مقالة منهجية

في وقت واحد رسم المخ، في الوقت الحقيقي قياس تركيز اللاكتات والتلاعب Optogenetic من نشاط الخلايا العصبية في القشرة الدماغية القوارض

DOI:

10.3791/4328

⸱

ديسمبر 19, 2012

 ,  ,  , 
1Department of Veterinary & Comparative Anatomy, Pharmacology and Physiology, Sleep and Performance Research Center, WWAMI Medical Education Program, Washington State University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ووصف الإجراء لمعالجة النشاط الدماغي من الخلايا العصبية الهرمية القشرية optogenetically بينما رصد الكهربائي، مخطط كهربية العضل، وتركيز اللاكتات الدماغي. يتم تنفيذ تسجيلات تجريبية على الفئران، في حين أنها المربوطة الكابل الخضوع عفوية النوم / اعقاب دورات. يتم تجميع معدات Optogenetic في مختبرنا، ومعدات التسجيل متاح تجاريا.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

على الرغم من أن الدماغ يمثل أقل من 5٪ من الجسم عن طريق الإعلام، فإنه يستخدم ما يقرب من ربع الجلوكوز التي يستخدمها الجسم أثناء الراحة 1. وظيفة العين السريعة من النوم غير حركة (NREMS)، الجزء الأكبر من النوم قبل الوقت، غير مؤكد. ومع ذلك، واحدة من أبرز سمات NREMS هو انخفاض كبير في معدل استخدام الجلوكوز الدماغي نسبة إلى اليقظة 2-4. وقد أدت هذه النتائج وغيرها إلى الاعتقاد السائد أن النوم يؤدي وظيفة ذات الصلة الأيض الدماغي. ومع ذلك، فإن آليات التي تقوم عليها تخفيض في ايض الجلوكوز الدماغي خلال NREMS لا يزال يتعين توضيح.

واحد الظاهرة المرتبطة NREMS التي قد تؤثر الدماغي معدل الأيض هو حدوث موجات بطيئة، التذبذبات على ترددات أقل من 4 هرتز، في الكهربائي 5،6. هذه الموجات البطيئة الكشف على مستوى الجمجمة أو القشرية الدماغية سطح تعكسالتذبذبات الكامنة بين الخلايا العصبية دولة استقطابها / يصل ودولة hyperpolarized / بنسبة 7. أثناء حالة أسفل، الخلايا لا تخضع إمكانات العمل لفترات تصل إلى عدة مئات من ميلي ثانية. استعادة التدرجات الأيونية بعد تركيز إمكانات العمل يمثل عبئا كبيرا على التمثيل الغذائي للخلية 8؛ غياب إمكانات العمل أثناء حالات أسفل المرتبطة NREMS يمكن أن تسهم في خفض التمثيل الغذائي النسبي لايقاظ.

كان اثنين من التحديات التقنية التي ينبغي معالجتها من أجل هذه العلاقة افتراضية لفحصها. أولا، كان من الضروري لقياس الأيض الدماغي حال السكر مع قرار الزمنية يعكس ديناميات EEG الدماغي (أي، أكثر من ثانية بدلا من دقيقة). للقيام بذلك، قمنا بقياس تركيز اللاكتات، نتاج تحلل الهوائية، وبالتالي قراءات من معدل ايض الجلوكوز في مخ الفئران. كان اللاكتاتتقاس باستخدام أوكسيديز القائمة على استشعار اللاكتات الوقت الحقيقي جزءا لا يتجزأ من القشرة الأمامية. آلية الاستشعار عن بعد يتكون من القطب البلاتين إيريديوم محاطة بطبقة من جزيئات أوكسيديز اللاكتات. استقلاب اللاكتات بواسطة أوكسيديز اللاكتات تنتج بيروكسيد الهيدروجين، التي تنتج تيارا في القطب البلاتين إيريديوم. لذلك تكثف من تحلل الدماغ يوفر زيادة في تركيز الركيزة لاكتات أوكسيديز، الذي ثم ينعكس في زيادة الحالية في القطب الاستشعار عن بعد. بالإضافة إلى ذلك كان من الضروري لقياس هذه المتغيرات في حين التلاعب في استثارة القشرة الدماغية، وذلك لعزل هذا المتغير من جوانب أخرى من NREMS.

ضعنا نظام تجريبي لقياس نشاط الخلايا العصبية في وقت واحد عن طريق elecetroencephalogram، وقياس تدفق حال السكر عن طريق المجس البيولوجي اللاكتات، والتلاعب في الخلايا العصبية الدماغية القشرية النشاط عن طريق تفعيل optogenetic من PYRAميدال الخلايا العصبية. وقد استخدمت هذا النظام ونحن لتوثيق العلاقة بين الطول الموجي الكهربي النوم ذات الصلة وديناميات لحظة إلى لحظة تركيز اللاكتات في القشرة الدماغية. البروتوكول قد تكون مفيدة للكل ذي مصلحة في دراسة والتصرف بحرية في القوارض، والعلاقة بين قياس نشاط الخلايا العصبية على مستوى تخطيط كهربية و طاقة الخلوية داخل الدماغ.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. إعداد الجراحية للحيوانات

1. الموضوعات التجريبية

استخدام الفئران لB6.Cg-TG (Thy1-COP4/eYFP) خط المعدلة وراثيا 18Gfng / J 9؛ JAX سلالة # 7612) أو الفئران الأخرى معربا عن الأزرق قناة الموجبة حساسة للضوء، Channelrhodopsin-2، في الخلايا العصبية الدماغية القشرية. تطبيق الضوء الأزرق إلى قشرة الدماغ من B6.Cg-TG (Thy1-COP4/eYFP) خط المعدلة وراثيا 18Gfng / J يتسبب في الخلايا العصبية الهرمية معربا عن Channelrhodopsin-2 ليزيل الاستقطاب والخضوع العمل إمكانات 9،10. ونتيجة لذلك من تنشيط الخلايا الهرمية، يتم تنشيط interneurons المحلية، ويتم نشر التغيير في القدرة على الخلايا العصبية خارج موقع من التحفيز 10. إجراء عمليات جراحية تحت ظروف معقمة في التقيد بالمبادئ التوجيهية التنظيمية المطبقة: الأدوات الجراحية الأوتوكلاف وsoftpacks (حقل الجراحة، ومنصات الشاش)؛ الساخنة حبة تعقيم جميع الأجهزة التي تتحمل الحرارة معدنية مزروع (القنيات، ومسامير وأسلاك)لثوانى-30؛ تطهير للحرارة التعصب الأجهزة القابلة للزرع (كابل الألياف البصرية، موصل البلاستيك) مع تراجع 10-ثوانى في الإيثانول؛ ضربة الايثانول انخفض البنود الجافة بتطبيق الهواء المعلب.

2. التخدير، والتنسيب التجسيمي وتصفية الجمجمة

استخدام ال 6 المتكاملة إيمباك موضوع المريض (VET تجهيز المؤتمر الوطني العراقي) لنظام تخدير الماوس. استخدام الأكسجين 5٪ Isoflurane/95٪ لتحريض و 3٪ أكسجين Isoflurane/97٪ للصيانة أثناء الجراحة. وضع الحيوان على بطانية المتداولة في المياه تعيين إلى 37 C. وليس من الضروري لمراقبة درجة حرارة الجسم إذا تم الإبقاء على بطانية في درجة الحرارة هذه.

3. إعداد الجمجمة لزراعة

إعداد الموقع من قبل شق حلق جميع الفراء من أعلى الجمجمة. وينبغي توسيع نطاق منطقة حلق أفقيا من الأذن إلى الأذن والأمامي الخلفي من العين إلى نهاية الخلفي من الجمجمة. تطهير الجلد المعرض مع consecutiv 3يتبع مسحات (ه) من betadine من الايثانول. إجراء شق وسطي على الجزء العلوي من الجمجمة، من بين العينين إلى الجزء الخلفي من الجمجمة. تنظيف الجمجمة مع بيروكسيد الهيدروجين وملحي معقم (0.9٪ كلوريد الصوديوم). السيطرة على النزيف مع أداة الكي. تحديد موقع ووضع علامة bregma وامدا لتحديد إحداثيات التجسيمي. يتم عرض إحداثيات التجسيمي للتكوينات التحفيز الكهربائي / optogenetic التي استخدمناها في الجدول (1) ويظهر الشكل 1A في تخطيطي.

4. إعداد مواقع على زراعة الجمجمة

استخدام الحفر بسرعة عالية الأسنان مع قليل 0.5mm لدغ الكرة لإقامة كل موقع زرع في الجمجمة. الشطب الهامش الخارجي للكل ثقب باستخدام 0.7 مم بت لدغ الكرة لتسهيل الإدراج المسمار.

5. الإدراج وتأمين قنية، EMG العروض والعروض EEG

إدراج مسامير EEG (0.8mm في الطول، مع 2 سم من 3 غير المصقول0-قياس المعلبة والنحاس حافلة سلك ملحوم قبل أن المسمار الرأس) في الثقوب وحملهم في فترة زمنية محددة مع يد مفك الثورات 4-5 تقريبا للحصول على العمق المطلوب. عقد القنيات دليل في مكان مع حامل قنية التجسيمي ثم يضعوا لهم الجمجمة والمراسي مع الاسمنت الاكريليك. يجب على كل قنية دليل تحتوي على قنية همية / مرود (بلاستيك واحد، الجزء # C312 DC \ 1) من وقت لعملية جراحية لوقت التجريب (10-14 يوما) للحفاظ على سالكية.

6. إغلاق الموقع الجراحية

مرة واحدة يتم وضع المخ والقنيات دليل في الجمجمة والسندات معا مع الاسمنت الاكريليك الأسنان (الأسنان لانغ - اورثو جيت الأسمنت). بعد مجموعات الأسمنت ووضع موصل البلاستيك (بيناكل الجزء تكنولوجيا # 8402) فوق التلة الاسمنت المجففة. جندى ينتهي من الأسلاك المنبثقة عن EEG يؤدي إلى جهات الاتصال على الموصل البلاستيك. غلف السلك يؤدي في الأسمنت. ثم رسم الأسلاك EMG من خلال العضلات القفويق عن طريق تحريك لهم في برميل إبرة مثقوبة من خلال 21ga العضلات. ربط عقدة مزدوجة جراح لخياطة النايلون 5-0 للتغلب على هذه الأسلاك البعيدة لمجرد الخروج من حيث العضلات. خياطة معا مرة أخرى في الجلد الذي تراجع للوصول إلى الأنسجة العضلية واحدة مع عقدة الجراح توقف، وذلك باستخدام قطع عكس P-3 إبرة خياطة و 5-0 النايلون.

7. تسكين بعد الجراحة والإنعاش

إدارة البوبرينورفين بمثابة مسكن (0.1 مجم / كجم، تحت الجلد) وفلونيكسين أنتيمونيات (0.1 مجم / كجم، تحت الجلد) ومضاد للالتهابات مباشرة بعد الجراحة، ويوميا على 1-2 ايام بعد الجراحة. السماح لاستعادة الحيوانات في مستوى ظروف السكن المستعمرة لسبعة أيام على الأقل قبل التجريب. مع عدم وجود الرعاية السكنية مستعمرة إضافية غير القياسية، يمكن توقع أن تبقى القنيات براءة اختراع لمدة أسبوعين على الأقل مع stylets الساكن تأمين في المكان. ويمكن أيضا أجهزة استشعار EEG EMG ويتوقع أن تحتفظوظائف لهذه المدة.

2. جيل من البقول الخفيفة موقوت

1. برمجة وحدة التحفيز MC

توصيل الوحدة MC-التحفيز (موضوع متعدد الأنظمة قناة) عبر اتصال USB إلى جهاز كمبيوتر سطح المكتب. استخدام جداول البيانات مثل واجهة المستخدم MC-التحفيز لبرنامج وحدة التحفيز MC. أدخل TTL المطلوب (الترانزستور الترانزستور المنطق) الجهد للفترة على وفترات من التحفيز داخل وخارج فترات، وعدد من الدورات في الثانية الواحدة المطلوب، والعدد الإجمالي للدورات متكررة للدورة التحفيز بأكمله. لمزيد من التفاصيل انظر MC-التحفيز التقنية دليل:

3. تصنيع / جمعية العلاقات العامة الألياف البصريةالإجسام سمنة لتسليم الخفيفة إلى قشرة الدماغ

  1. تم العثور على اللوازم والمعدات اللازمة في: http://www.thorlabs.com/Thorcat/1100/1166-D02.pdf
  2. قطع وصقل كابلات الألياف البصرية. http://www.thorlabs.com/Thorcat/1100/1166-D02.pdf

4. جمعية Optogenetic القوارض نظام تحفيز

1. واجهة من MC-التحفيز وحدة والليزر

مرة واحدة يتم برمجة وحدة MC-التحفيز، تشغيله كمولد إشارة مستقل من ثنائي فولت 5-ON / OFF إشارة. توصيل الوحدة MC-التحفيز للسلطة TTL وحدة تمكين من الليزر مع موصلات BNC.

2. إنتاج خرج الليزر عبر كابل الألياف البصرية

استخدام شاشة عرض رقمية والطلب المتغير انتاج الطاقة من الليزر وحدة الطاقة إلى دليللاي ضبط انتاج الطاقة من الليزر. توصيل الوحدة قوة الليزر ليزر عبر كبل الشريط. توصيل FC الإناث (الطويق موصل) محول الألياف من الليزر إلى الرابط FC ذكر على الكابل التصحيح الألياف البصرية (بطول م 3، 200 ميكرون قطر الألياف الزجاجية التوصيل المغطى في ضوء يعكس اكريليت البوليمر الكسوة).

3. نقل ليزر للحيوان: عاكس الروتاري

قم بتوصيل كابل الألياف البصرية الناشئة (3 م في الطول) وكابلات الألياف البصرية تسليم (45 سم في الطول) إلى معارضة نهايات مشتركة الروتاري التغليف العدسات البصرية الموازاة اثنين (العدسات دوريسي). الألياف البصرية مفصل دوار بمثابة العاكس: كما يتحرك الحيوان حول قفصه ومفصل دوار يدور لمنع الكسر من الكابلات والألياف البصرية. استخدام العلاقات كبل البلاستيك لتركيب العاكس لمعدن تقف وضعت فوق القفص أسطواني الذي يقع الحيوان.

4. ربط تسليم الألياف البصريةكابل تاريخية

كبح الماوس باستخدام يد واحدة لحفظ الماوس تحت النخيل المقعر. توجيه رئيس الأوسط بين المجرب والسبابة. إزالة دمية قنية من قنية دليل ضعت لقنية الألياف البصرية. مسح قنية دليل الحطام باستخدام إبرة معقمة 25ga. إدراج كابل الألياف البصرية من جهة، وربط لدليل قنية الألياف البصرية مع غطاء المسمار مترابطة إنقاذها من قنية همية. السيطرة على عمق إدخال كابل الألياف البصرية في الدماغ عن طريق ربط عقدة الخيط على الكابل والألياف البصرية على مسافة ثابتة من نهاية ذي المشقوق. يظهر جهاز كامل التجريبية في الشكل 1B.

5. قياس EEG محددة النوم والتركيز اللاكتات خلال تحفيز Optogenetic

1. Precalibration من أجهزة الاستشعار اللاكتات

يتم تنفيذ ما قبل معايرة أجهزة الاستشعار اللاكتات مع في المختبرمجموعة (بيناكل الجزء تكنولوجيا # 7000-K1-T). جهاز الاستشعار هو معايرتها في الفوسفات مخزنة المالحة (الرقم الهيدروجيني 7.4)، ثم تعرض لثلاث تركيزات اللاكتات-L بطريقة تدريجية في البروتوكولات المصنعة.

2. الإدراج من أجهزة الاستشعار واللاكتات كابل EEG

إدراج استشعار ما قبل معايرة في الجمجمة محمولة على قنية دليل اللاكتات بطريقة مطابقة للكابل الألياف البصرية إجراء الإدراج (القسم 4.4). توصيل استشعار اللاكتات إلى المضخم من biosensor 8400 بيناكل مع موصلات المكونات ثنائي القطب. هذا المضخم إرفاق موصل إلى 8-دبوس على headmount جراحيا مزروع.

3. إنشاء Optogenetic كثافة التحفيز

قبل جمع البيانات، استخدام عنصر التحكم شدة مقبض الليزر لضبط شدة التحفيز optogenetic. فإن مدى الاستجابة تختلف باختلاف EEG الحيوانات، وذلك بسبب العوامل التي لم تدرس دراسة منهجية، وهي يجب التحقق عن طريق التفتيش البصري د في بداية التحفيز. في الممارسة العملية، ومن شأن شدة 80-120 μWatts تنتج عادة زيادة في السعة EEG ما يقرب من 50٪ في وتيرة التحفيز. بعد تحليل سريع مخصص تحويل فورييه (انظر القسم 5.5) ضروري لتحديد حجم المطلقة للاستجابة.

4. جمع البيانات

جمع البيانات باستخدام نظام بيناكل 8400: http://pinnaclet.com/pal-8400.html .

5. معالجة البيانات مع Neuroscore

تصنيف الدول النوم عن طريق التفتيش البصري للبيانات EEG EMG ومع واجهة Neuroscore (DataSciences، الدولية: http://www.datasci.com/products/software/NeuroScore_CNS_Software.asp ) أو واجهة Sirenia (بيناكل التكنولوجيا:F = "http://www.pinnaclet.com/sirenia.html" الهدف = "_blank"> http://www.pinnaclet.com/sirenia.html). معالجة البيانات في عشر الثانية والعهود و، غير أعقاب العين السريعة الحركة النوم، أو النوم حركة العين السريعة على أساس EEG EMG و. حفظ البيانات في جداول بيانات Microsoft Excel للتحليل إضافية واختبار الإحصائية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كما هو مبين في الشكل 2، خضع ماوس مجهزة لتحفيز optogenetic واللاكتات / EEG / EMG جمع البيانات عفوية التحولات حالة سكون / في حين تم رصد أعقاب EEG، EMG وتركيز اللاكتات الدماغي بشكل مستمر. زيادة الحالية في الاستشعار اللاكتات أثناء فترات انخفاض السعة EEG وانخفضت خلال فترات السعة العالية EEG. كما هو موضح في الشكل 3، سواء من قنوات EEG تستجيب للمؤثرات optogenetic تسليمها في القشرة الأمامية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عرض طرق تسمح لأحد هنا لقياس العلاقة بين النوم والتغيرات في تركيز الدماغ من اللاكتات وسيطة حال السكر على نطاق والوقت ليس من الممكن في السابق. الحيوانات الخضوع التحولات التلقائية بين NREMS، وبعد REMS. وعلاوة على ذلك، نحن قادرون على تطبيق محفزات optogenetic بينما الحيوانات الخضوع هذه التحولات. جمع البيانات حتى الآن تثبت أن تأثير الموجات التي يسببها كل من العفوية وعلى قراءات من المجس البيولوجي أوكسيديز المستندة إلى اللاكتات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأبحاث الممولة من قبل وزارة الدفاع (الدفاع كالة مشاريع البحوث المتقدمة، جائزة الشباب كلية، منحة رقم N66001-09-1-2117) وNINDS (R15NS070734).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
عنصر شركة كتالوج رقم التعليقات (اختياري)
باسيل ماوس دليل قنية قمة التكنولوجيا / شركة باسيل 7032
اللاكتات المجس البيولوجي قمة التكنولوجيا 7004
رئيس جبل قمة التكنولوجيا 8402
النوم / نظام تسجيل المجس البيولوجي قمة التكنولوجيا 8400-K1-SL 2 القنوات EEG، 1 EMG القناة، والمجس البيولوجي 1
ماوس المربوطة في المختبر عدة معايرة قمة التكنولوجيا 7000-K1-T
الألياف البصرية دليل قنية البلاستيك واحدة C312G 21 قنية دليل المقياس
قنية همية البلاستيك واحدة C312DC 21 مقياس الدمية
الماس الألياف الكاتب Thorlabs S90W
الألياف رابط تجعيد أداة Thorlabs CT042
منفرق الأنابيب Thorlabs FT030 03.0 مم
Thorlabs T10S13 ماكس ضياء. 0،012
منفرق أنبوب المتعرية Thorlabs FTS3
الألياف العارية تكسية الصلب المتعدد Thorlabs BFL37-200 200 ميكرون الأساسية، 0.37 NA
سلك القصاصات / كيفلر المقص Thorlabs T865
الايبوكسي الألياف البصرية Thorlabs F112
الألياف المتعرية أداة Thorlabs
الزجاج تلميع اللوحة Thorlabs CTG913
المطاط تلميع الوسادة Thorlabs NRS913
العين العدسة Thorlabs JEL10
كيم المسحات Thorlabs KW32
الهواء المضغوط Thorlabs CA3
تلميع بوك Thorlabs D50-XX
الألياف التفتيش نطاق Thorlabs CL-200
تلميع أفلام Thorlabs LFG5P، LFG3P، LFG1P، LFG03P
FC / PC موصل نهاية Thorlabs 30126G2-240 حمل ميكرومتر 240، SS الطويق
MC التحفيز وحدة متعدد القنوات أنظمة STG-4002
MC التحفيز البرمجيات متعدد القنوات أنظمة MC-V 2.1.5 التحفيز
الأزرق ليزر CrystaLaser CL473-050-0
الليزر امدادات الطاقة CrystaLaser CL2005
الألياف البصرية المشتركة الروتاري دوريسي العدسات FRJ-V4
الجدول 2. اللوازم والمعدات.

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Magistretti, P. Brain Energy Metabolism. Fundamental Neuroscience. Zigmond, M. J., Bloom, F. E., Landis, S. C., Roberts, J. L., Squire, L. R. , Academic Press. New York. 389-413 (1999).
  2. Maquet, P., et al. Cerebral glucose utilization during sleep-wake cycle in man determined by positron emission tomography and [18F]2-fluoro-2-deoxy-D-glucose method. Brain Res. 513 (1), 136-143 (1990).
  3. Buchsbaum, M. S., et al. Regional cerebral glucose metabolic rate in human sleep assessed by positron emission tomography. Life Sci. 45 (15), 1349-1356 (1989).
  4. Kennedy, C. Local cerebral glucose utilization in non-rapid eye movement sleep. Nature. 297 (5864), 325-327 (1982).
  5. Pappenheimer, J. R., Koski, G., Fencl, V., Karnovsky, M. L., Krueger, J. Extraction of sleep-promoting factor S from cerebrospinal fluid and from brains of sleep-deprived animals. J. Neurophysiol. 38 (6), 1299-1311 (1975).
  6. Borbely, A. A., Achermann, P. Sleep homeostasis and models of sleep regulation. Principles and Practice of Sleep Medicine. Kryger, M. H., Roth, T., Dement, W. C. , 3rd, W.B. Saunders. Philadelphia. 377-390 (2004).
  7. Destexhe, A., Contreras, D., Steriade, M. Spatiotemporal analysis of local field potentials and unit discharges in cat cerebral cortex during natural wake and sleep states. J. Neurosci. 19 (11), 4595-4608 (1999).
  8. Astrup, J., Sorensen, P. M., Sorensen, H. R. Oxygen and glucose consumption related to Na+-K+ transport in canine brain. Stroke. 12 (6), 726-730 (1981).
  9. Arenkiel, B. R., et al. In vivo light-induced activation of neural circuitry in transgenic mice expressing channelrhodopsin-2. Neuron. 54 (2), 205-218 (2007).
  10. Mateo, C. In Vivo Optogenetic Stimulation of Neocortical Excitatory Neurons Drives Brain-State-Dependent. Curr. Biol. , (2011).
  11. Wisor, J. P., Clegern, W. C. Quantification of short-term slow wave sleep homeostasis and its disruption by minocycline in the laboratory mouse. Neurosci. Lett. 490 (3), 165-169 (2011).
  12. El Yacoubi, M., et al. Behavioral, neurochemical, and electrophysiological characterization of a genetic mouse model of depression. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100 (10), 6227-6232 (2003).
  13. Tsunematsu, T., et al. Acute optogenetic silencing of orexin/hypocretin neurons induces slow-wave sleep in mice. J. Neurosci. 31 (29), 10529-10539 (2011).
  14. Le, S., Gruner, J. A., Mathiasen, J. R., Marino, M. J., Schaffhauser, H. Correlation between ex vivo receptor occupancy and wake-promoting activity of selective H3 receptor antagonists. J. Pharmacol. Exp. Ther. 325 (3), 902-909 (2008).
  15. Burmeister, J. J., Palmer, M., Gerhardt, G. A. L-lactate measures in brain tissue with ceramic-based multisite microelectrodes. Biosens. Bioelectron. 20 (9), 1772-1779 (2005).
  16. Cardin, J. A. Targeted optogenetic stimulation and recording of neurons in vivo using cell-type-specific expression of Channelrhodopsin-2. Nat. Protoc. 5 (2), 247-254 (2010).
  17. Destexhe, A., Contreras, D., Steriade, M. Cortically-induced coherence of a thalamic-generated oscillation. Neuroscience. 92 (2), 427-443 (1999).
  18. Liu, Z. W., Faraguna, U., Cirelli, C., Tononi, G., Gao, X. B. Direct evidence for wake-related increases and sleep-related decreases in synaptic strength in rodent cortex. J. Neurosci. 30 (25), 8671-8675 (2010).
  19. Iwai, Y., Honda, S., Ozeki, H., Hashimoto, M., Hirase, H. A simple head-mountable LED device for chronic stimulation of optogenetic molecules in freely moving mice. Neurosci. Res. 70 (1), 124-127 (2011).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة