مقالة منهجية

على رقاقة Phenotyping التهاب غشائي

DOI:

10.3791/4169

⸱

يوليو 21, 2012

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, University of California, Davis

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم تطبيق تدفق غرف ميكروفلويديك محفورا الحجرية التصويرية وملفقة من PDMS لبحث النتائج الفنية المرتبطة ضعف EC والالتهابات. ويتجلى في تجربة الممثلين، وقدرة إجهاد القص الفرق لتعديل الوحيدات التصاق الخلية لتنشيط monolayers EC خلوى.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتصلب الشرايين من potentiated حالات الشذوذ الأيضي التي تسهم في زيادة حالة التهاب النظامية مما أدى إلى ضعف البطانية. ومع ذلك، لا يتم في وقت مبكر من التغييرات الوظيفية البطانة التي تدل على مستوى الفرد من المخاطر المقررة مباشرة سريريا للمساعدة في استراتيجية الدليل العلاجي. وعلاوة على ذلك، تنظيم الالتهاب بواسطة ديناميكا الدم المحلية يسهم في توزيع غير العشوائية المكانية من تصلب الشرايين، ولكن من الصعب آليات لتحديد في الجسم الحي. وصفنا نهج المختبر على واحد في رقاقة القائم على الفحص اضطراب التمثيل الغذائي للأحداث كميا التهابات في خلايا بطانية الإنسان (EC) وحيدات في ظل ظروف تدفق دقيقة. وتستخدم الطرق القياسية من الطباعة الحجرية الناعمة لغرف ميكروفلويديك microfabricate الأوعية الدموية المحاكاة (VMMC)، والتي لا بد مباشرة إلى monolayers EC مثقف. 1 هذه الأجهزة لديها ميزة استخدام كميات صغيرة من الكواشف بينماتوفير منبر للتصوير الأحداث مباشرة التهابات في الغشاء من EC يتعرض إلى حقل القص واضحة المعالم. لقد طبقنا بنجاح هذه الأجهزة للتحقيق خلوى-، 2-3 الدهنية و 4 و RAGE يسببها التهاب-5 EC في الأبهر الإنسان (HAEC). نحن هنا توثيق استخدام VMMC إلى الخلية مقايسة الوحيدات (THP-1) المتداول والقبض على monolayers HAEC التي هي مشروطة في إطار خصائص القص الفرق وتفعيلها من خلال السيتوكينات الالتهابية TNF-α. مثل هذه الدراسات وتقديم رؤية الآلية في atherosusceptibility عوامل الخطر الأيضية تحت.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. زراعة الخلايا وإعداد الركيزة

  1. قطع 3-بوصة ركائز دائرية من 100 × 20 ملم صحن زراعة الأنسجة (BD فالكون) باستخدام مخرطة. تعقيم ركائز بواسطة الغطس في الايثانول 70٪. مكان في صحن بيتري ومعطف مع 4-I نوع الكولاجين مل (100 ميكروغرام / مل) لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة، ثم شطف مع 4 × 1 مل PBS.
  2. تعليق الإنسان الخلايا البطانية الأبهر (HAEC، مرور 4-6) في 6.5x10 5 خلايا / مل والبذور من خلال تطبيق 1 مل مباشرة إلى الركيزة. المكان في 37 ° C، 5٪ CO 2 حاضنة الخلايا وتسمح للالتزام الركيزة لمدة 1 ساعة.
  3. أضف 9 مل من متوسط ​​نمو بطانة-2 (EGM-2) تستكمل مع الحل للمضادات الحيوية مضاد فطري 1X إلى الخلايا. تغيير وسائل الإعلام كل يوم 2 حتى الخلايا تصل إلى 90٪ confluency.
  4. الحفاظ على THP-1 في الخلايا المتوسطة 1640 RPMI تستكمل مع FBS 10٪ و1X حل للمضادات الحيوية مضاد فطري. خلايا مرور عندما تصل كثافة من 10 6 خلية / مل.

2. قص الخلايا البروتوكول

هي مشروطة في خلايا مخروطية مخصصة وجهاز الخليوي لوحة القص (CSD). يتم توثيق تفاصيل الجهاز ومواصفات التصميم في الجدول 1 والشكل 4.

  1. إعداد لجنة التنمية المستدامة. تعقيم غرفة السكن مع الإيثانول وشطف مع PBS العقيمة. تسخين الإسكان إلى 37 ° C ومستوى لضمان أن مخروط هو عمودي على أحادي الطبقة الخلية. تجميع الركيزة مع الخلايا من الجزء السفلي من السكن وتعيين مخروط إلى الارتفاع المطلوب.
  2. استخدام ليبوفيتز-15 (L-15) متوسطة تستكمل مع BulletKit غشائي باعتبارها وسيلة للحفاظ على درجة الحموضة القص السليم في غياب CO 2. لتحفيز الالتهاب، إضافة عامل نخر الورم α (TNF-α، و 0.5 نانوغرام / مل) إلى المتوسطة القص وحقن 6 مل في الجهاز عن طريق حقنة متصلة إلى منفذ مدخل، مع الحرص على عدم إدخال الهواءفقاعات في القاعة.
  3. القص وإجهاد الخلايا حجم القص ثابت عالية (HSS، 15 داين / سم 2) أو إجهاد القص متذبذبة (OSS، 0 ± 5 داين / سم 2، 1 هرتز) لمدة 4 ساعة. يتم تحقيق المطلوب SS عن طريق تناوب مخروط فوق خلايا، والتي يتم التحكم بدقة مع محرك الدقيقة خطوة كما هو موضح سابقا 6 وSS الجدار على السطح (τ ث) تقريب بواسطة:
    figure-protocol-1
    حيث μ هو لزوجة المتوسط، ω هو السرعة الزاوية للمخروط، وα هي الزاوية المخروط (0.5 درجة). يتم ضبط المحاذاة مخروط مع الركيزة في غضون 0.05 ° التسوية من خلال الدقة وارتفاع الفجوة التي حددت في 20 ± 10 ميكرومتر باستخدام مقياس عمق لتقليل التباين كفافي وشعاعي في τ ث. تم التحقق من صحة الجهاز للتأكد من خصائص تدفق الصفحي. إزالة جells من الجهاز والاستعداد لتحليل التصاق الوحيدات.

3. تصنيع PDMS ميكروفلويديك غرفة

  1. الحصول على القالب الرئيسي لقناة ميكروفلويديك المطلوب رقم والارتفاع قناة بالاعتماد على التطبيق. وترد تفاصيل خصائص التصميم المحددة المستخدمة في هذا البروتوكول في الجدول 1. هو جيد بالفعل توثيق طريقة لخلق هذه في الأدب .. 1 لفترة وجيزة، تم تصميم شبكة من القنوات باستخدام برنامج CAD (أوتوديسك المخترع) وطبع في 5000 نقطة في البوصة على الشفافية. ونسج مقاومة للضوء السلبية (SU8) على رقاقة السيليكون لسمك 100 ميكرون. ومضافين الشفافية وتعرضها للضوء الأشعة فوق البنفسجية. تتم إزالة بلمرة غير مقاومة للضوء لتوليد رئيسية طبق الاصل إيجابية.
  2. لجعل مزيج سيليكون PDMS قاعدة حل مع سيليكون علاج وكيل وزنا 10:01 في قارب تزن واثارة مع الماصة لالمصلية 5 مل. يجب الحرص على عدم كشط الجدرانمن وزن القارب إلى تجنب إضافة رقائق البلاستيك إلى الحل.
  3. وضع رقاقة ماجستير في طبق بتري 100x15mm وصب حل PDMS في الطبق.
  4. تغطية صحن ووضعه في وعاء فراغ لمدة 15 دقيقة لإزالة الفقاعات. بعد 15 دقيقة تأخذ طبق بتري بها وإزالة أي فقاعات تهب بلطف الزائد عن طريق الهواء فوق السطح.
  5. وضع طبق بتري في فرن لمدة 1 ساعة عند 70 ° C. إزالة الطبق وقطع الدوائر ميكروفلويديك باستخدام شفرة حادة.

4. جمعية مجهر الأجهزة على

  1. بدوره على مصدر الضوء لمجهر مقلوب وتعيين سخان إلى 37 ° C. نعلق أنابيب إلى حقنة 10 مل وملء مع الماء المقطر مثل عدم وجود فقاعات. وضع الحقنة في مضخة المحاقن ومجموعة معدل التدفق للحث على الجدار SS من 1 داين / سم 2. ويقترب من الجدار إجهاد القص (τ ث) ولدت على طول محور للقناة باستخدام معيارمعادلة دائرة تدفق مواز لوحة:
    figure-protocol-2
    حيث μ هو لزوجة متوسطة، Q هي معدل التدفق الحجمي، H ارتفاع القناة، وW هو عرض القناة ملاحظة: منذ القنوات من عرض محدود الفعلية τ ث ث سوف تختلف مع اعتمادا على القناة يتم تجنب نسبة الارتفاع، والقياسات في 25٪ أقرب الجدران الجانبية. 1،7
  2. وضع PDMS غرفة في الماء واستخدام micropipette 100μl لإزالة الهواء من القنوات الفردية. إرفاق محول فراغ لغرفة التأكد من أن يتم تعيين إلى إيقاف صمام.
  3. وضع طبق بتري مع أحادي الطبقة HAEC على الهدف. ضع دائرة PDMS على طبق بتري وتعيين بعناية على أحادي الطبقة HAEC فيما أكد أنه لا يوجد شكل فقاعات الهواء بين الجهاز وأحادي الطبقة و. تحويل صمام بحيث الفراغ على وترتبط بقوة للغرفة. لى>
  4. قطع الإبر قياس 19 تخفف بحيث لا يوجد سوى 5 مم من اليسار المعادن. ملء خزان البلاستيك مع العازلة وضعت في مدخل غرفة PDMS. تكرار لعدد مناسب من القنوات لاستخدامها. إرفاق أنابيب المضخات من حقنة لمخارج قناة PDMS.

5. الوحيدات الفحص التصاق تحت إجهاد القص

  1. تعليق THP-1 في الخلايا 2X10 6 خلايا / مل في HBSS + كا 2 + / 2 + المغنيسيوم + HSA 0.1٪. تفعيل THP-1 الخلايا اللحمية تفرخ مع عامل المستمدة-1 (SDF-1، 50 ميكروغرام / مل) لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  2. تشغيل مضخة محقنة لإنشاء تدفق، ثم تضاف 50 ميكرولتر من التعليق الخلية إلى الخزان دون إدخال فقاعات الهواء. مرة واحدة يتم تطويره بالكامل التدفق، تبدأ الحصول على البيانات.
  3. تشغيل لمدة 5 دقائق في معدل التدفق المناسب، مضيفا العازلة للخزان إذا كان الحل يحصل منخفضة. تواصل تدفق العازلة في القنوات لتغسل أي خلايا غير منضم في مجرى التدفق.

6. الحصول على البيانات والتحليل

  1. الحصول على تسلسل الصور الرقمية في 3 إطارات / ثانية لمدة 2 دقيقة بعد تطويره بالكامل تدفق على طول المحور الطولي للقناة في 3 مواقع في القناة، مع الحرص على عدم تسجيل الدخول مباشرة بعد أو قبل الخروج الموانئ أو في أقرب 25٪ الجانب الجدران.
  2. حساب عدد الخلايا القبض في الميدان على تحديد التخلص مشرق ظهور له في الطائرة التنسيق نفس أحادي الطبقة.
  3. يتم تعريف شركة اعتقال خلية من حركة <½ قطر خلية في 10 ثانية. البيانات المتوسط ​​على مدى 3 مجالات هي عشوائية / قناة وقياس باستخدام يماغيج البرمجيات.

7. ممثل النتائج

على الرغم من أن يتعرض بشكل موحد البطانة الوعائية إلى منبهات التي تساهم في التهاب النظامية، وتصلب الشرايين هو مرض التنسيق الذي يتطور بشكل تفضيلي في مواقع اضطراب تدفق في الشرايين، تورط التنوع المكاني في وظيفة بطانة الأوعية الدموية .. 8 9 و 10 TNF-α يدفع استجابة جيدة تتميز في EC يتضمن ما يصل تنظيم جزيئات التصاق الخلايا (الحدب ، على سبيل المثال VCAM-1، ICAM-1، E-selectin) و chemokines أن حيدات تجنيد من التداول، وهي السمة المميزة للآفة تصلب الشرايين المبكر 11 ديناميكا الدم هو منظم هام من النمط الظاهري التهاب بطانة حجم القص 12 عالي الضغط (HSS.؛ على سبيل المثال 15 dynes / سم 2) أو نابض إجهاد القص (PSS؛ على سبيل المثال 15 ± 5 dynes / سم 2) المرتبطة المواقع لمقاومة تصلب الشرايين في الشرايين أسفل TNF-α تنظيم الناجم عن الردود. وعلى العكس، القص حجم منخفض الضغط (LSS؛ مثلا 2 dynes / سم 2) أو متذبذبة القص (OSS؛ على سبيل المثال 0 ± 5 dynes / سم 2)، سمة من المواقع عرضة في الجسم الحي، تفاقم cytokiشمال شرق الناجم عن الالتهاب. 13 و 14 أجهزة لدينا ميكروفلويديك PDMS توفير منصة لإجراء دراسات لاختبار الفرضيات الآلية المتصلة تراكب الإجهاد الأيضي مع عوامل الهيدروديناميكية في تنظيم وظيفة بطانة الأوعية الدموية وعلم الأمراض. ويتضح على نطاق واسع فائدة وبراعة النهج من خلال النتائج التالية ممثل.

figure-protocol-3
الشكل 1. إجهاد القص ينظم تفاضلي THP-1 التصاق الخلية إلى TNF-α monolayers البطانية ملتهبة، بينما حصل هذه البيانات باستخدام بروتوكول مفصلة وموثقة المذكورة أعلاه في الفيديو. تعرضت في وقت واحد monolayers HAEC لجرعة منخفضة من السيتوكينات الالتهابية TNF-α (0.5 نانوغرام / مل، ~ EC 50 ليصل VCAM-1-التنظيم) وإما HSS (15 dynes / سم 2) أو OSS (0 ± 5 dynes / سم 2، 1 هرتز) في CSD مخصص لمدة 4 ساعة كما descriالسرير في بروتوكول مفصلة. وكميا THP-1 اعتقال خلية تدفق القص تحت في غرفة تدفق PDMS. وقد تم اختيار هذا الخط الخلية الذي يحاكي النمط الظاهري للحيدات الإنسان للاستنساخ وسهولة الاستخدام. HSS الموهن الاستجابة الالتهابية مقارنة OSS، مما أدى إلى انخفاض THP-1 اعتقال خلية. وقد تم تحليل البيانات عن طريق لطالبة ر الاختبار ويتم تمثيل كما يعني ± SEM من 3 تجارب مستقلة. مقتبس بإذن من DeVerse وآخرون .. 5

البيانات التالية توضح براعة نهجنا باستخدام أمثلة من عملنا المنشورة. يشار إلى الخروج عن البروتوكول أعلاه حيثما ينطبق ذلك.

figure-protocol-4
الشكل 2. التشكيل من خلوى الناجمة عن التعبير-1 VCAM والتوظيف الوحيدات في الانحدار إجهاد القص. A) وحفز monolayers HAEC مع TNF-α (0.3 نانوغرام / مل) لمدة 4 ساعة تحت فلووقد تحقق ث في VMMC مصممة على أساس نظرية تدفق الهيلي شو. انخفاض 15 A الخطي في حجم SS على طول محور للقناة من خلال تصميم الجدران الجانبية من الغرفة ليتزامن مع تدفق يبسط من 2 الركود الأبعاد ورسم نهاية للقناة، لتتناسب مع خطوط ISO-المحتملة. ونظرا للإجهاد القص الجدار (τ ث) ولدت على طول محور من هذه القناة على مسافة من المدخل المحوري (X) من خلال:

figure-protocol-5

حيث μ هو لزوجة متوسطة، Q هي معدل التدفق الحجمي، H ارتفاع قناة، ث 1 هو عرض مدخل القناة، وL هو طول القناة الكلية. تم اختيار Q لإنشاء التدرج في حجم SS من 16 dynes / سم 2 عند مدخل إلى 0 عند نقطة الركود "أ" القريبة عادل لoutleوقد تم قياس ر. B)-C) VCAM-1 التعبير في الموقع بواسطة المجهر المناعي باستخدام الأجسام المضادة مترافق إلى نقاط الكم وكما وردت كثافة مضان متوسط ​​نسبة (MFI) من السيطرة ثابت unstimulated. لم لا تعدل SS مستوى القاعدية من VCAM-1، وهي نسبة منخفضة في HAEC unstimulated (مثلثات الرمادي). ومع ذلك، زيادة VCAM-1 نسبة إلى التعبير TNF-α في مقادير LSS، وتبلغ ذروتها في dynes 2 ~ / سم 2 والعودة إلى خط الأساس TNF-α أو أقل في القص المقادير> 5 dynes / سم 2 (المربعات السوداء). D) وperfused حيدات (10 6 / مل) في 2 dynes / سم 2 لمدة 5 دقائق في القنوات الموازية تدفق أكثر من monolayers اشترط كما في A). تجنيد الوحيدات إلى البطانة ترتبط كميا مع التعبير-1 VCAM في حجم القص الإجهاد معين. تجدر الإشارة إلى أن القدرة على تحقيق VCAM-1 التعبير والتوظيف الوحيدات مع القرار المكانية غرامة في monolayeكشفت R تغييرات كبيرة خلال نطاق ضيق في حجم SS أن لن يقدر من خلال تطبيق سوى عدد قليل من القيم منفصلة من القص في تجارب منفصلة. وقد تم تحليل البيانات عن طريق تدابير ANOVA المتكررة والخلافات المقررة من قبل نيومان Keuls البعدي، * P <0.05 TNF-α من تحت ظروف ثابتة. ويعني البيانات 3-6 تجارب مستقلة SEM ±. مقتبس بإذن من تسو وآخرون 2. آل

figure-protocol-6
الشكل 3. الدهون الثلاثية البروتينات الدهنية الغنية (طغرل) تعدل خلوى الناجمة عن التهاب في نسبة الدهون الثلاثية إلى مستويات المصل المانحة والتعبير VCAM-1. وحفز monolayers HAEC مع TNF-α (0.3 نانوغرام / مل) لمدة 4 ساعة في وقت واحد مع طغرل (10 ملغ / ديسيلتر ApoB) معزولة عن البشر بعد وجبة عالية الدهون في الثقافة ثابتة. A) VCAM-1 تم قياس التعبير بشكل منفصل في EC علقتها التدفق الخلويوالتصاق الوحيدات كميا باستخدام VMMC كما هو موضح في بروتوكول مفصلة. يتم عرض البيانات في التغيير٪ من TNF-α. اعتقال الوحيدات تختلف في نسبة مباشرة إلى التعبير البطانية-1 VCAM، التي زادت بشكل مباشر مع مستوى الدهون الثلاثية في الدم المانحة. B) تم إلغاء القبض الوحيدات لمجموعة فرعية من الجهات المانحة الموالية للالتهابات في وجود الأجسام المضادة VCAM 1-حظر. تم تحديد أهمية من الطلاب في إقران اختبار t، يعني ± SEM 3-5 تجارب مستقلة. مقتبس بإذن من وانغ وآخرون .. 4

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وصفنا استخدام أجهزة ميكروفلويديك PDMS لتقييم على رقاقة من النمط الظاهري التهاب بطانة من خلال التصوير في الوقت الحقيقي من التعبير CAM والتصاق الوحيدات. والميزة الرئيسية لنهجنا يكمن في القدرة على تحديد النتائج المرتبطة ضعف في الخلايا البطانية تتعرض لالتهابات وسطاء مثل الدهون الغذائية والسيتوكينات في ظل ظروف محددة الهيدروديناميكية التي تعكس إجهاد القص في الأوعية معصد. وVMMC تسهيل استخدام كميات صغيرة من الكواشف أو المواد التي قد تكون في العرض المحدود ولها مزايا إضافية تتمثل في كونها غ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R01 / NHLBI HL082689 لسكوت سيمون I. وانطوني باسيريني G..

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
بند شركة كتالوج رقم
100 × 20MM أطباق بتري BD الصقر 353003
الإيثانول 95٪ EMD كيماويات EX0290-1
DPBS Cellgro 21-031-CV
النوع الأول الكولاجين الذيل الجرذ المشتقة Gibco A10483-01
الإنسان الخلايا البطانية الأبهر Genlantis PH30405A
للمضادات الحيوية درجة التأثير الحل إينفيتروجن 15240-062
البطانية BulletKit Lonza CC-4176
بصل البطانية وسائل الإعلام-2 Lonza CC-3156
10 مل المحاقن BD الصقر 309604
البولي أنابيب Tygon ABW0001
ليبوفيتز-15 وسائل الإعلام Gibco 11415-069
Sylgard إلاستومر سيليكون 184 قاعدة داو كورنينج 184
Sylgard إلاستومر سيليكون 184 عامل علاج داو كورنينج 184
SU8 يفر مقاوم الضوء ماجستير UC ديفيس بان مختبر N / A
كسوف TE200 مجهر مقلوب نيكون كسوف TE200
حقنة مضخة هارفارد جهاز PHD2000
19 إبرة قياس تحت الجلد كيندال 8881
THP-1 خط خلية الوحيدات ATCC TIB-202
(التخزين المؤقت هانكس محلول ملحي) مع الكالسيوم HBSS 2 + / 2 + المغنيسيوم Gibco 14025-092
عامل نخر الورم ألفا (TNF-α) R & D أنظمة 210-TA-010
اللحمية عامل المشتقة - 1 (SDF-1) R & D أنظمة 350-NS-010
RPMI 1640 Cellgro 10-040-CV
مصل الزلال الإنسان (HSA) ZLB بهرنغ NDC 0053-7680-32

الجدول 2. الكواشف محددة والمعدات.

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Schaff, U. Y., Xing, M. M., Lin, K. K., Pan, N., Jeon, N. L., Simon, S. I. Vascular mimetics based on microfluidics for imaging the leukocyte--endothelial inflammatory response. Lab Chip. 7, 448-456 (2007).
  2. Tsou, J. K., Gower, R. M., Ting, H. J., Schaff, U. Y., Insana, M. F., Passerini, A. G., Simon, S. I. Spatial regulation of inflammation by human aortic endothelial cells in a linear gradient of shear stress. Microcirculation. 15, 311-323 (2008).
  3. Ting, H. J., Stice, J. P., Schaff, U. Y., Hui, D. Y., Rutledge, J. C., Knowlton, A. A., Passerini, A. G., Simon, S. I. Triglyceride-rich lipoproteins prime aortic endothelium for an enhanced inflammatory response to tumor necrosis factor-alpha. Circ. Res. 100, 381-390 (2007).
  4. Wang, Y. I., Schulze, J., Raymond, N., Tomita, T., Tam, K., Simon, S. I., Passerini, A. G. Endothelial inflammation correlates with subject triglycerides and waist size after a high-fat meal. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 300, H784-H791 (2011).
  5. Deverse, J. S., Bailey, K. A., Jackson, K. N., Passerini, A. G. Shear stress modulates rage-mediated inflammation in a model of diabetes-induced metabolic stress. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. , (2012).
  6. Dai, G., Kaazempur-Mofrad, M. R., Natarajan, S., Zhang, Y., Vaughn, S., Blackman, B. R., Kamm, R. D., Garcia-Cardena, G., Gimbrone, M. A. Distinct endothelial phenotypes evoked by arterial waveforms derived from atherosclerosis-susceptible and -resistant regions of human vasculature. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 14871-14876 (2004).
  7. Young, E. W., Wheeler, A. R., Simmons, C. A. Matrix-dependent adhesion of vascular and valvular endothelial cells in microfluidic channels. Lab Chip. 7, 1759-1766 (2007).
  8. Davies, P. F., Civelek, M., Fang, Y., Guerraty, M. A., Passerini, A. G. Endothelial heterogeneity associated with regional athero-susceptibility and adaptation to disturbed blood flow in vivo. Semin Thromb Hemost. 36, 265-275 (2008).
  9. Burdge, G. C., Calder, P. C. Plasma cytokine response during the postprandial period: A potential causal process in vascular disease. Br. J. Nutr. 93, 3-9 (2005).
  10. Hotamisligil, G. S. Inflammation and metabolic disorders. Nature. 444, 860-867 (2006).
  11. Libby, P. Inflammation in atherosclerosis. Nature. 420, 868-874 (2002).
  12. Nigro, P., Abe, J., Berk, B. C. Flow shear stress and atherosclerosis: A matter of site specificity. Antioxid Redox Signal. 15, 1405-1414 (2011).
  13. Chiu, J. J., Lee, P. L., Chen, C. N., Lee, C. I., Chang, S. F., Chen, L. J., Lien, S. C., Ko, Y. C., Usami, S., Chien, S. Shear stress increases icam-1 and decreases vcam-1 and e-selectin expressions induced by tumor necrosis factor-[alpha] in endothelial cells. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24, 73-79 (2004).
  14. Li, Y. S., Haga, J. H., Chien, S. Molecular basis of the effects of shear stress on vascular endothelial cells. J. Biomech. 38, 1949-1971 (2005).
  15. Usami, S., Chen, H. H., Zhao, Y., Chien, S., Skalak, R. Design and construction of a linear shear stress flow chamber. Ann. Biomed. Eng. 21, 77-83 (1993).
  16. Helmke, B. P. Molecular control of cytoskeletal mechanics by hemodynamic forces. Physiology (Bethesda). 20, 43-53 (2005).
  17. Gower, R. M., Wu, H., Foster, G. A., Devaraj, S., Jialal, I., Ballantyne, C. M., Knowlton, A. A., Simon, S. I. Cd11c/cd18 expression is upregulated on blood monocytes during hypertriglyceridemia and enhances adhesion to vascular cell adhesion molecule-1. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 31, 160-166 (2011).
  18. Wu, H., Gower, R. M., Wang, H., Perrard, X. Y., Ma, R., Bullard, D. C., Burns, A. R., Paul, A., Smith, C. W., Simon, S. I., Ballantyne, C. M. Functional role of cd11c+ monocytes in atherogenesis associated with hypercholesterolemia. Circulation. 119, 2708-2717 (2009).
  19. Bussolari, S. R., Dewey, C. F., Gimbrone, M. A. Apparatus for subjecting living cells to fluid shear stress. The Review of scientific instruments. 53, 1851-1854 (1982).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Lab on a ChipVascular Mimetic Microfluidic ChambersShear Stress AnalysisMonocyte Adhesion AssayTNF alpha StimulationHuman Aortic Endothelial CellsTHP 1 Cell RecruitmentPDMS Microfluidic FabricationOscillatory Shear Stress

مقالات ذات صلة