توضح هذه المقالة إدارة لوكس الموسومة البكتيريا على الفئران واللاحقة في الجسم الحي التحليل باستخدام التصوير تلألؤ بيولوجي IVIS.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
البكتيرية التصوير Bioluminescent
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
هذا الفيديو يصف استخدام كامل الجسم bioluminesce التصوير (BLI) لدراسة الاتجار البكتيرية في الفئران الحية، مع التركيز على استخدام البكتيريا في الجينات والعلاج بالخلايا لمرض السرطان. البكتيريا تقديم فئة جذابة من ناقلات لعلاج السرطان، وحيازة القدرة الطبيعية على النمو داخل الأورام بعد تفضيلي الإدارة النظامية. بكتيريا مهندسة للتعبير عن الجينات لوكس راديو كاسيت تصريح BLI الكشف عن البكتيريا ومواقع الورم في نفس الوقت. ويمكن تصور موقع ومستويات البكتيريا داخل الأورام مع مرور الوقت درست بسهولة، في اثنين أو ثلاثة أبعاد. هذه الطريقة تنطبق على مجموعة واسعة من الأنواع البكتيرية وأنواع طعم أجنبي الورم. توضح هذه المقالة بروتوكول لتحليل البكتيريا داخل الفئران bioluminescent تحت الجلد تحمل الورم. يوصف أيضا من البكتيريا المتعايشة التصور في القناة الهضمية (GIT) من BLI. هذه قوية، ورخيصة، واستراتيجية في الوقت الحقيقي التصوير تمثيلاTS وسيلة مثالية لدراسة البكتيريا في الجسم الحي في سياق أبحاث السرطان، العلاج الجيني في وجه الخصوص، والأمراض المعدية. هذا الفيديو يوضح الإجراء لدراسة لوكس الموسومة E. القولونية في الفئران الحية، مما يدل على قراءات المكاني والزماني للتحقيق BLI استخدام مع نظام IVIS.
البروتوكول
1. ورم الحث
- لتحريض الورم روتينية، تم حقن الجرعة مكون للأورام من الخلايا علقت الحد الأدنى في 200 ميكرولتر من مستنبت المصل خالية تحت الجلد (SC) في الجناح الإصابة مجانا 6-8 الاسبوع القديمة الإناث BALB / C أو athymic الفئران MF1-nu/nu ن = 6 (هارلان، أكسفورد، المملكة المتحدة) (1 × 10 6 خلايا 4T1) باستخدام إبرة حقنة 21-قياس. وكان جدوى من الخلايا المستخدمة في التلقيح أكبر من 95٪ كما هو محدد من قبل عدد البصرية باستخدام haemocytometer والتريبان الأزرق استبعاد صبغ (Gibco).
- بعد إنشاء الورم....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في سياق العلاج الجيني، أظهرت استخدام العوامل البيولوجية لتسليم الجينات العلاجية للمرضى وعدا كبيرا 3-5. مثل الفيروسات، والخصائص البيولوجية الفطرية من البكتيريا تسمح الكفاءة في تنفيذ DNA إلى الخلايا أو الأنسجة، وخاصة في سياق السرطان. وقد تبين أن البكتيريا قادرة طبيعيا من صاروخ موجه للأورام عندما تدار بشكل منتظم مما أدى إلى مستويات عالية من النسخ المتماثل محليا والخارجية إما (غير الغازية الأنواع) أو داخل الخلايا السرطانية (مسببات الأمراض). ويعزى السرطان في البداية محددة ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
الكتاب ترغب في الاعتراف الدعم ذات الصلة لهذه المخطوطة من المفوضية الأوروبية البرنامج الإطاري السابع (PIOF-GA-2009-255466) والايرلندي مجلس البحوث الصحية (HRA_POR/2010/138). وكس الموسومة E. كان القولونية النوع هدية من الدكتور جيهان كورماك، كلية جامعة كورك.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم كاشف | شركة | كتالوج رقم | تعليقات |
| 4T1 خلية خط | ATCC | CRL-2539 | مسانج نموذج سرطان الثدي المستمدة من ورم BALB / ج الناشئة بصورة عفوية الثديية |
| DMEM | سيغما الدريخ | D6429 | Dulbecco في معدلة النسر متوسطة |
| PBS | سيغما الدريخ | D8537 | التخزين المؤقت المالحة الفوسفات |
| Xenogen IVIS | الفرجار العلوم الحياتية | IVIS 100 ل2D التصوير؛ IVIS الطيف ل3D. | |
| لوريا مرق ميلر (LB) | سيغما الدريخ | L2542 | متوسطة النمو لE. القولونية |
| الاريثروميسين | سيغما الدريخ | E5389 | مضاد حيوي |
| الستربتومايسين عقار طبي | سيغما الدريخ | S9137 | مضاد حيوي |
| الفئران MF1nu/nu | هارلان (UK) | 069 (نو) / 070 (نو / +) | HSD: Athymic عاري-Foxn1nu |
| BALB / ج الفئران | هارلان (UK) | 066 | النمط الفرداني: H-2 د |
| بالتزقيم إبرة | التعليم والتدريب المهني الحلول التقنية (UK) | DE009 | 22G X 38mm إبرة بالتزقيم على التوالي |
| حقنة للحقن IV | BD العلوم البيولوجية | 309309 حتي 1 مل | حقنة الأنسولين مع 28 بوصة ½ G X الإبرة الدقيقة الرابعة بشكل جيد. |
| حقنة التطعيم للورم | براون | 9161376V | Omnifix 26 G & Xfrac12؛ إبرة بوصة |
المراجع
- Cronin, M., et al. High resolution in vivo bioluminescent imaging for the study of bacterial tumour targeting. PLoS One. 7, e30940(2012).
- Kuo, C., Coquoz, O., Troy, T. L., Xu, H., Rice, B. W. Three-dimensional reconstructio....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
