مقالة منهجية
تبادل المنافع والمصالح لدراسة بين Xenorhabdus البكتيريا و Steinernema الديدان الخيطية، وأساليب لرصد وجود البكتيريا والديدان الخيطية موقع داخل. المنهج التجريبي، والتي يمكن تطبيقها على النظم الأخرى، ينطوي على البكتيريا الهندسة للتعبير عن بروتين الفلورية الخضراء وتصور، وذلك باستخدام البكتيريا المجهري مضان داخل الديدان الخيطية شفافة.
Symbioses، والذين يعيشون معا من اثنين أو أكثر من الكائنات الحية، على نطاق واسع في جميع ممالك الحياة. عن اثنين من أكثر الكائنات في كل مكان على وجه الأرض، والديدان الخيطية البكتيريا تشكل مجموعة واسعة من الجمعيات التكافلية التي تتراوح من المفيد الممرضة 1-3. واحد هذه الجمعيات هي العلاقة متبادل المنفعة بين البكتيريا والديدان الخيطية Xenorhabdus Steinernema، التي برزت بوصفها نظاما من طراز التعايش 4. النيماتودا الممرضة للحشرات هي Steinernema، وذلك باستخدام المتكافل البكتيرية بهم لقتل الحشرات 5. لنقل بين المضيفين الحشرات، والبكتيريا استعمار الامعاء من الديدان الخيطية في المرحلة المعدية الأحداث 6-8. في الآونة الأخيرة، وقد ثبت عدة أنواع النيماتودا الأخرى للاستفادة من البكتيريا لقتل الحشرات 9-13، والتحقيقات بدأت دراسة التفاعلات بين النيماتودا والبكتريا في هذه النظم <سوب> 9.
وصفنا طريقة لرؤية المتكافل البكتيرية داخل أو على مضيف الديدان الخيطية، والاستفادة من الشفافية البصرية من الديدان الخيطية عند عرضها بواسطة المجهر. صممت هذه البكتيريا في التعبير عن بروتين فلوري، مما يسمح التصور من خلال الفحص المجهري مضان. وتتوفر العديد من البلازميدات التي تحمل الجينات ترميز البروتينات التي يتألق عند أطوال موجية مختلفة (أي أخضر أو أحمر)، والاقتران من البلازميدات من الإشريكية القولونية سلالة المانحة إلى المتلقية المتكافل البكتيرية ناجحة لمجموعة واسعة من البكتيريا. تم تطوير الأساليب المذكورة للتحقيق في العلاقة بين carpocapsae Steinernema وXenorhabdus nematophila 14. وقد استخدمت أساليب مماثلة للتحقيق في غيرها من الديدان الخيطية-بكتيريا الجمعيات 9، 15-18، وفي النهج وبالتالي ينطبق عموما.
والتقىهود يسمح توصيف جود البكتيريا والديدان الخيطية التوطين داخل في مراحل مختلفة من التنمية، وتوفير نظرة ثاقبة لطبيعة تكوين الجمعيات وعملية الاستعمار 14 و 16 و 19. التحليل المجهري يكشف كل من تواتر الاستعمار بين السكان وتوطين البكتيريا لاستضافة الأنسجة 14، 16، 19-21. هذا هو ميزة على غيرها من أساليب رصد البكتيريا داخل السكان الديدان الخيطية، مثل صوتنة 22 أو طحن 23، التي يمكن أن توفر مستويات متوسط الاستعمار، ولكن قد لا، على سبيل المثال، تميز السكان مع ارتفاع وتيرة منخفضة الأحمال المتكافل من السكان مع تردد انخفاض الأحمال المتكافل عالية. يمكن تمييز وتيرة وحمولة من البكتيريا استعمار أهمية خاصة عند فحص الجرثومي أو وصف المسوخ للاستعمار الظواهر 21، 24. في الواقع، وقد استخدم المجهر مضان في فحص إنتاجية عالية من المسوخ البكتيرية لعيوب في الاستعمار 17 و 18، وأقل شاقة من الأساليب الأخرى، بما في ذلك صوتنة 22، 25-27 و الفردية تشريح الديدان الخيطية 28 و 29.
1. بناء على الإجهاد الجرثومي نيون عبر اقتران
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
بروتوكول الموصوفة هنا يوفر طريقة للكشف البصري من البكتيريا داخل مجموعة الديدان الخيطية (الشكل 1). هذه الطريقة يستفيد من الشفافية البصرية من الديدان الخيطية والقدرة على تسمية fluorescently البكتيريا، مما يتيح تحليل في الجسم الحي من البكتيريا داخل المضيف الديدان الخيطية (الشكل 3). على وجه التحديد، فإن هذا النهج يحدد توطين البكتيرية داخل مضيفه. عن طريق عد السكان الديدان الخيطية والتسجيل لحضور البكتيرية، يمكن تحديد وتيرة الاستعمار الجرثومي عب.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
الكتاب أود أن أشكر أوجينيو فيفاس، Heungens كورت، مارتنز اريك، كولز تشارلز، سكر داربي، Stabb اريك، وتود Ciche لما قدموه من مساهمات في تطوير هذا البروتوكول والأدوات المستخدمة. وقدم الدعم KEM وJMC من المعاهد الوطنية للصحة (NIH) الجائزة الوطنية خدمة أبحاث T32 (AI55397 "الميكروبات في الصحة والمرض"). وأيد من قبل JMC مؤسسة العلوم الوطنية (NSF) زمالة دراسات عليا أبحاث. وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من المؤسسة الوطنية للعلوم (IOS-0920631 0950873 وIOS).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم كاشف | شركة | كتالوج رقم | التعليقات (اختياري) |
| الدهون آجار (العقيمة) | 8 غرامات المرق المغذي، 15 غراما أجار، 5 خلاصة الخميرة غرام، 890 مل ماء، 10 مل 0.2 جم / مل MgCl 2. 6H 2 0، 96 مل شراب الذرة * حل، 4 مل زيت الذرة * اثارة وسائل الاعلام بينما تتدفق لوحات * إضافة مادة معقمة التعقيم بعد | ||
| شراب الذرة الحل (العقيمة) | 7 مل شراب الذرة، و 89 مل ماء ومزيج الأوتوكلاف | ||
| البيض الحل | 16،6 مل هيبوكلوريت الصوديوم 12٪، 5 مل KOH 5M، 80 مل ماء | ||
| استذابة مرق (العقيمة) | 5 خلاصة الخميرة غراما و 10 غراما تريبتون، 5 غرامات ملح، 1 L المياه ومزيج الأوتوكلاف | ||
| Microfuge | الصياد | 13-100-675 | فإن أي microfuge التي تحمل أنابيب microfuge العمل |
| نبذ | بيكمان | 366802 | كبير الطرد المركزي التي تحمل قمة الجدول 15 مل و 50 مل المخروطية أنابيب |
| معقمة 60 مم X 15 مم طبق بتري | الصياد | 0875713 | |
| 50 مل أنابيب الطرد المركزي | الصياد | 05-539-6 | |
| 15 مل أنابيب الطرد المركزي | الصياد | 05-531-6 | |
| العقيمة 100 مم X 20 مم طبق بتري | الصياد | 0875711Z | أعمق من أطباق بتري القياسية |
| 24 لوحة جيدا | غرينر بيو واحد | 662000-06 | |
| مجهر | المجهر الفلورسنت يحتاج قدرات متوافق مع fluorophore الخاص | ||
| بارافورمالدهيد | علوم المجهر الإلكتروني | 15710 | |
| PBS (العقيمة) | 8 ز كلوريد الصوديوم 0.2 غرام KCL 1،44 ز نا 2 HPO 4 0،24 ز KH 2 PO 4 1 L المياه ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 في المياه وإلى 1 L والأوتوكلاف | ||
| Microfuge أنابيب | الصياد | 05-408-138 | 2 مل أو 1.5 مل أنابيب |
| الرجاجة | فإن أي شاكر الذي يتسبب في السائل لتحريك بلطف العمل | ||
| Diaminopimelic حمض | سيجما | D-1377 | إذا لزم الأمر، استكمال وسائل الإعلام إلى التركيز أو مم 1 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن