وارتقى الخلالي تدفق السوائل في الأورام الصلبة، ويمكن أن تعدل ورم غزو الخلية. نحن هنا وصفا لأسلوب لتطبيق الخلالي تدفق السوائل إلى الخلايا جزءا لا يتجزأ من مصفوفة ومن ثم قياس آثارها على غزو الخلية. ويمكن تكييف هذه التقنية بسهولة لدراسة النظم الأخرى.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج ثلاثي الأبعاد للخلية ثقافة قياس آثار تدفق السائل الخلالي على غزو الخلايا السرطانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
نمو وتطور الأورام الصلبة معظم تعتمد على التحول الأولي للخلايا السرطانية واستجابتها لسدى المرتبطة يشير في المكروية ورم 1. سابقا، وركز البحث على المكروية ورم في المقام الأول على الورم اللحمية التفاعلات 1-2. ومع ذلك، فإن المكروية ورم تتضمن أيضا مجموعة متنوعة من القوى الطبيعية الحيوية، وآثارها لا تزال غير مفهومة تماما. هذه القوى هي عواقب النشاط الحيوي لنمو الورم التي تؤدي إلى تغيرات في التعبير الجيني، وانقسام الخلايا، والتمايز وغزو 3. يتم تغيير جميع المصفوفة كثافة 4، صلابة 5-6، وهيكل 6-7، ضغط السائل الخلالي 8، وتدفق السوائل الخلالية 8 أثناء تقدم السرطان.
الخلالي تدفق السوائل على وجه الخصوص هو أعلى في الأورام بالمقارنة مع الأنسجة الطبيعية 8-10. ويقدر فلوريدا السائل الخلاليوتم قياس السرعات آه وجدت لتكون في حدود 0،1-3 ميكرومتر ق -1، اعتمادا على حجم الورم والتمايز 9 و 11. هذا يرجع إلى ارتفاع ضغط السائل الخلالي الناجم عن الورم الناجم عن الأوعية الدموية وزيادة نفاذية الأوعية الدموية 12. وقد تبين الخلالي تدفق السوائل لزيادة غزو الخلايا السرطانية 13-14، الليفية الوعائية وخلايا العضلات الملساء 15. هذا قد يكون عائدا لغزو التدرجات الكيميائي ذاتي خلقت حول الخلايا في D-3 16 أو زيادة مصفوفة الفلزي (MMP) التعبير 15، إفراز chemokine والتعبير جزيء التصاق الخلية 17. ومع ذلك، لم يتم الآلية التي تستشعر الخلايا تدفق السوائل مفهومة جيدا. بالإضافة إلى تغيير سلوك الخلية السرطانية، الخلالي تدفق السوائل ينظم نشاط الخلايا الأخرى في المكروية ورم. ويرتبط هذا مع التمايز القيادة (أ) من الخلايا الليفية إلى الأورام وmyofibrأقاليم 18، (ب) نقل من مولدات المضادات، وعوامل أخرى قابلة للذوبان إلى الغدد الليمفاوية 19، و (ج) تحوير التشكل الليمفاوية الخلية البطانية 20.
هذه التقنية المقدمة هنا يفرض الخلالي تدفق السوائل في الخلايا في المختبر، والكمي آثاره على غزو (الشكل 1). وقد تم نشر هذه الطريقة في دراسات متعددة لقياس الآثار المترتبة على تدفق السوائل في انسجة وخلية السرطان غزو 13-15، 17. من خلال تغيير التركيبة مصفوفة، نوع من الخلايا، وتركيز خلية، يمكن تطبيق هذه الطريقة على غيرها من الأمراض، ونظم الفسيولوجية لدراسة الآثار المترتبة على تدفق فراغي في العمليات الخلوية مثل غزو الانتشار، والتفريق، والتعبير الجيني.
البروتوكول
1. فحص مجموعة المتابعة
- ذوبان الجليد 1 قسامة صغيرة (<500 ميكرولتر) من Matrigel على الجليد في 4 درجات مئوية (حوالي 2 ساعة).
- اكتب Matrigel والكولاجين PBS 10X (1X في الحجم الكلي)، 1N هيدروكسيد الصوديوم (أي ما يعادل 0.023 وحدات التخزين من الكولاجين وأضاف، أو في توصيات الشركة المصنعة الكولاجين، وحسب مقتضى الحال)، وأنا على: إعداد وصفة هلام (انظر مجلدات سبيل المثال في الجدول أدناه) نهائي تركيزات 1 مل / ملغ و 1،3 ملغ / مل على التوالي (ويمكن استخدام مستحضرات مصفوفة أخرى اعتمادا على نوع من الخلايا وا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هنا وقد وصفت لدينا منهجية لقياس تأثير تدفق الخلالي على غزو الخلايا السرطانية، وذلك باستخدام الخلايا جزءا لا يتجزأ من مصفوفة 3-D داخل خلية إدراج الثقافة. وقد استخدمت هذه الأساليب ومماثلة لدراسة تأثير تدفق الخلالي على مجموعة متنوعة من أنواع الخلايا 13-15، 17. نهجنا يقلد جزئيا المكروية مصفوفة من الورم باستخدام النوع الأول من الكولاجين وMatrigel التي تحتوي على البروتينات الموجودة في الغشاء القاعدي من الأنسجة الظهارية وستروما المحيطة 21-22. هذا النظام هو من السهل .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم كاشف | شركة | فهرس العدد | تعليقات |
| الكولاجين (ذيل الجرذ) | دينار بحريني | 354236 | تبقى عقيمة |
| Millicell إدراج خلية ثقافة | ميليبور | PI8P01250 | 8 قطرها ميكرون المسام، والبولي غشاء |
| Matrigel | دينار بحريني | 354234 | تبقى عقيمة |
| برنامج تلفزيوني | سيجما ألدريتش | 100M-8202 | 10X لإعداد حل هلام، 1X لغسل خطوات |
| هيدروكسيد الصوديوم، والحل 1.0N | سيجما ألدريتش | S2770 | تبقى عقيمة |
| DMEM 1X | CellGro | 10-013-CV | تبقى عقيمة |
| الأبقار مصل الجنين | اتلانتا البيولوجية | 511150 | تبقى عقيمة |
| البنسلين الستربتوميسين | CellGro | 30002CI | تبقى عقيمة |
| تريتون X-100 | سيجما ألدريتش | X100-500 مل | 0.5٪ في برنامج تلفزيوني |
| بارافورمالدهيد | فيشر العلمية | 04042-500 | 4٪ في برنامج تلفزيوني |
| منزوع الأيونات الماء | تبقى عقيمة | ||
| 4 '،6-diaminido-2-phenylindole (دابي) | النائب Biomedicals | 0215757401 | 1 ملغ / مل حل الأوراق المالية |
| تصاعد الحل | الحرارية العلمية | TA-030-FM | |
| التربسين-EDTA | CellGro | 25-052-CI | تبقى عقيمة |
المراجع
- Cichon, M. A. Microenvironmental influences that drive progression from benign breast disease to invasive breast cancer. J. Mammary Gland. Biol. Neoplasia. 15, 389-3897 (2010).
- Proia, D. A., Kuperwasser, C. Stroma: tumor agonist or antagonist. Cell....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
