Method Article

تلطيخ بروتوكولات لجزر البنكرياس الإنسان

DOI:

10.3791/4068

⸱

May 23rd, 2012

 ,  ,  ,  , 
1Department of Pathology, Immunology, and Laboratory Medicine, University of Florida

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا الفيديو يشرح الإجراءات اللازمة لتوصيف البنكرياس الجزر الإنسان باستخدام الهيماتوكسيلين ويوزين (H & E) والمناعية (IHC). وملطخة أقسام البنكرياس من الرأس والجسم، ومنطقة الذيل من جانب كل من H & E وIHC لتحديد جزيرة تكوين الغدد الصماء (الأنسولين، الجلوكاجون، والبنكرياس ببتيد)، والنسخ الخلية (Ki67)، وتتسرب التهابات (H & E، CD3). يكون موضعيا في المنطقة الكلابي باستخدام IHC للببتيد البنكرياس.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقديرات لمنطقة جزيرة وأرقام والغدد الصماء في البنكرياس تكوين الخلية البشرية الكبار تختلف من مائة ألف إلى عدة نطاقات الشامل عدة ملايين وبيتا من 500 إلى 1-3 ملغ 1500. مع هذا التباين المعروفة، وقد وضعت لتجهيز قياسي، وتلطيخ الاجراء بحيث حددت بوضوح مناطق البنكرياس والجزر تتميز باستخدام التشريح المرضي الدقيق والفحص immunolocalization.

وصفت إجراءات موحدة لمعالجة البنكرياس الإنسان تعافى من المتبرعين في الجزء 1 من هذه السلسلة. تتم معالجة البنكرياس إلى 3 مناطق رئيسية (رأس والجسم، والذيل)، يليه قطاعات عرضية. وتنقسم مزيد من المقاطع العرضية من رأس البنكرياس، كما هو مبين على أساس الحجم، ومرقمة حسب الترتيب الأبجدي للدلالة على الفروع. هذا التوحيد القياسي يسمح للتحليل كامل المقطعية في المنطقة بما في ذلك منطقة رأس الكلابي الذي يحتوي على الجزر تتكونفي المقام الأول من خلايا البنكرياس ببتيد للمنطقة الذيل.

التقرير الحالي يضم الجزء 2 من هذه السلسلة، ويصف الإجراءات المستخدمة لباجتزاء مسلسل وتوصيف الأنسجة من المقاطع البارافين البنكرياس مع التركيز على خلايا الغدد الصماء جزيرة، والنسخ، وتتسرب تي خلية. ويهدف علم الأمراض من الأقسام البنكرياس لتوصيف كل من إفرازات، ductular، ومكونات الغدد الصماء. يتم تقييم مقصورة الاكسوكرين عن وجود التهاب البنكرياس (النشطة أو المزمنة)، وضمور، والتليف، والدهون، فضلا عن نظام لاصق، وخصوصا في العلاقة مع وجود ورم البنكرياس ينترادوكتال 4. يتم تقييم الجزر لمورفولوجيا والحجم والكثافة، وخلايا الغدد الصماء، والتهاب، والتليف، اميلويد، ووجود خلايا تكرار أو أفكارك باستخدام H & E والبقع IHC.

العنصر الأخير هو موضح في الجزء 2 هو توفير الشريحة الملونالصورة الرقمية والصور الشريحة بأكملها. ويتم تنظيم الشرائح الرقمية على حدة والمنطقة البنكرياس في قاعدة بيانات على الانترنت علم الأمراض إنشاء البنك الحيوي الظاهري. ويجري حاليا توفير إمكانية الوصول إلى هذه المجموعة على الانترنت لأكثر من 200 الأطباء والعلماء المشاركين في البحث السكري من النوع 1. قاعدة البيانات على الانترنت يوفر وسيلة لتبادل البيانات السريع والكامل، وعلى المحققين تحديد كتل لالبارافين أو مقاطع المسلسل المجمدة.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Microtomy لأقسام غير ملوثين

  1. اقامة الحمام المائي ومشراح كما لmicrotomy البارافين العادي. استخدام الشرائح الموجبة وقبل التسمية مع رقم القضية، منطقة البنكرياس (عينة) ورقم الشريحة. مكان كتلة البارافين في تشاك مشراح مع التسمية كاسيت على الجانب الأيسر.
  2. اتباع الإجراءات microtomy طبيعي، المقطع إلى كتلة حتى مصادفة موحد النسيج. إنتاج الشريط من المقاطع مسلسل (4 ميكرون سميكة و 3-6 اعتمادا على عدد من البقع المطلوبة الأولي (انظر نموذج تقديم القضية، الملحق 1)). أقسام منفصلة في الشريط، والتقاط كل في النظام، ومكان على الشرائح مع النظام معدودة مع قلم رصاص. دلالة على ما إذا كان القسم غير المستخدمة من قبل ترقيم المقاطع في النظام الدقيق. الحفاظ على التوجه نفسه على الشريحة كما هو موجود في كاسيت مع التسمية الشريحة الموجهة إلى اليسار. تجف بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة ثم المضي قدما في تلطيخ أو توزيع للمحققين.
  3. الدقةEAL سطح كتلة البارافين مع طبقة رقيقة من البارافين للحفاظ على الأنسجة والأرشيف في درجة حرارة الغرفة أو -20 درجة مئوية.
  4. لmicrotomy لاحق، والحفاظ على ترقيم مقاطع المسلسل في كل مستوى على النحو الوارد أعلاه. الحصول على 1 شريحة إضافية وصمة عار من قبل شريحة H & E لكل مستوى ~ 100 ميكرومتر داخل كل كتلة.

2. H & E تلطيخ

  1. وضع أول شريحة مقطوع المسلسل من كل كتلة في رفوف الشريحة ثم في الدرج الأول على autostainer.
  2. تحديد معيار H & E برنامج وصمة عار والمضي قدما على النحو المعتاد.
  3. عند الانتهاء من التلوين، وإزالة الشرائح من autostainer ومكان في غطاء محرك السيارة لcoverslipping.
  4. ساترة باستخدام تقنية قياسية. يجف تماما والتسمية مع تسمية المطبوعة (انظر القسم 12).

3. IHC مجموعة المتابعة

  1. حدد البرنامج داكو عن البقع المزدوجة وأرقام المدخلات من الشرائح. إعداد TBST وسترات مخازن، والأجسام المضادة، وغيرها من reagالوالدان وفقا للكميات المحددة (الجدول 1). تحميل علبة الكاشف والشرائح. مبرمجة تناوب نظيفة وخطوط النفايات وفقا لتوصيات الشركة الصانعة.
  2. إذا أداء هذه المقايسات يدويا، وإعداد تقدير الأحجام. احتضان الشرائح في غرفة مرطب لتجنب تجفيف الشرائح في أي خطوة. اتبع نفس الإجراء لكل الكواشف كما هو الحال عندما تستخدم لautostainer.

4. IHC Deparaffinization واسترجاع مستضد

  1. وضع الشرائح في الزيلين لمدة 5 دقائق. أكرر مرة واحدة. لا تسمح الشرائح لتجف في أي مرحلة لاحقة حتى كما هو مبين هذا سيؤدي في الخلفية بشكل مفرط وتلطيخ الفقراء.
  2. نقل الشرائح إلى الإيثانول بنسبة 100٪ لمدة 2 دقيقة. أكرر مرة واحدة.
  3. وضع الشرائح في الطازجة 3٪ O 2 H 2 في الميثانول لمدة 10 دقائق.
  4. تراجع الشرائح في الايثانول 90٪ ومن ثم وضع في الايثانول 90٪ لمدة 3 دقائق.
  5. نقل الشرائح إلى70٪ الايثانول لمدة 1 دقيقة.
  6. شطف الشرائح في دي المتأينة المياه.
  7. سخن باخرة وسترات العازلة في باخرة لمدة 5 دقائق.
  8. إضافة شرائح إلى سيترات عازلة في باخرة والبخار لمدة 30 دقيقة.
  9. نقل على الفور إلى الشرائح المياه وعقد حتى تنزلق بارد إلى درجة حرارة الغرفة (~ 20 دقيقة).
  10. نقل الشرائح على رفوف autostainer داكو وفقا لتسلسل وصمة عار (الشكل 1) وتشغيل البرنامج تلطيخ مزدوجة. يتم سرد الخطوات الرئيسية لبرنامج autostainer بحيث يدير دليل يمكن تكرار.

5. الأجسام المضادة الأولية الأول (كي-67، CD3، البنكرياس ببتيد)

  1. منع الشرائح مع حل قناص لمدة 15 دقيقة. غسل مرتين مع TBST.
  2. احتضان الشرائح في الأجسام المضادة الأولية لمدة 30 دقيقة. غسل مرتين مع TBST.
  3. احتضان مع Mach2 الماعز المضادة للماوس (كي 67) أو المضادة أرنب-(CD3، البنكرياس ببتيد) حصان الفجل البيروكسيديز (HRP) البوليمر لمدة 30 ساعةinutes. غسل مرتين مع TBST.
  4. تطبق 3،3-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) على الشرائح لمدة 4 دقائق. تغسل بالماء مرتين.
  5. ويحتجز الشرائح المحتضنة مع ببتيد البنكرياس على داكو عندما يجري في وقت واحد يعاير وTBST تستخدم لجميع الخطوات اللاحقة في حين يتم تحضين الشرائح المتبقية مع المجموعة الثانية من الأجسام المضادة الأولية. بدلا من ذلك، لفحوصات دليل، انتقل إلى القسم 6.

6. الأجسام المضادة الابتدائية الثانية (الأنسولين، الجلوكاجون)

  1. احتضان الشرائح في ديب لمدة 20 دقيقة. غسل مرتين مع TBST.
  2. كتلة مع 10٪ مصل الماعز الطبيعي في مانع أفيدين 20٪ في TBST (الأنسولين) أو القناص (الجلوكاجون) في TBST لمدة 20 دقيقة. غسل مرتين مع TBST.
  3. احتضان مع الأنسولين أو الأجسام المضادة الجلوكاجون الأولية لمدة 15 دقيقة. غسل مرتين مع TBST.
  4. الأنسولين: الشرائح في احتضان المعقدة البيروكسيديز خنزير غينيا لمكافحة الماعز في 1:300 تخفيف لمدة 30 دقيقة. غسل مرتين مع TBST. لقد احتضان مع معيارctor ABC-AP كاشف لمدة 30 دقيقة. غسل مرتين مع TBST.
  5. الجلوكاجون: احتضان الشرائح العازلة في خلال مدة 30 دقيقة تليها الماعز الفوسفاتيز القلوية لمكافحة فأر (ا ف ب) البوليمر لمدة 30 دقيقة. غسل مرتين مع TBST.
  6. في حين يتم تحضين الشرائح في تقارن، تدفئة العازلة LPR إلى درجة حرارة الغرفة. إضافة 1 قطرة من السائل الأحمر دائم (LPR) لكل العازلة مل 3 فوري قبل الاستعمال ومكان في رف كاشف داكو. احتضان الشرائح في LPC لمدة 4 دقائق. تغسل بالماء مرتين.
  7. احتضان الشرائح في الهيماتوكسيلين لمدة 1 دقيقة. شطف بالماء مرتين.
  8. احتضان الشرائح في درجة الحموضة 7.6 TBS لمدة 1 دقيقة. شطف بالماء مرتين.
  9. تفريغ الشرائح من Autostainer DAKO.
  10. يذوى فورا الشرائح ملطخة للببتيد البنكرياس. للشرائح كافة ملون مزدوج، جاف لا يقل عن 1 ساعة ثم جفف.

7. جفاف

  1. مكان ينزلق في الايثانول 80٪ لمدة 1 دقيقة.
  2. تراجع الشرائح في الايثانول 95٪.
    3. عقد الشرائح في الايثانول 95٪ لمدة 30 ثانية.
  3. نقل الشرائح إلى الإيثانول بنسبة 100٪ والاستمرار على 1 دقيقة. كرر.
  4. تراجع الشرائح في الزايلين.
  5. عقد الشرائح في الزيلين لمدة 1 دقيقة. كرر.
  6. تحميل فورا coverslips على الشرائح باستخدام cytoseal.

8. شريحة وصفها

  1. أدخل المعلومات بما في ذلك تحديد حالة رقم الجهاز وكتلة، وصمة عار، وتاريخ والطباعة. المسلسل رقم القسم هو اختياري للبقع الشريحة الأولى من كل كتلة. وتدل المستويات لاحق من قبل الترقيم.
  2. وضع علامات على الشرائح.

9. الشريحة المسح الضوئي

  1. وضع الشرائح الملون في علبة الماسحة الضوئية وفقا لمسح الأجهزة.
  2. تنظيم الشرائح وفقا لنوع المانحة والنسيج (رأس البنكرياس، الجسم، والذيل، والطحال).
  3. الشرائح الأرشيف الملون في درجة حرارة الغرفة، وأية شرائح المتبقية غير ملوثين في -20 درجة مئوية حتى استخدامها.

10. Representative النتائج

وقد وضعت هذه الإجراءات تلطيخ لشبكة JDRF للمانحين الجهاز البنكرياس مع مرض السكري (nPOD) لتوفير توصيف خط الأساس من البارافين وكتل الطازجة والمجمدة. كل جهة مانحة لديها خصائص أساسية يؤديها تتألف من تلطيخ 2 قطعة من كل منطقة البنكرياس (رأس والجسم والذيل) والطحال (الشكل 1، وانظر أيضا قضية استمارة التقديم، الملحق 1). ويجري في تلطيخ H & E باستخدام autostainer المبرمجة بالنسبة للمنشأة الطبية السريرية مع الصف الحلول المستخدمة في جميع أنحاء. كما كتل إضافية من الجهات المانحة هي مقطوع، لكل منها شريحة المتخذة لH & E لاظهار مورفولوجيا الأنسجة. عندما كتل هي مقطوع مرة أخرى، كما لتوزيعها على المحققين، وسوف يكون أيضا مستويات أعمق الشرائح التي اتخذت لH ممثل والشرائح الإلكترونية لتوثيق مورفولوجيا كتلة بأكمله الأنسجة وكذلك ترقيم المقاطع المسلسل على كل مستوى. وصفت الشرائح ملطخةتحديد الحالة، منطقة البنكرياس، وعدد الكتلة، وصمة عار التاريخ (الشكل 2) وفحصها في علم الأمراض على الانترنت نظام إدارة المعلومات. وتظهر الصور ممثل من إحدى الجهات المانحة تحكم في الشكل (3) في كلا تكبير المنخفضة والعالية لإظهار النتائج المتوقعة بعد هذا الإجراء. وكان يعاير والملون الشريحة مع البنكرياس ببتيد (D، H) في يوم آخر مع فحص بشكل يدوي ويظهر انخفاض كثافة تلطيخ من ملون مباين الهيماتوكسيلين. الاختلافات في تلطيخ كثافة الأجسام المضادة الأولية أو ملون مباين بين المقايسات التي ينبغي تجنبها لا سيما إذا كان استخدام تحليل الصور الشرائح خلاف مع شخص تتطلب تصحيح الألوان لتحقيق مجالات نفس الخلية أو التهم الموجهة إليه.

يجب على كل مختبر نتوقع لتحسين تركيز الأجسام المضادة كما الكثير إلى الكثير اختلاف والكواشف وشروط أخرى يمكن أن تؤثر على شدة تلطيخ والتحديد. مع اكتساب الجرمية جديدأيها السادة، يتم التحقق من صحة إجراءات تلطيخ مع عينات معروفة السيطرة الإيجابية والسلبية لتحقيق نفس الدرجة من الحدة وصمة عار كما هو الحال مع الكواشف السابقة. وتقدم الأضداد إضافية الأمثل في صميم علم الأمراض nPOD في الجدول رقم 2 كمصدر مرجعي واستخدمت لmultilabeling المقايسات المناعي للمتحد البؤر المجهري.

figure-protocol-1
الشكل 1. داكو شبكة تلطيخ. هذا تخطيطي يصور تحليل روتيني من البنكرياس المانحة nPOD يقوم على autostainer داكو. وتصنف الدول المانحة nPOD مع رقم الهوية المكون من 4 أرقام. وتظهر الشريحة اثنين من الصواني مع الشرائح التي نظمتها وصمة عار. ومن المتوقع أن تكوينات الشريحة بديلة اعتمادا على عدد من الشرائح المانحة. وتشمل الضوابط الإيجابية إدراج المانحة إيجابية معروفة للبقع 2 المزدوجة والطحال من الجهات المانحة لكي 67 و CD3. ضوابط السلبية هي ذات شقين وتشمل اثنين سليقصر من إحدى الجهات المانحة كتلة البنكرياس حضنت مع الغلوبولين المناعي (IG) من الأنواع المضيفة من الأجسام المضادة الأولية والشرائح اثنين من الطحال المانحة لالانسولين والجلوكاجون.

figure-protocol-2
الشكل 2. ويرد ممثل الشريحة الملون المزدوج. شريحة النهائي نموذجي مع معلمات إنشاء العلامات الشريحة ووضع الأنسجة قبل تنفيذ المسح الضوئي الرقمي.

figure-protocol-3
الشكل 3. وكان ممثل H & E والبقع IHC في الفروع البنكرياس. مقاطع من البنكرياس من متبرع البالغات (6096-04 PanHead) الملون وفحص بالاشعة الرقمية يؤديها كما هو موضح في البروتوكول. وقد تم الحصول على الصور باستخدام برنامج ImageScope عرض من الجزء كامل (AD) و من جزيرة (EH). شدة جزيرة المتوقع وصمة عار للأنسولين، الجلوكاجون، والبنكرياس وببتيدولاحظ لأقسام دينار بحريني كما فيصور الفرع دال أن هذه الكتلة رئيس البنكرياس يحتوي على جزء صغير من منطقة الكلابي أو بطني الفص البنكرياس كما تحتوي على جميع الجزر أساسا البنكرياس ببتيد إيجابية الخلايا. نلاحظ أن ملون مباين هيماتوكسيلين في D لوحة فاتح للغاية في حين أن الهيماتوكسيلين ملون مباين في شدة وباء وجيم هي الأمثل. لوحات EH تظهر جزيرة من الفص الظهرية مع التوزيع المتوقع من الخلايا والخلايا β α. يتم العثور على خلايا البنكرياس قليل ببتيد في الجزء السفلي الأيسر من جزيرة (H). A، E-H والتقييم؛ (ب)، F-Ki67 + الأنسولين، C، G-CD3 + الجلوكاجون، D، H-ببتيد البنكرياس. م، 0.2x، EH-12.8x.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

توحيد الإجراءات IHC أمر حاسم بالنسبة لتحليل الصور، وخاصة عندما تستخدم الكمبيوتر المستندة إلى خوارزميات عبر عدد كبير من الشرائح مع مرور الوقت. والإجراء تلطيخ IHC المبينة في هذا التقرير تسمح تحليل مجموعة من العينات للمانحين نظرا لاستخدام autostainer ضمن يوم العمل 8 ساعات ويتم تعديلها من تقرير سابق 5. جعل الصور الشريحة الرقمية كاملة من كل شريحة الملون المتوفرة لnPOD التابعة للمحققين من خلال نظام إلكتروني عبر الإنترنت علم الأمراض. ويمكن للمحققين مراجعة التركيبة السكانية الم...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المؤلفان بالشكر عائلات المانحين والمنظمات الحصول على الأعضاء المشاركين في هذا البحث ومونتغومري إيميلي، Pietras روبرت، فو آن، أغاروال ميتالى، وأغاروال روشان للحصول على مساعدة الخبراء التابعة لها. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل مؤسسة أبحاث السكري الأحداث (MC-T.) لدعم الشبكة للمتبرعين بالأعضاء البنكرياس مع مرض السكري.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
اسم كاشف شركة فهرس العدد تعليقات
30٪ بيروكسيد الهيدروجين (H 2 O 2) FisherScientific H325-500 البيروكسيديز الذاتية حظر
ABC-فسفاتاز قلوية (ا ف ب) ناقلات AK-5000 ا ف ب المتقارن
الأجسام المضادة مخفف إينفيتروجن 003218 الأجسام المضادة الأولية
أفيدين مانع ناقلات SP-2001 منع البيوتين الذاتية
المعقدة البيروكسيديز عنزة المضادة للخنزير غينيا ناقلات BA-7000 الجسم المضاد الثانوي
الصبغة الزرقاء الكاشف FisherScientific 7301 لايكا autostaineص
العازلة سيترات، 6.0 درجة الحموضة BioGenex HK086-9K مستضد استرجاع
مروق 1 FisherScientific 7401 لايكا autostainer
Cytoseal XYL FisherScientific 8312-4 ساترة mountant
DAB ناقلات SK-4100 HRP مولد اللون
ديب DAKO S2003 AP الذاتية حجب الكاشف
يوزين Y الكحولية FisherScientific 71204 لايكا autostainer
Ethanols-100٪، 95٪، 90٪، 70٪ FisherScientific مختلف Deparaffinization وcoverslipping
هيماتوكسيلين DAKO S3301 داكو autostainer
هيماتوكسيلين 7211 FisherScientific 7211 لايكا autostainer
مفتش (جميع الأنواع المضيفة عن الأجسام المضادة الأولية) مختلف مختلف سلبي ضوابط الانتخابات التمهيدية
السائل الأحمر الدائم (LPR) DAKO K0640 ا ف ب مولد اللون
Mach2 AP بيوكير الطبية MALP521L الماعز المضادة للماوس AP المتقارن
Mach2 HRP بيوكير الطبية MHRP520L الماعز المضادة للماوس HRP المتقارن
Mach2 HRP بيوكير الطبية RHRP520L الماعز المضادة للماوس HRP المتقارن
الميثانول FisherScientific مختلف H 2 O 2 مخفف
طبيعي الماعز المصل ناقلات S-1000 IHC حجب الكاشف
قناص بيوكير الطبية BS966M IHC حجب الكاشف
TBST 20X ThermoScientific TA-999-TT IHC العازلة
Triology 20X خلية مارك 920P-06 مستضد استرجاع
الزيلين FisherScientific مختلف Deparaffinization وcoverslipping

الجدول رقم 1. الكواشف محددة.

الأضداد الابتدائي مضيف الأنواع بائع القط. # تعليقات واسترجاع مستضد
البارافين
الأميليز فأر سانتا كروز SC-46657 سترات ليمونات
أميلين فأر Serotec MCA11267 سترات ليمونات
الأنهيداز الكربونية 19،9 فأر Abcam ab15146
كاسباس-3، المشقوق أرنب خلية اشارة 9961 سيترات أو ثلاثية
CD20 فأر DAKO M0755 سيترات أو ثلاثية
CD3 أرنب DAKO A0452 سترات ليمونات
CD34 فأر خلية اشارة 3569 سترات ليمونات
CD4 فأر DAKO M7310 سترات ليمونات
CD45 فأر DAKO M0754 سترات ليمونات
CD68 فأر DAKO M0876 سترات ليمونات
CD8 فأر DAKO M7103 سترات ليمونات
كروموغرانين A أرنب DAKO A0430 سترات ليمونات
CK17 فأر DAKO M7046 سترات ليمونات
CK19 فأر DAKO M0772 سترات ليمونات
CK7 فأر DAKO M7018 سترات ليمونات
C-الببتيد أرنب خلية اشارة 4593 سترات ليمونات
Foxp3 فأر العلوم البيولوجية ه 14-4776-80 سترات ليمونات
جريلين ماعز سانتا كروز SC-10386
جريلين أرنب Abcam ab85104
الجلوكاجون أرنب DAKO A0565
الجلوكاجون فأر Abcam ab10988 سترات ليمونات
الجلوكاجون حقل التجارب Bachem T-5037 سترات ليمونات
تخمة-1 فأر Abcam ab40084 ثلاثية
تخمة-2 أرنب سانتا كروز SC-9117 ليس المعبر عنها في الجزر الإنسان
الانسولين حقل التجارب DAKO A0564
كي-67 فأر DAKO M7240 سترات ليمونات
مافا أرنب نوفوس البيولوجي NB400-137A ثلاثية
ببتيد البنكرياس أرنب إينفيتروجن 18-0043 سترات ليمونات
PDX-1 حقل التجارب Abcam ab47308 سيترات أو ثلاثية
طليعة الأنسولين فأر Novocastra NCL-proin-1G4
طليعة الأنسولين فأر الدراسات التنموية ورم هجين البنك GS-9A8 سترات ليمونات
Secretagogin أرنب سيغما HPA 006641 سترات ليمونات
العضلات الملساء الأكتين أرنب Abcam ab5694
السوماتوستاتين أرنب DAKO A0566
Synaptophysin فأر DAKO M0776 سترات ليمونات
المثلج مضيف الأنواع بائع القط. # تعليقات
CD11b فأر Abcam ab6332 إصلاح مع PF 4٪
CD11c أرنب Serotec AHP1226
CD25 فأر نوفوس البيولوجي ملاحظة: 600-564 استخدم حضانة بين عشية وضحاها لأقسام البارافين
CD94 فأر Abcam ab61874 إصلاح مع الأسيتون
GAD65 فأر سانتا كروز SC-130569 إصلاح مع PF 4٪
HLA-ABC فأر DAKO M0736 إصلاح مع الأسيتون أو PF 4٪

الجدول 2. الأجسام المضادة الأولية.

اسم كاشف شركة فهرس العدد تعليقات
Aperio Scanscope CS Aperio الشريحة الرقمية الماسحة الضوئية
DAKO Autostainer زائد DAKO البقع IHC
برنامج تسمية مصفوفة الطباعة BioCarta LM7UP57 الشريحة تسمية البرنامج
لايكا XL Autostainer لايكا H & E البقع
علاوة ساترة FisherScientific 12-548-5J ساترة
طيف مدير المعلومات Aperio ماسحة البرمجيات
Superfrost زائد الشرائح FisherScientific 12-550-15 موجبة الشرائح
الخضروات باخرة والأسود ديكر مختلف مستضد استرجاع
حمار وحشي TLP 3742 CDWG TLP3742 الشريحة تسمية الطابعة

الجدول رقم 3. لوازم ومعدات معينة.

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. In't Veld, P., Marichal, M. Microscopic anatomy of the human islet of Langerhans. Adv. Exp. Med. Biol. 654, 1-19 (2010).
  2. Matveyenko, A. V., Butler, P. C. Relationship between beta-cell mass and diabetes onset. Diabetes Obes. Metab. 10, Suppl . 4. 23-31 (2008).
  3. Saisho, Y. Pancreas volumes in humans from birth to age one hundred taking into account sex, obesity, and presence of type-2 diabetes. Clin. Anat. 20, 933-942 (2007).
  4. Hruban, R. H. Pancreatic intraepithelial neoplasia: a new nomenclature and classification system for pancreatic duct lesions. Am. J. Surg. Pathol. 25, 579-586 (2001).
  5. Campbell-Thompson, M. Pancreatic adenocarcinoma patients with localised chronic severe pancreatitis show an increased number of single beta cells, without alterations in fractional insulin area. Diabetologia. 52, 262-270 (2009).
  6. Meier, J. Beta-cell replication is the primary mechanism subserving the postnatal expansion of beta-cell mass in humans. Diabetes. 57, 1584-1594 (2008).
  7. Rowe, P. A., Campbell-Thompson, M. L., Schatz, D. A., Atkinson, M. A. The pancreas in human type 1 diabetes. Semin. Immunopathol. 33, 29-43 (2011).
  8. Veld, I. n't, P, Insulitis in human type 1 diabetes: The quest for an elusive lesion. Islets. 3, 131-138 (2011).
  9. van Belle, T. L., Coppieters, K. T., von Herrath, M. G. Type 1 diabetes: etiology, immunology, and therapeutic strategies. Physiol Rev. 91, 79-118 (2011).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Pancreatic IsletsHistopathologyImmunohistochemistrySerial SectioningParaffin SectionsH E StainingWhole Slide ImagesOnline Pathology DatabaseType 1 DiabetesTissue Processing

Related Articles