تم تنفيذ جميع الإجراءات الموضحة في هذه المادة وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح من Landesamt FÜR Gesundheit اوند Soziales، برلين، ألمانيا.
إجراءات ما قبل العمليات الجراحية
1. إعداد أحادية
- لإعداد خيوط داخل اللمعة، واستخدمت 8-0 النايلون خيوط حيدة وقطعت إلى طول 13 مم لكل منهما.
- لطلاء من المجذوذه، تم استخدام Xantopren M الغشاء المخاطي، (هيراوس Kulzer محدودة، هاناو، ألمانيا) تنشيط بإضافة قطرة من محلول المنشط (المنشط، العالمي زائد، هيراوس Kulzer محدودة، هاناو، ألمانيا).
- تم سحب حيدة ببطء من خلال سيليكون حتى كانت مغطاة تماما مع ذلك. وبذلك، فإن حيدة تغطيتها بالتساوي مع السيليكون. تجنب الانتظار فترة طويلة جدا لأن مواد الطلاء تفعيلها وسوف تصبح شركة والجافة بسرعة.
- قبل سيليكون يبدأ ليصلب، فمن المستحسن لتجريدها من السيليكون الزائد من خيوط عن طريق سحب ما يزيد على ورقة. من خلال القيام بذلك، يمكن ضعفت طبقة السيليكون خارج لسمك تقريبي من 200 ميكرون.
- كان عالقا قاعدة حيدة سيليكون المغطاة في الصلصال من أجل السماح لها الجافة بين عشية وضحاها.
تعليق: من الناحية المثالية، تعقيمها فقط أو على الأقل المجذوذه تطهيرها ينبغي أن تستخدم لضمان العقم في موقع الجراحية. في الممارسة العملية، والتعقيم أو التطهير من المجذوذه يدوية الصنع من الصعب جدا بسبب نوعية المجذوذه قد تتفاقم 9. لذلك، قد يكون من الأفضل استخدام أحادية العقيمة المتاحة تجاريا بدلا من ذلك.
2. إعداد الأدوات الجراحية وللحيوانات
- تم الاحتفاظ بها جميع الأدوات الجراحية في الكحول الإيثيلي 70٪. بالإضافة إلى ذلك، قبل كل عملية جراحية جديدة، وجميع الأدوات الجراحية وتنظيفها بعنايةتطهير الثانية باستخدام الكحول الإيثيلي 70٪.
- تم تطهير المنطقة الجراحية بدقة باستخدام الكحول الإيثيلي 70٪ في كل الحيوانات قبل عانى من قطع. سمح للمواقع تطهيرها حتى يجف تماما قبل تنفيذ شقوق. لم يتم تنفيذ لقطة إضافية من الفراء لأن هذا قد يسبب التهاب الجلد وmicroabrasions اللاحقة 9.
العمليات الجراحية
3. تحديد المواقع من لجنة التحقيق LDF والرصد LDF
- لتحريض التخدير، وتعرضت الفئران إلى خليط غازي يتألف من الأوكسجين 30٪، 70٪ N 2 O و 2.5٪ isoflurane وباستخدام المرذاذ. لصيانة التخدير، وانخفاض تركيز isoflurane وإلى 1.5٪. الفئران والتنفس بصورة تلقائية عن طريق التنفس قناع طوال العملية الجراحية.
- أدرجت التحقيق في درجة الحرارة المستقيم وكانت ثابتة الفئران إلى الإطار التجسيمي تعريض الرأس الجداري. أثناء الجراحة، وكانت الفئران يستريح علىالحرارة التي تسيطر عليها سادة التدفئة، وضمان درجة الحرارة الأساسية ثابتة من 37.0 ± 0.5 درجة مئوية. تم إجراء شق خط الوسط السهمي (~ 1 سم طول) لفضح الجمجمة الجداري.
- وكان تشريح بعناية الجانب الأيسر من الجمجمة وتم إصلاح مسبار الالياف البصرية مباشرة إلى الجمجمة 2 مم الذيلية و 5 مم الوحشي من bregma باستخدام الغراء الفورية. بعد ذلك، تم تكييف حواف الجرح بعناية لتجنب انخفاض حرارة الجسم في الدماغ وكذلك الالتهابات.
- تم تحويل الماوس حول لفضح الجانب البطني من الرقبة. تم توصيل لمسبار الالياف البصرية إلى الجهاز LDF (PeriFLUX نظام 5000، Perimed، Järfälla، السويد) عن طريق ربط محول المسبار (ماجستير دقق 418-1، Perimed؛ Järfälla، السويد).
تعليق: على الرغم من تحول الماوس حولها، ويجب أن تكون عازمة على تحقيق الالياف البصرية مع الرعاية من أجل تجنب أن تقطع من الجمجمة.
- تم توصيل الجهاز LDF إلى COM كمبيوتر محمولالحاسوبية. وقد بدأ التسجيل المتواصل من القيم LDF باستخدام PeriSoft ل Windows (الإصدار 2.50، Järfälla، السويد). الشكل 1 يوضح الاتحاد البرازيلي يعني بالطبع تم الحصول عليها من عشر تسجيلات LDF خلال BCCAO وضخه.
4. الثنائية المشتركة انسداد الشريان السباتي
- واستمر التخدير كما هو موضح في 3.1. وضعت الماوس على ظهرها. تم إصلاح ذيل الحيوان والكفوف إلى لوحة التدفئة باستخدام شريط لاصق. وأجري السهمي شق خط الوسط بطني (~ 1CM طول).
- تم فصل كل من الغدد اللعابية بعناية وتعبئتها لتصور عام CCA الكامنة.
- تم فصل كلا من التقييم القطري المشترك بعناية من الأعصاب المبهم منها والأوردة المرافقة دون الإضرار بمصالح هذه الهياكل. التلاعب في الأعصاب المبهم قد يؤدي إلى خلل وظيفي عابر أو دائم في العصب السمبتاوي نظام، الذي لديه القدرة لحدوث صول القلب الكبيرhythmia أو السكتة القلبية حتى لا رجعة فيه. لذا، فمن الأهمية بمكان لتجنب أي تلاعب في الأعصاب المبهم. وقدم فضفاضة 5-0 الحرير حلقة خياطة حول كل CCA.
- أدرجت أنابيب السيليكون الصغيرة (قطرها 2 ملم) في فترة ما بين التقييم القطري المشترك وخيوط الحرير على كل جانب. واستخدمت هذه الأنابيب باعتباره التجبير من ال CCA من أجل تجنب إلحاق الضرر من جدران الشرايين عندما تم تشديد الغرز (الشكل 4).
- على حد سواء في التقييم القطري المشترك والمغطي لمدة دقيقة واحدة من خلال تشديد خيوط الحرير. أدرجت الفئران فقط، والتي تم تخفيض إشارة LDF إلى <10٪ من إشارة خط الأساس في الدراسة. بعد إعادة فتح على حد سواء في التقييم القطري المشترك، بدأ دقيقة ضخه فترة خمس سنوات. بواسطة LDF كانت تتمتع فيه ضخه كاملة. تم استبعاد الحيوانات مع ضخه ناقصة (أي استرداد <90٪ من الاتحاد البرازيلي بالمقارنة مع خط الأساس البرازيلي). وقد تكرر تسلسل دقيقة واحدة من BCCAO وخمس دقائق من ضخه مرتين ليصبح المجموع BCCAO duratiيظهر على من 3 دقائق. الشكل 1 الاتحاد البرازيلي يعني بالطبع تم الحصول عليها من عشر تسجيلات LDF خلال BCCAO وضخه. أثناء الإجراء، فمن المستحسن للحفاظ على الرقبة الجرح الرطب باستخدام محلول ملحي.
- بعد ضخه الماضي، تم إزالة جميع الأنابيب والخيوط الجراحية وكذلك مسبار الالياف البصرية التي تعلق على الجمجمة، وخياطة الجروح ويدوكائين مرهم (Xylocain 2٪؛ استرا زينيكا محدودة، فيدل، ألمانيا) وتوضع بشكل متكرر على الجروح حسب الحاجة لل إدارة analgetic.
- تم نقل الفئران إلى ما قبل ساخنة (30 ° C) مربع الانتعاش (MediHEAT. PecoServives المحدودة بروف، كمبريا، المملكة المتحدة) حتى أنهم قد استعاد وعيه الكامل. بعد ذلك، أعيدت الفئران لأقفاص الحيوانات الخاصة بهم.
5. انسداد الشريان الدماغي الأوسط
- وكانت الفئران إعادة تخدير، تم إدخال مسبار درجة حرارة الجسم وتمركزت الفئران على وسادة التدفئة لفضح الجانب البطني من الرقبة. بعد ذلك، فإنها ثيحرث ثابتة كما هو موضح في قسم BCCAO.
- وقدم ضمد دائمة باستخدام طويل 7-0 خياطة الحرير حول اليسار CCA القريبة وتم سحب بلطف نحو caudally الموضوع باستخدام المشبك البعوض (الشكل 4).
- وقدم ضمد دائم آخر في جميع أنحاء اليسار الشريان السباتي الخارجي (ECA) وسحبت الخيط نحو الجانب الأيمن للحيوان (الشكل 4).
- وقد حشد بعناية النسيج الضام المحيطة ICA اليسرى والعصب تحت اللسان ورفع بلطف للحصول على لمحة عامة جيدة للدورة البعيدة من ICA. الانحناءات ICA اليسار إلى اليمين في حين أن الشريان الحنكي (PPA) يتبع مسار ICA الداني إلى اليمين (الشكل 4).
التعليق: هناك الشريان آخر الكشف عن هويته التي تستدير إلى اليمين في اتجاه والذيلية. هذا هو الشريان القذالي، الذي ينشأ بنسب مختلفة إما من التشعب CCA أو من العلاقات العامةجزء oximal من اللجنة الاقتصادية لأفريقيا (الشكل 4).
- وقدم حلقة خياطة فضفاضة حول ICA الداني باستخدام خيط الحرير 5-0.
- باستخدام المشبك الاوعية الدموية الدقيقة الصغيرة، كان ICA المغطي مؤقتا بشكل أقصى لل5-0 فضفاضة حلقة خياطة (الشكل 4).
- تم إجراء شق صغير في الجزء القاصي من التقييم القطري المشترك قبل التشعب CCA باستخدام مقص الاوعية الدموية الدقيقة (الشكل 4).
- وتخلل انتقاؤه حيدة سيليكون المغطاة في التقييم القطري المشترك عبر شق صغير وتوغلت في ICA حتى توقفت عند المشبك الاوعية الدموية الدقيقة (الشكل 4).
- تمت إزالة microclamp بعناية من ICA، بينما تقدمت حيدة أعمق في ICA حتى توقف (الشكل 4). تعليق: عند هذه النقطة، والوجه ملقط في اليد اليسرى حتى يتسنى لك لا لأنه عقد مثل القلم. وهذا يساعد على الاستيلاء على خيوط مع ملقط بسهولة أكبر.المشبك-قضيب الأوعية الدموية وينبغي أن تعقد في اليد اليمنى. قد يكون من الضروري لتشديد تقريبا فضفاض 5-0 خياطة حول ICA من أجل منع النزيف من الجانب شق.
- تم التعرف على المكان المحدد من طرف حيدة للتحقق مما إذا كانت متقدمة عليه في ICA وليس إلى المؤسسة العامة للتقاعد. إذا تم إدخال طرف حيدة في PPA الداني، كانت خيوط سحبها بلطف مرة أخرى فقط قبل ICA / PPA التشعب. جرت محاولة لدفع حيدة في ICA مرة أخرى، في حين سحب بلطف ICA الداني قليلا إلى الجانب الأيمن. من خلال القيام بذلك، وكان المسار الطبيعي للICA القاصي محاكاة مما يجعل من الأسهل للوصول إلى ICA.
- بعد أن تقدمت حيدة في ICA تماما تقريبا، تم تشديد فضفاضة 5-0 خياطة حلقة حول ICA الداني من أجل الاستمرار على خيوط في المكان. بعد ذلك، تم اختصار كل خيوط الحرير وتم تخييط الجرح الجلد.
- تم replen فقدان السوائل أثناء الجراحةished عن طريق حقن 1.0 مل من محلول ملحي الملكية الفكرية بعد ذلك، تم نقل الماوس إلى مربع الانتعاش قبل ساخنة حتى استعاد وعيه الكامل.
- لضخه، وكانت الفئران إعادة مخدرة وتمت إزالة حيدة بعد تخفيف بعناية خياطة الحرير 5-0 حول ICA الداني. بعد ذلك، تم تشديد خياطة 5-0 مرة أخرى بعناية من أجل منع النزيف.
- بعد التأكد من الارقاء كاملة، تم تخييط الجرح في الرقبة.
- تم تطبيق يدوكائين مرهم مرارا محليا على الجلد حسب الحاجة لتخفيف الألم وتم نقله الماوس إلى ما قبل ساخنة (30 ° C) مربع الانتعاش حتى استعاد وعيه الكامل.
- كما لوحظ وجود أول تلميح لإجراء MCAO ناجحة، وتدور عقارب الساعة للحيوان. وكان كميا شدة العجز الوظيفية باستخدام نقاط Bederson تعديل لالفئران 10. ووفقا لهذه النتيجة Bederson معدلة، عشرات العصبية نحنإعادة متدرج كما يلي: 0 (وظيفة السيارات العادية)، 1 (ثني الجذع من وforelimb المقابل عندما تم رفع الماوس من ذيله)، 2 (تحلق على الجانب المقابل عندما عقد الماوس عن طريق الذيل على سطح مستو، ولكن الطبيعي الموقف في بقية)، 3 (يميل إلى الجانب المقابل في بقية)، و 4 (لا النشاط الحركي العفوي أو ميتا).
6. BCCAO الشام جراحة
للحصول على إجراءات الشام BCCAO، كانت الفئران مخدرة لمدة إجراء PC الحقيقي BCCAO، تم حشد الغدد اللعاب وال CCA تعرضوا. ومن الأهمية بمكان أن التلاعب المباشر إلى الشرايين السباتية أو الأعصاب المبهم يتم تجنبها أثناء إجراء الشام. يمكن التلاعب التقييم القطري المشترك تلف طبقة لها البطانية، التي يمكن أن تؤدي إلى الإفراج عن المركبات فعال في الأوعية من البطانة أو لحث على تخثر المحلية داخل التجويف الشرياني. ونتيجة لذلك، قد تحدث أحداث الانصمام الخثاري بعد الجراحة الشام. وهذا من شأنه أن يكون confounder الرئيسية من الالإجراء الإلكترونية. من ناحية أخرى، التلاعب في الأعصاب المبهم قد يؤدي إلى خلل وظيفي عابر أو دائم في العصب السمبتاوي نظام، الذي لديه القدرة لحدوث عدم انتظام ضربات القلب أو السكتة القلبية كبيرة حتى لا رجعة فيه. لذا، فمن الأهمية بمكان لتجنب أي تلاعب في الأعصاب المبهم خلال BCCAO.
إجراءات ما بعد الجراحة
7. احتشاء قياسات الحجم
لتقييم أحجام احتشاء، نجا الفئران لمدة 72 ساعة بعد MCAO. بعد ذلك كانت الحيوانات تخدير عميق، أزيلت العقول، والمفاجئة مجمدة في methylbutan، مقطوع وملطخة الهيماتوكسيلين (باستخدام بروتوكول Papanicolau لل) لقياس حجم احتشاء. تم جمع أقسام الدماغ في 600 ميكرون فترات وأحجام احتشاء كانوا مصممين باستخدام محلل الصورة (MCID الأساسية 7.0 Rev.2.0، GE للرعاية الصحية شلالات المؤتمر الوطني العراقي) وتصحيح للذمة وفقا لأسلوب لين وآخرون. 7،11 .
8. معايير الاشتمال
نحن وشملت الحيوانات الوحيدة التي لديها الحد البرازيلي LDF قياسها بأكثر من 90٪ خلال كل من الحلقات BCCAO ثلاثة. ومن الناحية المثالية، والرصد LDF ينبغي أن يؤديها في كل من نصفي الكرة المخية أثناء BCCAO. للالعملي، أجرينا الرصد LDF فقط في نصفي الكرة الأرضية اليسرى، التي ستخضع لMCAO في وقت لاحق. وقد وصفت هذا التوجه من قبل 6،12. كان مطلوبا ضخه بعد كل حلقة BCCAO أن تكون كاملة (أي العودة إلى القيم الأساسية). لأسباب من تقليل الوقت بقيت الفئران المدة تحت التخدير، لم نكن رصد الاتحاد البرازيلي أثناء الجراحة MCAO. في دراسة رائدة مع مجموعة منفصلة من الحيوانات ومع ذلك، فإننا رصدها من قبل الاتحاد البرازيلي LDF أثناء الجراحة MCAO. في هذه المجموعة من الفئران، وقمنا بقياس باستمرار انخفاض في الاتحاد البرازيلي بنسبة 90٪ بالمقارنة مع خط الأساس قبل CCA انسداد. بالإضافة إلى ذلك، بعد إزالة المجذوذه البرازيلي تعافى ل> 90٪ من كلقيم خط الأساس بعد CCA انسداد. وضعت هذه المعايير LDF في الأدب ونتيجة احتشاء في أحجام متناسقة 7. أدرجنا فقط الحيوانات التي لديها درجة من Bederson على الأقل من 1 بعد التعافي من التخدير بعد MCAO. وعلاوة على ذلك، أظهرت الحيوانات الوحيدة التي نجت لمدة 72 ساعة بعد MCAO والتي لم تدرج علامات نزف داخل الجمجمة في الدراسة.