مقالة منهجية

إنشاء الميكروبية إثراء الثقافات حقيقية النواة من بحيرة القطب الجنوبي الطبقية كيميائيا وتقييم القدرة على تثبيت الكربون

DOI:

10.3791/3992

⸱

أبريل 20, 2012

 ,  , 
1Department of Microbiology, Miami University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

حقيقيات النوى الجراثيم وكلاهما مصدر للكربون photosynthetically المشتقة وأعلى الأنواع المفترسة في بحيرات القطب الجنوبي بشكل دائم المغطاة بالجليد. ويصف هذا التقرير نهجا ثقافة تخصيب اليورانيوم لعزل عملية الأيض حقيقيات النوى الجراثيم تنوعا من القطب الجنوبي للبحيرة، بحيرة بوني، وغير العضوية ويقيم إمكانية تثبيت الكربون باستخدام فحص النظائر المشعة للنشاط ريبولوز-1 كربوكسيلاز ،5-bisphophate (RubisCO) أوكسيجيناز.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعد بحيرة بوني واحدة من العديد من البحيرات المغطاة بالجليد بشكل دائم والموجودة في وديان مكموردو الجافة في القارة القطبية الجنوبية. يحافظ الغطاء الجليدي الدائم على عمود مياه متدرج كيميائياً، وبخلاف المسطحات المائية الداخلية الأخرى، فإنه يمنع إلى حد كبير المدخلات الخارجية من الكربون والمغذيات القادمة من الجداول المائية. وتتعرض الكائنات الحية لضغوط بيئية عديدة، بما في ذلك النقص الحاد في المغذيات على مدار العام، وانخفاض درجات الحرارة، والظلال الكثيفة، والملوحة المفرطة، والظلام الدامس لمدة 24 ساعة خلال فصل الشتاء 1. وتحد هذه الظروف البيئية القاسية من الكائنات الحية في بحيرة بوني لتقتصر بشكل شبه حصري على الكائنات الدقيقة 2.

تعد حقيقيات النوى الميكروبية وحيدة الخلية (والتي تسمى "الطلائعيات") عناصر مهمة في الدورات البيوجيوكيميائية العالمية 3، وتلعب أدواراً إيكولوجية هامة في دورة الكربون في بحيرات الوديان الجافة، حيث تشغل أدواراً أولية وثالثية في الشبكة الغذائية المائية. وفي الشبكة الغذائية المائية للوديان الجافة، تكون الطلائعيات التي تثبت الكربون غير العضوي (التغذية الذاتية) هي المنتجات الرئيسية للكربون العضوي للكائنات ذات التغذية العضوية 4, 2. أما الطلائعيات البالعة أو غير ذاتية التغذية القادرة على ابتلاع البكتيريا والطلائعيات الأصغر حجماً، فهي تعمل كالمفترسات العليا في الشبكة الغذائية 5. وأخيراً، هناك نسبة غير معروفة من مجتمع الطلائعيات قادرة على التمثيل الغذائي المختلط المشترك 6, 7. تتضمن التغذية المختلطة في الطلائعيات القدرة على الجمع بين القدرة على التمثيل الضوئي والابتلاع البالعي للكائنات المجهرية الفريسة. ويختلف هذا الشكل من التغذية المختلطة عن التمثيل الغذائي المختلط في الأنواع البكتيرية، الذي يتضمن عموماً امتصاص جزيئات الكربون الذائبة. حالياً، يوجد عدد قليل جداً من عزلات الطلائعيات من البحيرات القطبية المغطاة بالجليد بشكل دائم، وكانت الدراسات حول تنوع الطلائعيات وإيكولوجيتها في هذه البيئة القاسية محدودة 8, 4, 9, 10, 5. إن الفهم الأفضل للتنوع الأيضي للطلائعيات في الشبكة الغذائية البسيطة لبحيرات الوديان الجافة سيساعد في تطوير نماذج لدور الطلائعيات في دورة الكربون العالمية.

لقد استخدمنا نهج استزراع الإثراء لعزل الطلائعيات التي يُحتمل أن تكون ذات تغذية ضوئية أو تغذية مختلطة من بحيرة بوني. وقد تم اختيار أعماق أخذ العينات في العمود المائي بناءً على مواقع الحد الأقصى للإنتاج الأولي والتنوع السلالي للطلائعيات 4, 11، بالإضافة إلى التباين في العوامل غير الحيوية الرئيسية التي تؤثر على أنماط التغذية في الطلائعيات: فأعماق أخذ العينات الضحلة تكون محدودة من حيث المغذيات الرئيسية، بينما تكون أعماق أخذ العينات الأكثر عمقاً محدودة بتوفر الضوء. بالإضافة إلى ذلك، تم تدعيم عينات مياه البحيرة بأنواع متعددة من أوساط النمو لتحفيز نمو مجموعة متنوعة من الكائنات ذات التغذية الضوئية.

يعمل إنزيم RubisCO كحافز للخطوة المحددة لمعدل التفاعل في دورة كالفن-بنسون-بشام (CBB)، وهي المسار الرئيسي الذي تثبت من خلاله الكائنات ذاتية التغذية الكربون غير العضوي وتوفر الكربون العضوي للمستويات الغذائية الأعلى في الشبكات الغذائية المائية والبرية 12. في هذه الدراسة، طبقنا مقايسة بالنظائر المشعة معدلة للعينات المرشحة 13 لرصد أقصى نشاط لإنزيم الكربوكسيلاز كمؤشر لإمكانية تثبيت الكربون والتنوع الأيضي في مزارع الإثراء من بحيرة بوني.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. عينة اكتساب

  1. اختيار وإعداد موقع أخذ العينات قبل يوم واحد لأخذ عينات عمود الماء. وهذا سوف يسمح للطبقات طبقية لعمود الماء لإصلاح بعد اضطراب بسبب الحفر وذوبان الجليد حفرة. تحديد مكان موقع الحفر بواسطة نظام تحديد المواقع.
  2. للوصول إلى عمود المياه، وأبدأ من خلال حفر حفرة في الجليد مع اوجير الجليد لمح البصر تعلق على تمديد لمح البصر الرحلة 4 بوصة، وقطع بعض الشيء. لمنع تجميد الحفر في الحفرة، في محاولة لتجنب عمليات الحفر في المياه السائلة من خلال وقف عمليات الحفر حوالي 4-6 بوصة فوق الجزء العلوي من عمود الماء.
  3. سيتم حفر حفرة يجب أن اتسعت من قطرها من 15 إلى 60 سم قبل أخذ العينات. يتم ذلك عن طريق استخدام melter حفرة (النموذجي Hotsy) الذي يدور ساخنة البولي ايثيلين جلايكول من خلال أنبوب نحاسي. ذوبان ثقب عادة ما يستغرق ما يصل الى 18 ساعة.
  4. قبل أخذ عينات عمود الماء، وضمان أن جميع المعدات اللازمة وسانت عينةويتم تجميع السفن orage في موقع أخذ العينات. مواد أخذ العينات ما يلي: زجاجة Niskin (5-10 سعة لتر)، الونش مع كابل متعمقة معايرة، رسول، وزجاجات عينة كافية لكل عمق أخذ العينات ومبردات لنقل العينات.
  5. يبدأ أخذ العينات في وقت مبكر من اليوم (~ 5 صباحا)، كما ينبغي أن يستكمل تصفية مياه البحيرة في اليوم لأخذ العينات. جمع عينات من المياه (1-5 لتر) من الأعماق المطلوبة (لهذه الدراسة: 6 متر، 15 متر وعمق 18 م أخذ العينات، ويقاس من مستوى المياه piezometric في حفرة الجليد) باستخدام العينات Niskin تعلق على معايرة يد ونش. للحيلولة دون اضطراب في عمود الماء جمع أعماق ضحلة قبل أعمق منها.
  6. تخزين عينات بحيرة في مبردات ووسائل النقل من موقع العينة إلى المختبر الميداني باستخدام زلاجات ملحقة ATV (كل مركبة التضاريس). وينبغي أن تتم معالجة عينات أو استقر (على سبيل المثال: فلاش التجميد في النيتروجين السائل) في مجال أخذ العينات المخبرية التالية مباشرة.

2. DevelopmeNT الثقافات التخصيب

  1. للزراعة من الثقافات تخصيب اليورانيوم، والتركيز 0،5-1 لتر من مياه البحيرة على 47 ملم مسام ميكرون 0.45 المرشحات polyethersulfone حجم باستخدام الترشيح لطيف (<0.3 ATM). إذا كان المطلوب التنوع في المجتمع الطبيعي، وتصفية النموذج الثاني على 47 ملم 0.45 ميكرون حجم المسام المرشحات polyethersulfone والمتابعة وفقا لبروتوكولات وآخرون Bielewicz. 4 للتنوع حقيقي النواة النشوء والتطور.
  2. نقل مرشح إلى 50 مل أنبوب صقر العقيمة التي تحتوي على ~ 20 مل من مياه البحيرة التي تمت تصفيتها التي تم جمعها من عمق أخذ العينات نفس المرشح. غسل بلطف خلايا من مرشح باستخدام ماصة معقمة.
  3. نقل تعليق خلية إلى 25 سم 2 معقم خلية قارورة الثقافة. إضافة تصفية مياه البحيرة التي تم جمعها من كل عمق عينة لزيادة حجم ثقافة إلى 45 مل. إعداد عدة نسخ متماثلة لكل عمق أخذ العينات وإذا رغبت التخصيب على وسائل الإعلام ثقافة مختلفة.
  4. تكملة قوارير ثقافة مع 50X Sterile حلول لتركيز النهائي من 1X من وسائل الإعلام ثقافة التالية: متوسطة جريئة للبصل، وBG11 F / 2. إذا كان مطلوبا زراعة الكائنات mixotrophic، مجموعة المتابعة سفينتين F/2-supplemented وإضافة 2-3 حبات الأرز عقيمة إلى واحدة من القوارير.
  5. احتضان ثقافة القوارير في درجات الحرارة المنخفضة (4 درجة مئوية) والإشعاع منخفض (20 الفوتونات μmol م -2 S -1) في نمو درجة الحرارة التي تسيطر عليها حاضنة لل4 أسابيع على الأقل في القارة القطبية الجنوبية قبل شحنها إلى الولايات المتحدة المختبر الخاص بك. وإذا رغبت العزلات، لوحة 250 ميكرولتر من ثقافة تخصيب اليورانيوم على لوحات تحتوي على وسائل الاعلام أجار النمو المناسب بعد حضانة 2 أسابيع.
  6. لشحنها إلى الولايات المتحدة، والثقافات نقل عملية التخصيب الى معقم أنابيب فالكون 50 ملليمترا. طلب شرط شحن "لا تجميد" و "الحفاظ على الهدوء" في شحن الطلب. في حين أن عملية الشحن من القارة القطبية الجنوبية هو سريع نسبيا (2 اسابيع من قبل الطيران التجاري)، وموثوق بها للغاية، هناك احتمال لفقدان الجهاز الحساسيةالمذهبين أثناء عملية النقل. وبالتالي، قد المحققين يريدون الحفاظ على عينة فرعية قبل الشحن حتى يمكن تقييم تلك الخسارة من أنواع معينة أثناء عملية الشحن.
  7. لدى وصوله الى الولايات المتحدة، وتوج نقل 5 مل من ثقافة تخصيب اليورانيوم إلى 45 مل من وسائط النمو المناسب في قارورة 125 مل مخروطي العقيمة مع اسفنجة العقيمة. ينبغي الحفاظ على الثقافات تخصيب اليورانيوم كما يقف الثقافات في درجة حرارة الغرفة التي تسيطر نمو البيئية (نهاري غرفة النمو، VWR) في 4 درجات C/20 الفوتونات μmol م -2 ث -1. ينبغي أن تنقل إلى وسائل الإعلام الثقافات جديد كل 30 يوما.

3. استخراج الخلايا المحللة من الإغناء المصفاة

  1. فلتر 5 مل من ثقافة التخصيب في الصعود إلى 25 مم Whatman GF / F مرشح باستخدام فراغ لطيف (<10 رطل). ويمكن تخزين مرشح لعدة أسابيع في -80 درجة مئوية قبل يعاير RubisCO النشاط.
  2. قطع مرشح إلى أقسام 4-5 مع مقص الصلب معقمة ونقل مليئة القطع مع ملقط معقم لأنبوب 2 مل كاب المسمار خمس الطريق كامل مع الخرز الزركونيا 0.1 ملم / السيليكا القطر.
  3. إضافة 1.25 مل من عازلة استخراج فلتر (50 bicine ملم، 10 ملم MgCl 2، 1 ملم EDTA، 5 ملغ / مل BSA، و 0.1٪ تريتون X-100، إضافة جديدة: 10 ملم NaHCO 3 و 10 ملي DTT، 3.3 مم أمينوكابرويك حامض، 0.7 benzamidine مم، درجة الحموضة 7.8) 13 وتعطيل الخلايا باستخدام الخافق Minibead ثلاث مرات ل30S بشأن تحديد سرعة 48. لمنع تسخين العينة، beadbeating البديل مع 1 دقيقة حضانة الجليد.
  4. منبذة الطين مرشح لمدة 2 دقيقة في 3000 XG في درجة مئوية 4 إلى تشكيل بيليه فضفاض من GF / F الألياف مرشح وحطام خلية جدار.
  5. إزالة قسامة 200 ميكروليتر وتزج في 800 ميليلتر من الجليد الباردة الأسيتون 90٪. قياس الكلوروفيل استخراج (CHL) 1 في معمل في قيم الطول الموجي من 664 نانومتر و 647 نانومتر 14. نقل وطاف على أنبوب microcentrifuge 1.5 مل.
  6. منبذة remainiنانوغرام طاف عند 4 درجة مئوية لمدة 2 دقيقة على 15000 XG ونقل طاف (تجنب بيليه من الأغشية الخلوية غير قابلة للذوبان والبقاء GF / F ألياف فلتر) لتنظيف 1.5 مل أنبوب microcentrifuge. ربما الآن هذه المحللة الخلية القابلة للذوبان يمكن استخدامها في نشاط RubisCO فحص كربوكسيلاز.
  7. قد يتم تخزين المحللة في -80 درجة مئوية بعد إضافة الجلسرين 12.5٪ وتجميد فلاش في النيتروجين السائل. ويجوز للخسارة من النشاط تحدث بعد دورات تجميد / الذوبان متعددة تبعا لحساسية هذه الانزيمات في المحللة. ولذلك، يجب اختبار النشاط من جديد المحللة مقابل المجمدة من قبل على نطاق واسع خلية المحللة الاستخراج.

4. RubisCO تصفية نشاط كربوكسيلاز الفحص

  1. نقل 125 ميكرولتر من المحللة قابل للذوبان لولبية 15 مليلتر أنبوب microcentrifuge قبعة (كاب غير مطلوبة) التي تم الفتور على الجليد. لعينات مراقبة سلبية، إضافة 125 المحللة للذوبان ميكرولتر إلى 15 مل أنبوب المسمار microcentrifuge كأب، ولكن لا تضيف الركيزة (في الخطوة 4.7). تشغيلتكرار ردود الفعل بالنسبة لجميع العينات والمراقبة السلبية.
  2. تحضير 10 مل من عازلة فحص جديد (50 ملم Bicine، هيدروكسيد الصوديوم، ودرجة الحموضة 8.0، 50 مم NaHCO 3، 25 مم MgCl 2) والبرد على الجليد. ما يكفي من المخزن المؤقت لفحص جميع العينات سلبية والضوابط (100 ميكرولتر لكل عينة / مراقبة اضافية بالاضافة الى 100 ميكرولتر) إلى أنبوب 5 مل قسامة. تنفيذ كافة الخطوات اللاحقة تحت غطاء دخان.
  3. اضافة 40 ميكرولتر ناه 14 CO 3 (500 μCi / مل) لكل مليلتر من المخزن إلى المخزن المؤقت فحص aliquoted والحفاظ على المنطقة العازلة على الجليد.
  4. إزالة 10 ميكرولتر من المنطقة العازلة التي تحتوي على فحص 14 C وتمييع في 1 مل من عازلة فحص. بعد قلب لخلط، إضافة 100 ميليلتر من مزيج من 1:100 المخفف إلى 3 مل من التلألؤ الثاني الحيوي الآمن عد كوكتيل في قارورة التلألؤ. قلب لخلط. وينبغي أن التهم التلألؤ (بيكمان LS6500) أن يكون أكثر من 18،000 نسخة في الدقيقة قبل الاستمرار في فحص.
  5. عندما يكفي ناه تم إضافة 14 CO 3 إلى المخزن المؤقت فحص،نقل أنابيب رد فعل على حمام جاف مسبقا إلى درجة مئوية 25 و احتضان لمدة 3-5 دقائق.
  6. إضافة 100 العازلة فحص ميكرولتر إلى lysates واحتضان لمدة 5 دقائق عند 25 درجة مئوية.
  7. إضافة 20 ميكرولتر من 15 ملم bisphosphate ريبولوز، على عينات والسماح للتفاعل والمضي قدما لدقائق 5-10 عند 25 درجة مئوية.
  8. إضافة 100 حامض البروبيونيك ميكرولتر (100٪) (فيشر) لوقف رد الفعل. أجهزة الطرد المركزي لمدة 1 ساعة في 2000 XG لاستنفاد الفردية 14 C.
  9. نقل الحجم الكلي للعينات إلى قارورة تحتوي على 3 مل التلألؤ التلألؤ الثاني الحيوي الآمن كوكتيل العد. تحديد الاجتماع التحضيري للمؤتمر لمنتجات حامض نهاية مستقر عن طريق عد التلألؤ (B. ويت، R. تابيتا اتصال شخصي).
  10. حساب معدلات النشاط RubisCO على CHL أساس 14.

5. ممثل النتائج

نحن المستخدمة في تخصيب اليورانيوم لزراعة عزل ضوئي تكيفا مع البرودة والأولانيات mixotrophic المقيمين في القطب الجنوبي Lأك بوني. للقبض على أكبر تنوع من الكائنات الحية، ونحن اختبار نمو 3 أنواع وسائل الإعلام: متوسطة جريئة للبصل (BBM) 15، F/2-Si البحرية متوسط ​​16 و 17 و 18 BG11 متوسطة. وكشف الفحص البصري للثقافات تخصيب اليورانيوم بواسطة المجهر الضوئي التي كانت تهيمن على الثقافات بواسطة الأولانيات ضوئي (المشار إليها من خلال وجود صبغة الكلوروفيل في معظم الخلايا)، وتؤوي مجموعة متنوعة من morphologies الخلية اعتمادا على عمق أخذ العينات من الذي اتخذ اللقاح و نوع من وسائل الإعلام المستخدمة في ثقافة (الشكل 1).

قمنا بقياس معدلات الحد الأقصى لنشاط كربوكسيلاز حفزتها RubisCO انزيم كوكيل لإمكانية تثبيت الكربون. تم رصد أيضا CHL وفرة كتقدير من الكتلة الحيوية أولاني ضوئي (الشكل 2). على الرغم من زراعة من جميع الثقافات في ظل نظام درجة الحرارة / الضوء نفسه (أي 4 درجات C/20 μmol م -2 S -1) تثبيت الكربون، وإمكانيةوتفاوتت الكتلة الحيوية ضوئي بشكل كبير بين الثقافات تخصيب اليورانيوم. وقد لوحظ نشاط في أقصى RubisCO الثقافات تخصيب متزايد سواء في BBM (الإغناء 4 و 6) أو BG11 (الإغناء 13 و 14) وسائط النمو، في حين أن الثقافات المخصب في المتوسط ​​نمو F / 2 (الإغناء 19 و 21 و 23) عرضت لمدة 4 - إلى أدنى 34 أضعاف الأنشطة كربوكسيلاز أقصى. وكانت هذه الخلافات ليس بسبب انخفاض مستويات الكتلة الحيوية في الثقافات F / 2، كما أعرب عن نشاط كربوكسيلاز على أساس CHL. وعلاوة على ذلك، لم RubisCO النشاط لم تكن متطابقة مع تركيز 1 CHL (R = -0.023، P> 0.1؛. الشكل رقم 2، والشكل). كان للثقافات BBM تلقيح مع مياه البحيرة من م م و 15 (6 الإغناء 4 و 5) على أعلى المستويات CHL 1، في حين أن جميع الثقافات الأخرى المعروضة CHL منخفض نسبيا، بغض النظر عن نشاط انزيم RubisCO (الشكل 2).

figure-protocol-1
الشكل 1.ممثل الثقافات تخصيب الجراثيم حقيقي النواة التي حددتها لنمو الكائنات الحية المختلفة. وتعطى هوية للثقافة في أسفل اليسار من لوحات. كل الصور تمثل الميكروسكوب ضوء إنشاؤها باستخدام الغمر النفط في التكبير 1000X.

figure-protocol-2
الشكل 2. المحتملة قدرة تثبيت الكربون والكلوروفيل استخراجها 1 المستويات في القطب الجنوبي الثقافات الميكروبية تخصيب حقيقي النواة معزولة من بحيرة بوني ونمت على وسائط الثقافة المختلفة. انظر الجدول رقم 1 للحصول على تفاصيل ثقافة أقحم: ارتباط بيرسون بين الكلوروفيل إمكانية تثبيت الكربون في وفرة والثقافات القطب الجنوبي الميكروبية تخصيب حقيقي النواة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأفادت الدراسات الجزيئية الأخيرة من درجة عالية من التنوع وحيدة الخلية حقيقيات النوى عبر مجموعة من البيئات 3، 19، 20، ولكن نظرا لعدم وجود عزلة عبر طائفة كاملة من الموائل أولاني الأدوار الوظيفية لهذه الأنواع الفردية في الشبكات الغذائية هي إلى حد كبير غير معروف. في هذه الدراسة، وقد وصفت نحن منهجيات لإثراء حقيقي النواة لأنواع الجراثيم واظهار براعة التمثيل الغذائي من بيئة undersampled نسبيا، وبشكل دائم المغطاة بالجليد في القطب الجنوبي البحيرة. عرضت الثقافات المخصب من أعماق م...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدينا ما يكشف.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المؤلفان بالشكر J. Priscu، Chiuchiolo ألف وفريق ماك موردو المياه العذبة LTER للحصول على المساعدة في جمع وحفظ العينات في القارة القطبية الجنوبية. نشكر Ratheon خدمات القطبية ومروحيات PHI لتقديم الدعم اللوجستي. وقد تم توليد الميكروسكوب ضوء في مركز ميامي للفحص المجهري المتقدم ومركز التصوير. وأيد هذا العمل من قبل مكتب جبهة الخلاص الوطني من برامج المنح القطبية 0631659 و 1056396.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
اسم كاشف شركة فهرس العدد تعليقات
BBM سيغما B5282
BG11 سيغما C3061
F / 2 سيغما G9903
GF / F مرشح، 25 مم فيشر العلمية 09-874-64
GF / F مرشح، و 47 مم فيشر العلمية 09-874-71
Polyethersulfone مرشح، 0.45 ميكرون المسام، 47 مم بظلالها العلوم الحياتية 61854
معقم قارورة ثقافة الخلية، 25 سم 2 كورنينج 430639
النهاريةل نمو غرفة VWR 35960-076
زركونيا / حبات السيليكا، 0.1 مم diamter المنتجات BioSpec 11079101z
مصغرة الخرزة الخافق المنتجات BioSpec 3110BX
المسمار سقف أنبوب microcentrifuge (1.5 ميكرولتر) الولايات المتحدة الأمريكية والعلم 1415-8700
ناه 14 CO 3 ViTrax VC 194 نضع في aliquots من 400 ميكروليتر في -20 درجة مئوية
RuBP سيغما R0878-100mg حل في 10 حامض البروبيونيك تريس، مم (درجة الحموضة 6.5)

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Morgan-Kiss, R. M., Priscu, J. P., Pocock, T., Gudynaite-Savitch, L., Hüner, N. P. A. Adaptation and acclimation of photosynthetic microorganisms to permanently cold environments. Microbiol Mol. Biol. Rev. 70, 222-252 (2006).
  2. Priscu, J. C., Wolf, C. F., Takacs, C. D., Fritsen, C. H., Laybourn-Parry, J., Roberts, J. K. M., Berry-Lyons, W. Carbon transformations in the water column of a perennially ice-covered Antarctic Lake. Biosci. 49, 997-1008 (1999).
  3. Caron, D. A., Worden, A. Z., Countway, P. D., Demir, E., Heidelberg, K. B. Protists are microbes too: a perspective. ISME J. 3, 4-12 (2009).
  4. Bielewicz, S., Bell, E. M., Kong, W., Friedberg, I., Priscu, J. C., Morgan-Kiss, R. M. Protist diversity in a permanently ice-covered Antarctic lake during the polar night transition. ISME J. 5, 1559-1564 (2011).
  5. Laybourn-Parry, J. No place too cold. Science. 324, 1521-1522 (2009).
  6. Roberts, E. C., Laybourn-Parry, J. Mixotrophic cryptophytes and their predators in the Dry Valley lakes of Antarctica. Freshwat. Biol. 41, 737-746 (1999).
  7. Roberts, E. C., Priscu, J. C., Laybourn-Parry, J. Microplankton dynamics in a perennially ice-covered Antarctic lake-Lake Hoare. Freshwat Biol. 27, 238-249 (2004).
  8. Bell, E. M., Laybourn-Parry, J. Mixotrophy in the Antarctic phytoflagellate Pyramimonas gelidicola. J. Phycol. 39, 644-649 (2003).
  9. De Wever, A., Leliaert, F., Verleyen, E., Vanormelingen, P., Van der Gucht, K., Hodgson, D. A. Hidden levels of phylodiversity in Antarctic green algae: further evidence for the existence of glacial refugia. Proc. Biol. Sci. , 276-3591 (2009).
  10. Laybourn-Parry, J. Survival mechanisms in Antarctic lakes. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 357, 863-869 (2002).
  11. Lizotte, M. P., Priscu, J. C. Distribution, succession and fate of phytoplankton in the dry valley lakes of Antarctica, based on pigment analysis. Ecosystem Dynamics in a Polar Desert: The McMurdo Dry Valleys. Priscu, J. C. , 229-240 (1998).
  12. Ellis, R. J. Most abundance protein in the world. Tren. Biochem. Sci. 4, 241-244 (1979).
  13. Tortell, P. D., Martin, C. L., Corkum, M. E. Inorganic carbon uptake and intracellular assimilation by subarctic Pacific phytoplankton assemblages. Limnol. Oceanogr. 51, 2102-2110 (2006).
  14. Jeffrey, S. W., Humphrey, G. F. New spectrophotometric equations for determining chlorophyll a, b, c1, c2 in higher plants, algae and natural phytoplankton. Biochem. Physiol. Pflanz. 167, 191-194 (1975).
  15. Morgan, R. M., Ivanov, A. G., Priscu, J. C., Maxwell, D. P., Hüner, N. P. A. Structure and composition of the photochemical apparatus of the Antarctic green alga, Chlamydomonas subcaudata. Photosyn. Res. 56, 303-314 (1998).
  16. Guillard, R. R. L. Culture of phytoplankton for feeding marine invertebrates. Culture of Marine Invertebrate Animals. Smith, W. L., Chanley, M. H. , Plenum Publishing. New York. 29-60 (1975).
  17. Johnson, M. D., Tengs, T., Oldach, D., Stoecker, D. K. Sequestration, performance, and functional control of cryptophyte plastids in the ciliate Myrionecta rubra (Ciliophora. J. Phycol. 42, 1235-1246 (2006).
  18. Rippka, R., Deruelles, J., Waterbury, J., Herdman, M., Stanier, R. Generic assignments, strain histories and properties of pure cultures of cyanobacteria. J. Gen. Microbiol. 111, 1-61 (1979).
  19. Not, F., del Campo, J., Balague, V., De Vargas, C., Massana, R. New insights into the diversity of marine picoeukaryotes. PLoS ONE. 4, e7143(2009).
  20. Sherr, B. F., Sherr, E. B., Caron, D. A., Vaulot, D., Worden, A. Z. Oceanic Protists. Oceanography. 20, 130-135 (2007).
  21. Finlay, B. J. Protist taxonomy: an ecological perspective. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 359, 599-610 (2004).
  22. Foissner, W. Protist diversity: estimates of the near-imponderable. Protist. 150, 363-368 (1999).
  23. Gast, R. J., Moran, D. M., Dennett, M. R., Caron, D. A. Kleptoplasty in an Antarctic dinoflagellate: caught in evolutionary transition. Environmental Microbiology. 9, 39-45 (2007).
  24. Gast, R. J., Moran, M. A., Beaudoin, D. J., Blythe, J. N., Dennett, M. R., Caron, D. A. High abundance of a novel dinoflagellate phylotype in the Ross Sea. Antarctica. J. Phycol. 42, 233-242 (2006).
  25. Moran, D. M., Anderson, O. R., Dennett, M. R., Caron, D. A., Gast, R. J. A Description of Seven Antarctic Marine Gymnamoebae Including a New Subspecies, Two New Species and a New Genus: Neoparamoeba aestuarina antarctica n. subsp., Platyamoeba oblongata n. sp., Platyamoeba contorta n. sp. and Vermistella antarctica n. gen. n. sp. Journal of Eukaryotic Microbiology. 54, 169-183 (2007).
  26. Rose, J. M., Vora, N. M., Countway, P. D., Gast, R. J., Caron, D. A. Effects of temperature on growth rate and gross growth efficiency of an Antarctic bacterivorous protist. The ISME journal. 3, 252-260 (2009).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

RubisCO

مقالات ذات صلة