في هذه المقالة، ويقدم وسيلة إنتاجية عالية لتركيب يغوساكاريدس وتمسكهم سطح النانوية polyanhydride لاستخدامها مرة أخرى في استهداف مستقبلات معينة على خلايا مقدمة للمستضد.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الإنتاجية العالية لتخليق الكربوهيدرات وFunctionalization النانوية Polyanhydride
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
النهج المتعدد التخصصات التي تشمل مجالات مثل تصميم المواد، وتكنولوجيا النانو، والكيمياء، وعلم المناعة لديها لاستخدامها في تصميم بعقلانية فعال لقاحات الناقلين. يمكن للجسيمات متناهية الصغر القائمة على منصات إطالة استمرار مستضدات اللقاحات، التي يمكن أن تحسن لقاح استمناع 1. وقد تم دراسة العديد من البوليمرات القابلة للتحلل وسائل إيصالها لقاح 1؛ على وجه الخصوص، والجسيمات polyanhydride أثبتت قدرتها على توفير إطلاق مستمرة من مولدات المضادات البروتين مستقرة والى تنشيط خلايا مستضد تقديم وتعدل الاستجابات المناعية 2-12.
التصميم الجزيئي لهذه الناقلات لقاح يحتاج إلى دمج الاختيار الرشيد لخصائص البوليمر، فضلا عن دمج المناسبة وكلاء الاستهداف. ارتفاع تلفيق الإنتاجية الآلي من استهداف يغاندس والجسيمات functionalized هو أداة قوية من شأنها أن تعزز القدرة على دراسة واسعة صأنج من الخصائص، وسوف تؤدي إلى تصميم استنساخه تسليم الأجهزة لقاح.
وقد تبين إضافة استهداف يغاندس قادرة على أن تعترف بها مستقبلات معينة على خلايا المناعة لتعديل والاستجابات المناعية خياط 10،11،13 مستقبلات كتين C-نوع (CLRs) هي مستقبلات نمط الاعتراف (PRRs) التي تعترف الكربوهيدرات موجودة على سطح من مسببات الأمراض. تنشيط الخلايا المناعية عن طريق CLRs يسمح لاستيعاب المعزز للمستضد وعرض لاحقة لمزيد من تنشيط الخلايا T 14،15. ولذلك، جزيئات الكربوهيدرات تلعب دورا هاما في دراسة الاستجابات المناعية، ولكن استخدام هذه الجزيئات الحيوية غالبا ما يعاني من عدم توافر هيكليا واضحة المعالم والكربوهيدرات النقية. يمكن لمنصة التشغيل الآلي على أساس حل تكرارية المرحلة ردود الفعل تمكن من التجميع السريع وتسيطر هذه الجزيئات تحديا صناعيا باستخدام ب أقل من ذلك بكثيرuilding كميات كتلة صلبة من الأساليب التقليدية في المرحلة 16،17.
هنا نقدم تقريرا بروتوكول لتركيب حل المرحلة الآلي من يغوساكاريدس مثل المانوز القائم على استهداف يغاندس مع استخراج الصلبة المرحلة fluorous لتنقية وسيطة. بعد تطوير طرق الآلي لجعل وكيل الكربوهيدرات القائم على استهداف، ونحن تصف أساليب لتعلقهم على سطح polyanhydride النانوية توظيف مجموعة الآلي الروبوت حتى تشغلها ابفيف كما هو موضح سابقا 10. وقد أظهرت functionalization السطح مع الكربوهيدرات فعالية في استهداف CLRs 10،11 وزيادة الإنتاجية للأسلوب تلفيق لكشف النقاب عن التعقيدات المرتبطة نظام متعدد حدودي لن تكون ذات قيمة كبيرة (الشكل 1A).
البروتوكول
1. الإنتاجية العالية الكربوهيدرات التجميعي
- وقد تم تجميع قبل تركيب الآلي من dimannoside، إحدى الجهات المانحة السكر محمية بشكل مناسب، trichloroacetimidate عادة، والمتقبلة، وذلك أساسا على الكحول alkenyl fluorous، على أعلى مقاعد البدلاء.
- يتم كتابة برنامج لتركيب الآلي من dimannoside. ويرد التمثيل التخطيطي الداخلي الآلي الأساسية في الشكل 2. في البرنامج، ويتم التأكد من أن قبل إضافة المروج، ويحرك الخليط من الجهات المانحة ومتقبل ما لا يقل عن 30 دقيقة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وقد فعالية من الكربوهيدرات كما تستهدف وكلاء لتفاعلات جسيمات متناهية الصغر مباشرة إلى الخلايا المناعية أثبتت سابقا 10 و 11. وقد أظهرت البحوث السابقة في مختبراتنا أن السكريات محددة ملحقة النانوية polyanhydride قادرة على استهداف CLRs مختلفة على الخلايا مستضد تقديم (ناقلات الجنود المدرعة)، وبالتالي تعزيز وتفعيل الخلايا المناعية التي قد تكون هامة لمزيد من تنشيط الخلايا T 10 و 11. ومع ذلك، لتحقيق أقصى قدر من استهداف العديد من هذه المعايير، مثل الكيمياء polyanhydrid.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
NLBP هو أحد مؤسسي، ويحمل في رأس مال شركة الكربوهيدرات LuCella العلوم البيولوجية، وشركة
شكر وتقدير
فإن الكتاب أود أن أشكر للبحوث الطبية للقوات المسلحة الامريكية والعتاد القيادة (جرانت # W81XWH-10-1-0806)، والمعاهد الوطنية للصحة (جرانت # U19 AI091031-01 وغرانت # 1R01GM090280) للحصول على الدعم المالي. BN يعترف Balloun الأستاذية في الهندسة الكيميائية والبيولوجية وNLBP يعترف الأستاذية ويلكنسون من التخصصات الهندسية. نشكر جوليا فيلا على مساعدتها في إجراء تجارب functionalization جسيمات متناهية الصغر.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم | شركة | فهرس العدد | |
| بمحركات XYZ المرحلة: 3X T-LSM050A و 50 ملم في محور السفر | Zaber تقنيات | T-XYZ-LSM050A-KT04 | |
| NE-1000 مضخة الحقنة واحدة | جديد أنظمة عصر مضخة | NE-1000 | |
| بيركس * فيستا * بدون إطار الثقافة الزجاج القابل لإعادة الاستخدام أنابيب | كورنينج | 07-250-125 | |
| ASW 1000 | Chemspeed تقنيات | ||
| ابفيف | الصكوك الوطنية | 776671-35 | |
| شركة سوسيتيه جنرال حقن الغاز ضيق، Luer لوك | سيجما ألدريتش | 509507 | |
| XL-2000 Sonicator | Qsonica | Q55 | |
| مصغرة أنبوب محور دوار | فيشر العلمية | 05-450-127 |
المراجع
- Zepp, F. Principles of vacine design-lessons from nature. Vaccine. 28, C14-C24 (2010).
- Ulery, B. D., Phanse, Y., Sinha, A., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B., Bellaire, B. H. Polymer chemistry influences monocytic uptake of polyanhydride nanospheres. Pharm. Res. 26, 683-....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
