2004).
  5. Paraiso, K. H., Ghansah, T., Costello, A., Engelman, R. W., Kerr, W. G. Induced SHIP deficiency expands myeloid regulatory cells and abrogates graft-versus-host disease. J. Immunol. 178, 2893-2900 (2007).
  6. Yin, B. Myeloid-derived suppressor cells prevent type 1 diabetes in murine models. J. Immunol. 185, 5828-5834 (2010).
  7. Gabrilovich, D. I., Nagaraj, S. Myeloid-derived suppressor cells as regulators of the immune system. Nat. Rev. Immunol. 9, 162-174 (2009).
  8. Gallina, G. Tumors induce a subset of inflammatory monocytes with immunosuppressive activity on CD8+ T cells. J. Clin. Invest. 116, 2777-2790 (2006).
  9. Zhao, F. Increase in frequency of myeloid-derived suppressor cells in mice with spontaneous pancreatic carcinoma. Immunology. 128, 141-149 (2009).
  10. Greten, T. F., Manns, M. P., Korangy, F. Myeloid derived suppressor cells in human diseases. Int Immunopharmacol. 11, 802-806 (2011).
  11. Youn, J. I., Nagaraj, S., Collazo, M., Gabrilovich, D. I. Subsets of myeloid-derived suppressor cells in tumor-bearing mice. J. Immunol. 181, 5791-5802 (2008).
  12. Ribechini, E., Greifenberg, V., Sandwick, S., Lutz, M. B. Subsets, expansion and activation of myeloid-derived suppressor cells. Med. Microbiol. Immunol. 199, 273-281 (2010).
  13. Pilon-Thomas, S. Murine Pancreatic Adenocarcinoma Dampens SHIP-1 Expression and Alters MDSC Homeostasis and Function. PLoS One. 6, (2011).
  14. Panopoulos, A. D. STAT3 governs distinct pathways in emergency granulopoiesis and mature neutrophils. Blood. 108, 3682-3690 (2006).
  15. Preynat-Seauve, O. Extralymphatic tumors prepare draining lymph nodes to invasion via a T-cell cross-tolerance process. Cancer Res. 67, 5009-5016 (2007).
  16. Davies, D. Cell separations by flow cytometry. Methods Mol. Med. 58, 3-15 (2001).
  17. Maecker, H., Trotter, J. Selecting reagents for multicolor BD flow cytometry. Postepy Biochem. 55, 461-467 (2009).
  18. Bagwell, C. B., Adams, E. G. Fluorescence Spectral Overlap Compensation for Any Number of Flow Cytometry Parameters. Annals of the New York Academy of Sciences. 677, 167-184 (1993).
  19. Perfetto, S. P. Amine reactive dyes: an effective tool to discriminate live and dead cells in polychromatic flow cytometry. J. Immunol. Methods. 313, 199-208 (2006).
  20. Safarik, I., Safarikova, M. Use of magnetic techniques for the isolation of cells. J. Chromatogr. B. Biomed. Sci. Appl. 722, 33-53 (1999).
  21. Collazo, M. M. SHIP limits immunoregulatory capacity in the T-cell compartment. Blood. 113, 2934-2944 (2009).
  22. Mack, E., Neubauer, A., Brendel, C. Comparison of RNA yield from small cell populations sorted by flow cytometry applying different isolation procedures. Cytometry. A. 71, 404-409 (2007).
  23. Strauss, L., Czystowska, M., Szajnik, M., Mandapathil, M., Whiteside, T. L. Differential responses of human regulatory T cells (Treg) and effector T cells to rapamycin. PLoS One. 4, e5994(2009).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

AutoMACS Gr 1 Mac 1 Gr 1
إعداد الخلايا متعلق بالنخاع الشوكي المكثف المشتقة (MDSC) من الفئران الحاملة للورم ساذجة والبنكرياس باستخدام التدفق الخلوي والفرز الآلي المغناطيسي خلية المنشط (AutoMACS)
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.