يوصف وسيلة فعالة لعزل الخلايا الليمفاوية من الجهاز التناسلي الماوس. هذه الطريقة يستفيد من إنزيم الهضم وPercoll الفصل المتدرج للسماح العزلة الفعالة. هذا الأسلوب هو أيضا قابلة للتكيف مع لاستخدامها في الأنواع الأخرى
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
عزل الخلايا اللمفاوية من المسالك التناسلية الماوس الغشاء المخاطي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
المخاطية الأسطح، بما في ذلك توفير في مساحات الجهاز الهضمي، البولي التناسلي، والجهاز التنفسي بوابات لدخول مسببات الأمراض، مثل الفيروسات والبكتيريا 1. المخاطية هي أيضا مواقع الاستقرائي في البلد المضيف لتوليد مناعة ضد مسببات الأمراض، مثل بقع Peyers في الأمعاء والأنسجة الأنفية المرتبطة اللمفي في الجهاز التنفسي. هذه الميزة الفريدة يجلب حصانة كلاعب حاسم للمضيف نظام الدفاع. وقد تركزت العديد من الدراسات على مواقع المخاطية المعوية وأمراض الجهاز التنفسي. ومع ذلك، كان هناك القليل من المواقع التحقيق المخاطية الإنجابية. المسالك التناسلية الغشاء المخاطي هو موقع العدوى الأولية للأمراض المنقولة جنسيا (STD)، بما في ذلك الالتهابات البكتيرية والفيروسية. الأمراض المنقولة جنسيا هي واحدة من التحديات الصحية الأكثر أهمية التي تواجه العالم اليوم. مراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها يقدر أن هناك 19 مليون حالة جديدة كل عام المعدية في الولايات المتحدة. STتكلف DS في نظام الرعاية الصحية الامريكي 17 مليار دولار سنويا 2، والأفراد أكثر تكلفة حتى في العواقب الصحية المباشرة والحياة طويلة. لمواجهة هذا التحدي، هناك حاجة إلى فهم أكبر للحصانة الإنجابية وعزل الخلايا الليمفاوية هو عنصر أساسي من هذه الدراسات. هنا، نقدم طريقة لعزل الخلايا الليمفاوية من بتكاثر الفئران مساحات الأعضاء التناسلية للإناث للدراسات المناعية التي يمكن تعديلها لالتأقلم مع الأنواع الأخرى. ويستند الأسلوب هو موضح أدناه الماوس على أحد.
البروتوكول
1. إزالة الجهاز التناسلي
- الموت ببطء الماوس باستخدام المبادئ التوجيهية المعتمدة. جعل شق خط الوسط منخفضة وسحب الجلد.
- عزل وإزالة الجهاز التناسلي كله، من قناة البيض إلى فتحة المهبل.
- فتح المسالك كامل طوليا مع المقص.
- قطع الجهاز التناسلي مع مقص جراحي غرامة الى قطع صغيرة (حوالي <1MM) في طبق بتري مع RPMI-10/EDTA كاملة (انظر الصيغة أدناه)، وتحريك الأنسجة في قارورة 125 مل في درجة حرارة الغرفة على النما....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في هذا البروتوكول، فإنه يظهر كيفية تحضير الخلايا الليمفاوية من مساحات الماوس التناسلية ويتقن بسهولة. نقطة أهم من هذه العملية هو الحفاظ على بقاء الخلية عن طريق الحفاظ على الخلايا على الجليد. العائد من الخلية هذا الأسلوب يعتمد على التقنية، التعامل مع المهارات، ووضع المعدية من الفأرة (السذاجة أو يوم بعد الإصابة)، والممرض (البكتيرية والفيروسية الفطرية،) وقسم من النظر فيه الفئران الجهاز التناسلي (قناة البيض والرحم، الجزء المهبلي أو الجهاز التناسلي بأكمله). لقد نشرت مجموعتنا وغيرها الدر.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
نود أن نشكر NIH للحصول على منح التمويل R01-AI026328 (KAK) وR01-AI079004 (KAK).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم | شركة | كتالوج رقم | |
| كولاجيناز | سيغما العلوم الحياتية | C2139-1G | |
| Percoll | GE للرعاية الصحية العلوم البيولوجية | 17-0891-01 | |
| RPMI1640 | Gibco بواسطة تقنيات الحياة | 11875 |
المراجع
- M, The impact of perinatal immune development on mucosal homeostasis and chronic inflammation. Nat. Rev Immunol. 12, 9-23 (2011).
- Centers for Disease Control and Prevention. 2010 Sexually Transmitted Diseases Surveillance. , Centers for Disease Control and Prevention. (2010).
- Jain, S., P....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
