فرخ في electroporation البيضة هو الأسلوب الذي يسمح التلاعب الجيني للجنين الطيور. التطبيقات الشائعة لهذه التقنية تشمل تحليل وظيفي من الجينات وعناصر محسن المفترضة. هذا الفيديو يوضح العصبية electroporation أنبوب في الأجنة سمو الفرخ 10. وتناقش تقنية الحقن والتعامل السليم البيض.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
Electroporations OVO في مرحلة الجنين سمو الدجاج 10
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
جعلت حجم كبير والتنمية الخارجية للجنين الدجاج طويلة يجعلها أداة قيمة في دراسة البيولوجيا التطورية. مع ظهور التقنيات البيولوجية الجزيئية ، وأصبح نظام الفرخ مفيدة للدراسة تنظيم الجينات ووظائفها. electroporating بواسطة الحمض النووي الريبي أو يبني في جنين الدجاج النامية ، يمكن التعبير عن الجينات أو ترسيتها من أجل تحليل وظائف الجينات في الجسم الحي. وبالمثل ، يمكن أن تستخدم لرسم خرائط البنى مراسل مصير أو لدراسة العناصر الجينية المفترضة التنظيمية. بالمقارنة مع تجارب مماثلة في الماوس ، وقد فرخ electroporation مزايا يجري سريعة وسهلة وغير مكلفة. هذا الفيديو يوضح أولا كيف لجعل نافذة في قشرة البيضة لمعالجة الجنين. المقبل ، والجنين هو تصور بمحلول مخفف من الحبر الهند حقن تحت الجنين. وتستخدم إبرة الزجاج وماصة لحقن الحمض النووي وصبغ الأخضر السريع في الأنبوب العصبي النامي ، ثم يتم وضع أقطاب البلاتين موازية للجنين وتدار النبضات الكهربائية قصيرة مع مولد النبض. وأخيرا ، ختم الشريط مع البيض ويوضع مرة أخرى في حاضنة لمزيد من التطوير. بالإضافة إلى ذلك ، يظهر الشريط الصحيح التخزين والمناولة والبيض يناقش الأسباب المحتملة لفقدان الجنين electroporation التالية.
البروتوكول
التعامل مع البيض
- يجوز إبقاء البيض على 13 درجة مئوية لمدة تصل إلى أسبوع واحد قبل الحضانة دون خسائر كبيرة في البقاء (أ برودة النبيذ الصغيرة مثالية لهذا الغرض).
- قبل الحضانة ، والسماح لتدفئة البيض إلى درجة حرارة الغرفة ، ثم تضعها في ترطيب حاضنة الدجاج تعيين إلى 37.8 درجة مئوية (100 درجة فهرنهايت).
- نحن electroporate الأجنة عادة حوالي 48 ساعة من بداية الحضانة ، وعندما وصلت الجنين همبرغر وهاميلتون 10 مرحلة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هذا البروتوكول يوفر دليل خطوة بخطوة لelectroporation الأنبوب العصبي للأجنة الدجاج HH10. بالإضافة إلى عرض هذه التقنية ، كما تقدم مبادئ توجيهية للتخزين والمناولة من البيض. هذه التقنية لديها مجموعة واسعة من التطبيقات للتحليل الوراثي والتكلفة المنخفضة وسهولة من التجارب يجعلها ممكنة للمختبرات عديدة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| حضّانة بيض الدجاج | مرطبة، ومضبوطة عند 37.80°ج (100 فهرنهايت). | ||
| مولد نبضات | الإلكترونيات الجينية | BTX T820 | مولد موجات مربعة أو ما يعادله |
| الأقطاب الكهربائية | صُنعت أقطابنا الكهربائية من سلك بلاتيني بقطر 0.25 مم، وكان طولها 5 مم وبمسافة فاصلة تبلغ 1 مم بينها. | ||
| توصيل الكابلات | |||
| المتحكم الدقيق | |||
| مجهر التشريح | بمسافة عمل كبيرة | ||
| أنابيب شعرية زجاجية | وجهاز سحب الشعيرات أو إبر زجاجية تجارية | ||
| ليبوفيتز’وسط L-15 الغذائي | |||
| بيض الدجاج | مُخصَّب | ||
| مقصات منحنية | |||
| محقنة سعة 10 مل | |||
| إبرة واسعة التجويف | 16-18G | ||
| ماصة فموية | |||
| حبر الهند | |||
| سرنجة إنسولين/سرنجة | |||
| الحمض النووي البلازميدي (Plasmid DNA) | ≥ 1μجم/μلتر في محلول TE معقم أو محلول 1X PBS يحتوي على صبغة Fast Green بنسبة 0.05% |
المراجع
- 'Shocking' developments in chick embryology: electroporation and in ovo gene expression. Nat Cell Biol. 1, 203-207 (1999).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
