مقالة منهجية

عزل خلايا CD4 + T من الغدد الليمفاوية باستخدام الماوس Miltenyi MACS تنقية

DOI:

10.3791/409

⸱

نوفمبر 1, 2007

 , 
1Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عزل الخلايا الليمفاوية باستخدام بالاعمال Miltenyi المجموعة هو وسيلة موثوق بها لتنقية الخلايا من الأنسجة اللمفاوية الخليط كله. تنقية الخلايا باستخدام نظام Miltenyi عادة ≥ 96 ٪ نقية. هنا ، ونحن لشرح الخطوات التي اتخذت لعزل خلايا CD4 + T ، واحدة من مجموعات كثيرة تقدمها Miltenyi.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عزل الخلايا من المصدر الأساسي هو خطوة ضرورية في العديد من البروتوكولات أكثر تعقيدا. Miltenyi تقدم مجموعات لعزل الخلايا من الكائنات الحية بما في ذلك العديد من البشر ، والرئيسات غير البشرية ، والجرذان ، كما وصفنا هنا الفئران. الفصل المغناطيسي خلية حبة المستندة يسمح لاختيار إما إيجابية (أو نضوب الخلية) ، وكذلك اختيار سلبية. هنا ، علينا أن نظهر التحديد السلبي للCD4 لقد يمسها أو غ + خلايا T المساعدة. باستخدام هذا البروتوكول القياسي نحن عادة تنقية الخلايا التي يتم CD4 ≥ النقي بنسبة 96 ٪ + / + CD3. ويستخدم هذا البروتوكول بالاقتران مع بروتوكول تشريح و 2 الفوتون التصوير من العقد الليمفاوية الطرفية في الفئران التي نشرت في العدد 7 من إن الرب ، لتنقية الخلايا T وغيرها من أنواع الخلايا لنقل adoptively لأغراض التصوير. على الرغم من أننا لم تثبت FACS التحليل في هذا الفيديو البروتوكول ، فإنه يوصى بشدة للتأكد من نقاء الشاملة للخلايا معزولة باستخدام الأجسام المضادة المناسبة عبر نظام مراقبة الأصول الميدانية. بالإضافة إلى ذلك ، علينا أن نظهر الأسلوب غير معقمة من العزلة الخلايا التائية. إذا كانت هناك حاجة الخلايا العقيمة للتطبيق نهاية مستخدم معين ، يجب التأكد من القيام بكل الإجراءات التي تجلت في نسيج الثقافة غطاء تحت ظروف معقمة القياسية. أشكركم على مشاهدة ونتمنى لك التوفيق في التجارب الخاصة بك!

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يرجى قراءة واتباع البروتوكول تدرج في عدة Miltenyi أو عبر الإنترنت في http://www.miltenyibiotec.com/ .

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عزل الخلايا من المصدر الأساسي هو خطوة ضرورية في العديد من البروتوكولات أكثر تعقيدا. Miltenyi تقدم مجموعات لعزل الخلايا من الكائنات الحية بما في ذلك العديد من البشر ، والرئيسات غير البشرية ، والجرذان ، كما وصفنا هنا الفئران. الفصل المغناطيسي خلية حبة المستندة يسمح لاختيار إما إيجابية (أو نضوب الخلية) ، وكذلك اختيار سلبية. هنا ، علينا أن نظهر التحديد السلبي للCD4 لقد يمسها أو غ + خلايا T المساعدة. باستخدام هذا البروتوكول القياسي نحن عادة تنقية الخلايا التي يتم CD4 ≥ النقي بنسبة 96 ٪ + / + CD3. على الرغم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نود أن نشكر ريبيكا Paquett لإعداد MACS العازلة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
منظم MACSكاشفلا يوجدلا يوجديُحضّر وفقاً لوصف شركة Miltenyi.
طقم عزل خلايا T CD4+: عزل غير ملامس (Untouched Isolation)كاشفMiltenyi Biotec130-090-860للاستخدام مع نظام Miltenyi.
محلول ملحي منظم بالفوسفات (PBS) معقمكاشفللاستخدام في تحضير منظم MACS.
طبق زراعة Corning مقاس 35 مم غير معالج بـ TCأخرىCorning430588يُستخدم في تحضير معلق خلوي أحادي.
مصفاة خلايا 70 ميكرونأداةBD Biosciences352350تُستخدم في تحضير معلق خلوي أحادي.
حقنة 6 mLأداةTyco Healthcare, Covidien8881516051تُستخدم في تحضير معلق خلوي أحادي.
محلول Dulbecco’s الملحي المنظم بالفوسفات (DPBS) بتركيز 10xكاشفInvitrogen14200-075للاستخدام في تحلل كرات الدم الحمراء (RBC lysis).
ماء معقمكاشفSigma-AldrichW4502للاستخدام في تحلل كرات الدم الحمراء (RBC lysis).

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).
  2. Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node. J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

LS

مقالات ذات صلة