$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. خطوة واحدة
قبل الدواء مخدر: 10-15 دقيقة قبل تحريض التخدير، وضخ الأتروبين (0.20 ملغ / كلغ) وmethylprenidsolone (0.05 ملغ) الفرعية لمنع اللعاب cutaneously وذمة، على التوالي.
2. الخطوة الثانية
تحريض التخدير: ضخ الصوديوم بنتوباربيتال (70 ملغ / كغ) أو خليط من الكيتامين / زيلازين (100 ملغ / كغ و 10 ملغم / كغم على التوالي) داخل peritoneally. دعونا نذهب في الماوس حتى يمكن الحصول على أي منعكس قرصة أخمص قدميه. إذا كان التخدير يبدو خفيفة جدا، مع تكملة 1/4 من الجرعة.
3. الخطوة الثالثة
* ملاحظة: هذا هو إجراء جراحة المحطة الطرفية.
عندما تم التوصل إلى الطائرة من التخدير الجراحي، نقل الماوس على بطانية دافئة التي أثيرت في وضعية الرقود.
- تغطية خطم من الفأرة مع قناع تقديم O نقية 2 في تدفق حوالي 100 مل / دقيقة.
باستخدام قص الشعر، حلاقة المنطقة الظهرية من مؤخر العنق من الرقبة إلى قاعدة الذيل. - حلاقة أيضا hindlimb الحق.
- الوجه الماوس لموقف ضعيف ولكن الحرص على ترك قناع الأكسجين في المكان.
4. الخطوة الرابعة
تأمين الماوس في مكان الغرز مع يحلق حول أطرافه وتأمين في أنحاء متفرقة من سطح العمل.
5. الخطوة الخامسة
إدراج التحقيق درجة حرارة لمراقبة درجة حرارة الماوس الأساسية. ضبط بطانية التدفئة / مصباح الطاقة للحفاظ على درجة الحرارة الأساسية بين C ° 36 و 38 ° C.
6. القصبة الهوائية والتنفس الصناعي
- باستخدام مقص حادة، وجعل قطع القصبة الهوائية وعلى شد الجلد بعيدا من كلا الجانبين.
- باستخدام ملقط حادة وتفتيت الغدة اللعابية وذلك لفضح 2 عضلات رقيقة (قصي لامي) الذي يغطي القصبة الهوائية.
- باستخدام ملقط حادة، فصل 2 MUSCليه على طول فصلهم الإنسي للكشف عن القصبة الهوائية.
- باستخدام ملقط دومون ج 7، 2 شريحة طول الخيط الحرير 4،0 تحت القصبة الهوائية.
- جعل خفض مستعرضة في القصبة الهوائية في الغضروفية بين حلقتين ولكن الحرص على عدم القسم تماما القصبة الهوائية.
- إدراج أنبوب القصبة الهوائية أسفل القصبة الهوائية، ومن ثم تأمين على جانبي افتتاح الإدراج عن طريق ربط الغرز أكثر من ذلك. يتم توصيل أنبوب القصبة الهوائية لجهاز التنفس الصناعي الماوس (SAR-830/AP، CWE شركة) وcapnograph ل(μcapstar، CWE شركة). يتم توصيل جهاز التنفس الصناعي، من خلال حقيبة الامتثال، إلى مصدر نقي O 2. ضبط المعلمات من التنفس الصناعي (100-150 نبضة في الدقيقة معدل التنفس، نهاية المد والجزر حجم 170-310 ميكرولتر) بحيث الماوس لا تحارب ضد التهوية الاصطناعية وPCO نهاية المد والجزر 2 هو مستقر بين 4 و 5٪.
7. وضع خطوط الوريد
- باستخدام تقنيات تشريح حادة، تعرض الوداجيالوريد على جانب واحد من العنق. على هذا المستوى، حبل الوريد انشقاقات داخل اثنان جذوع الرئيسية، عروق الوجه الأمامي والخلفي.
- نفذ الخطوات التالية مرتين، مجموعة واحدة لكل من هذه جذوع:
- باستخدام ملقط دومون 4 أو 5، بعناية فصل الوريد من الأنسجة المحيطة به حرف عطف.
- باستخدام ملقط دومون 7، 2 طول الشريحة من 6.0 خيوط الحرير تحت الوريد. تفصل بينهما قدر الإمكان على طول الوريد.
- وضع مقطع سفينة صغيرة على الجانب القريب من الوريد (الجانب الأقرب إلى القلب)، وربط قبالة الجانب البعيد من الوريد.
- باستخدام مقص القزحية ناعم جدا، وجعل شق صغير عرضية في الوريد، مع عناية كبيرة لا إلى قسم الوريد تماما.
- إدراج القسطرة معبأة سلفا 1Fr (premicath، Vygon) في الافتتاح، يصل إلى مقطع السفينة.
- عقد الوريد والقسطرة معا في ملقط دومون 4، إزالة بعناية مقطع السفينة، ثم دفع القسطرة لعدد قليل مورملليمتر ه في الوريد.
- تأمين القسطرة من خلال ربطه مع كل من الغرز على كلا الجانبين من الإدراج.
- يتم توصيل واحدة من القسطرة لحقنة أو مضخة لحقن حقنة جرعات تكميلية من التخدير كلما كان ذلك ضروريا (عادة كل دقيقة 10-30). الجرعة IV إما 6 ملغ / كغ من الصوديوم بنتوباربيتال أو 1250 +40 ميكروغرام / كغ / دقيقة من الكيتامين / زيلازين 12. يتم توصيل قسطرة أخرى لمضخة محقنة لبالتسريب الوريدي البطيء (50 ميكرولتر / ساعة) من حل الجلوكوز تحتوي على 4٪ NaHCO 3 (1٪) وplasmion (14٪).
8. إغلاق جلد الرقبة مع إبرة خياطة و، والعودة إلى ماوس ضعية الرقود
9. تشريح العضلات القائمة الخلفية والأعصاب
- باستخدام مقص، وإجراء شق من أعلى الفخذ إلى وتر أخيل. فصل الجلد من عضلات الكامنة، مع الحرص على عدم الاضرار الأوعية الدموية. كوى حسب الحاجة.
التعرف على حافة الأمامية للذات الرأسين الفخذية، والذي يظهر على شكل خط أبيض يهرول الفخذ. باستخدام مقص، وفتح بعناية على طول خط من الركبة على طول الطريق إلى عظم الورك. فصل العضلات. العصب الوركي هو الآن مرئية تحت العضلة ذات الرأسين الفخذية. - تشريح بعناية ذات الرأسين الفخذية. كوى / ربطة حسب الحاجة لمنع النزيف. ويمكن لذات الرأسين الفخذية إزالة تماما أو ببساطة متكأ لفضح العصب الوركي وثلاثية الرؤوس عضلات ربلة.
- تشريح العصب الربلي من.
- باستخدام 8/0 خيط الحرير، ربط الجزء الأعلى من العصب الشظوية المشتركة والبعيدة لقطع عقدة. تشريح الأعصاب على طول الطريق حتى، أقرب إلى الورك ممكن.
- تحديد العصب قصبي في الأعصاب بين الشظوي المشترك والربلي. بين مختلف فروع العصب قصبي، وتحديد الفروع التعصيب في ربلة ثلاثية الرؤوس من الفروع التي تذهب أعمق (المشار إليه فيما العصب قصبي).
- باستخدام 8/0 الحريرالموضوع، ربط بين جميع فروع العصب قصبي مع الحفاظ على سلامة فروع في ربلة التعصيب ثلاثية الرؤوس. قطع العصب قصبي بشكل أقصى إلى عقدة العصب وتشريح تصل إلى أقصى حد ممكن.
- تغطية كاملة hindlimb مع الشاش مع مشروب المالحة لمنع أصاب مع مواصلة العمل على الخطوة التالية.
10. الثقب
- باستخدام مقص، وإجراء شق على طول العمود الفقري. فصل الجلد من عضلات الأساسية.
- جعل اثنين من الشقوق على كل جانب من فقرات لفصل العضلات تحت الجلد. ثم قطع كل وتر العضلات التي نعلق على جانب فقرات على كل جانب.
- باستخدام ملقط ومجرفة حادة غرامة، وإزالة ما تبقى من العضلات على الجانب الظهري من فقرات حول العمليات الشائكة أن تحدد بوضوح كل فقرة على حدة.
- تحديد فقرات T13 وL1. T13 هو أن يكون فقرة مشاركة الأضلاع المرفقة. والعمود الفقري ثسوء استخدام يجمد أن المشابك كننغهام النخاع الشوكي في العمود الفقري (Stoelting شركة). وضع المشابك الشوكي على كل جانب من T13 وL1. يجب الحرص على عدم ضغط الحبل الشوكي، ولكن وضع قليلا من التوتر في المحور الطولي. تأكد من أن يتم تأمين بشكل جيد العمود الفقري عن طريق الضغط برفق مع ملقط.
- قراضة باستخدام غرامة، وإزالة عمليات العمود الفقري ثم الصفائح أكثر من T13 وL1، مما يعرض الحبل الشوكي.
- تغطية الحبل الشوكي يتعرض مع قطع صغيرة من القطن أو مشروب مع spongel المالحة لمنع جفاف.
- وضع مخصص حمام البلاستيكية المصنوعة على اعلى ظهره، المحيطة الحبل الشوكي. تأمين حمام في مكانها باستخدام 4/0 خيط الحرير. تأكد من أن الحمام هو ماء بإغلاق مع كويك الصب تسرب (WPI).
- مرة واحدة في كويك الصب قد جفت، وإزالة القطن تغطي النخاع الشوكي، وملء حوض الاستحمام مع الزيوت المعدنية.
- باستخدام ملقط دومون 5 دقيقة جدا ومقص القزحية، وسحب بلطف على زميله الجافيةص المحيطة الحبل الشوكي، وفتحه قدر الإمكان في كل اتجاه. طي الجافية على كل جانب من الحبل الشوكي.
- خفض منصة مرتفعة على الماوس الذي هو الكذب وذلك للحفاظ على علقتها المشبك الفقري.
- استخدام المشبك آخر الفقري لكبح عملية الشائكة في المنطقة العجزية لدعم المنطقة الخلفية من الحيوان.
- استعرضوا يستخدم المشبك الثالث إلى شل hindlimb الحق والكاحل، بزاوية 90 درجة عند الركبة.
11. وتر العرقوب تشريح
- مع الطرف عازمة على 90 درجة في الركبة والكاحل في، إزالة الشاش تغطي منطقة hindlimb، وتشريح في وتر العرقوب خالية من الأنسجة المحيطة. تشريح قدر الإمكان ربلة ثلاثية الرؤوس في الأنسجة المحيطة من أيضا.
- قطع وتر العضلة الأخمصية بالقرب من عقبي، ثم قطع مرة أخرى لإزالة وتر تماما.
- باستخدام إبرة مترابطة، نعلق الموضوع 6/0 الحرير من خلال اله وتر العرقوب وجعل عقدة الثلاثي حول الوتر.
- وضع محول القوة على مقربة من عقدة، وقطع الجزء الأعلى من وتر، وإرفاقه محول باستخدام القوة خيط الحرير.
- إدراج اثنين من أطوال أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ تحت اللفافة للعضلات ربلة ثلاثية الرؤوس. وترتبط هذه الأسلاك إلى مكبر للصوت AC خارج الخلية لتسجيل EMG.
- وضع العصب الشظوي المشترك والعصب قصبي على ربط قطبين ثنائي القطب.
- وضع العصب ربلة ثلاثية الرؤوس على الكاثود من القطب هوك، مع القطب الموجب لمس العضلات القريبة.
- ربط جميع الأقطاب إلى وحدة تحفيز العزلة.
- وضع القطب الكهربائي الكرة على السطح الظهري للحبل الشوكي، متصل مكبر للصوت AC خارج الخلية لتسجيل إمكانات الحبل ظهر. تضع الإلكترود المرجعي جي / أجكل في اتصال مع العضلات مرة أخرى.
12. الخطوة الثانية عشر
تحفيز العصب ربلة ثلاثية الرؤوسباستخدام مربع بنسبة 50 نبضة μsec من شدة زيادة في التردد المنخفض (<1 هرتز) حتى أقصى سعة لوحظ نشل. التحرك ببطء وقوة محول لتمتد العضلات في حين رصد مدى الاستجابة نشل نشل السعة حتى تصل إلى الحد الأقصى.
13. تسجيلات من داخل الخلايا العصبونات الحركية
من هذه النقطة، وتستخدم تقنيات الكهربية القياسية لإعداد الكهربائي داخل الخلايا، اختراق الخلايا العصبيه في الحبل الشوكي وتحديد بأنها العصبون الحركي.
- سحب الزجاج لmicropipette تلميح ~ ميكرومتر 1 باستخدام مجتذب ماصة (P-97 Micropipette بولير، الآلات سوتر). ملء القطب مع حل 3M بوكل (مقاومة القطب 10-20 MΩ).
- باستخدام micropositioner، دفع micropipette، متصلة مكبر للصوت داخل الخلايا (Axoclamp 2B، الآلات اكسون) في الحبل الشوكي. رصد الإمكانيات الميدانية المحلية التي تسببها تحفيز همنظمة العمل ضد الجوع لتحديد موقع العصب المحرك تجمع للربلة ثلاثية الرؤوس.
- بعناية الاقتراب العصبونات الحركية المفترضة في حين رصد مقاومة مسرى مكروي. عند الضغط على غشاء، يزيد المقاومة. في وقت ما يمكن أن يسهل الاختراق باستخدام "الطنانة" وظيفة مكبر للصوت من داخل الخلايا.
14. القتل الرحيم الداخلي
في نهاية التجربة، والموت الرحيم للحيوان عن طريق جرعة زائدة من بنتوباربيتال (210 ملغ / كغ IV)، تليها قطع الرأس.