وقد تم الاعتراف الخلايا النجمية لتكون خلايا تنوعا المشاركة في العمليات البيولوجية الأساسية التي لا غنى عنها لنمو الدماغ الطبيعي وظيفة، ووسط إصلاح الجهاز العصبي. هنا نقدم إجراء سريع للحصول على الثقافات نقية نجمية الماوس لدراسة علم الأحياء من هذه الفئة الرئيسية من خلايا الجهاز العصبي المركزي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
العزلة وثقافة الخلايا النجمية الماوس القشرية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الخلايا النجمية هي نوع من الخلايا وفرة في أدمغة الثدييات، ولكن لا يزال هناك الكثير الذي يمكن تعلمه عن خصائصها الجزيئية والوظيفية. في أنظمة نجمية المختبر زراعة الخلايا يمكن استخدامها في دراسة الوظائف البيولوجية لهذه الخلايا الدبقية بالتفصيل. هذا البروتوكول الفيديو يوضح كيفية الحصول على الخلايا النجمية نقية من العزلة والثقافة من الخلايا القشرية مختلطة من الجراء الماوس. وتستند هذه الطريقة على عدم وجود الخلايا العصبية قابلة للحياة وفصل oligodendrocytes قد، والخلايا النجمية الخلايا الدبقية الصغيرة، والثلاثة الرئيسية من السكان الخلية الدبقية في الجهاز العصبي المركزي، في الثقافة. صور ممثل خلال الأيام الأولى للثقافة إثبات وجود السكان الخلية المختلطة وبيان timepoint، عندما تصبح الخلايا النجمية متكدسة ويجب أن يتم فصل الخلايا الدبقية الصغيرة من و oligodendrocytes. وعلاوة على ذلك، علينا أن نبرهن النقاء ومورفولوجيا الخلايا النجمية من نجمي مثقف باستخدام stainings immunocytochemical لراسخة ووصف علامات نجمية حديثا. ويمكن هذا النظام الثقافة استخدامها بسهولة للحصول على الخلايا النجمية الماوس نقية والمتوسطة نجمية مكيفة لدراسة مختلف جوانب البيولوجيا نجمية.
المقدمة
الخلايا النجمية هي نوع من الخلايا وفيرة جدا في الجهاز العصبي المركزي (CNS). نسبة الخلايا النجمية لالخلايا العصبية هو 01:03 في القشرة من الفئران والجرذان، في حين هناك 1.4 الخلايا النجمية في الخلايا العصبية في القشرة الإنسان 1. وقد زاد الاهتمام في وظيفة الخلايا النجمية بشكل كبير في السنوات الأخيرة. إحدى الوظائف الرئيسية للالنجمية هو دورها في توفير الدعم الهيكلي والتمثيل الغذائي للخلايا العصبية 2،3. الأدوار المكتشفة حديثا عن الخلايا النجمية تغطي طيف واسع من الوظائف. وتشمل هذه الهجرة من توجيه محاور عصبية النامية وneuroblasts معينة خلال التنمية 4-6، وظائف في انتقال متشابك، المشبك القوة ومعالجة المعلو....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. العزلة وتصفيح من الخلايا القشرية المختلطة
لا يمكن أن يؤديها مختلطة العزلة الخلية القشرية للثقافات نجمية باستخدام الماوس الجراء P1 إلى P4. من أجل تحقيق كثافة نجمية السليم لا بد من استخدام الماوس القشور 4 الجرو في قارورة T75 الأنسجة الثقافة. لذلك، يتم حساب وحدات التخزين في البروتوكول التالي لإعداد الخلية باستخدام الماوس الجراء 4.
- قبل البدء في إجراء تشريح، prewarm 30 مل من وسائل الإعلام الثقافة نجمية (DMEM، ارتفاع نسبة الجلوكوز + 10٪ للحرارة المعطل الجنين المصل البقري + ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
على العزلة من مخ الفأر كاملة (الشكل 1A)، والمخيخ المصابيح حاسة الشم لا بد من إزالة (1B الشكل). ومقشر والقشور من الفأرة جذع الدماغ (الشكل 1C) والسحايا من القشرة الفردية (1D الشكل ') تتم إزالة بعناية (الشكل 1E). السحايا واضحة من قبل النظام الشريان السحائي والنتائج غير كاملة في إزالة التلوث من ثقافة نجمية النهائي من قبل خلايا السحائي والخلايا الليفية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وتستند هذه الطريقة المذكورة هنا على إعداد ثقافة نجمية من أدمغة القوارض حديثي الولادة، وصفت في الأصل من قبل مكارثي وVellis دي في عام 1980 27. طريقة معدلة من العزلة وثقافة الخلايا النجمية القشرية من الدماغ إلى ما بعد الولادة P1 الماوس P4 المقدمة هنا هو سريع، والمحاصيل الخلايا النجمية الأساسية نقية وغير قابلة للتكرار للغاية. يمكن بسهولة نقل هذه التقنية أن الخلايا النجمية لعزل من الأنواع الأخرى، مثل الفئران أو من الخنازير ومن مناطق الدماغ الأخرى، مثل النخاع الشوكي. في حين ن.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
بدعم من زمالة دراسات عليا Fazit مؤسسة لSS، والوزارة الاتحادية للتعليم والبحث العلمي (BMBF 01 EO 0803) لKB والمفوضية الأوروبية FP7-المنح PIRG08 GA-2010-276989، NEUREX، ومؤسسة البحوث الألمانية المنح SCHA 1442 / 3-1 لCS الكتاب ليس لديهم مصالح متضاربة المالية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم العمل الحل | شركة | كتالوج رقم | تركيز النهائي |
| وسائل الإعلام الثقافة نجمية | |||
| DMEM، ارتفاع نسبة الجلوكوز | الحياة تكنولوجيز | 31966-021 | |
| FBS، للحرارة المعطل | الحياة تكنولوجيز | 10082-147 | تركيز النهائي: 10٪ |
| البنسلين الستربتوميسين | الحياة تكنولوجيز | 15140-122 | تركيز النهائي: 1٪ |
| حل لحفر أنسجة المخestion | |||
| HBSS | الحياة تكنولوجيز | 14170-088 | |
| 2.5٪ التربسين | الحياة تكنولوجيز | 15090-046 | تركيز النهائي: 0.25٪ |
| آخر | |||
| 70٪ (المجلد / المجلد) الإيثانول | روث | 9065،2 | |
| بولي يسين-D- | ميليبور | A-003-E | 50 ميكروغرام / مل |
| ماء | PAA | S15-012 | خلية ثقافة الصف |
| PBS | PAA | H15-002 | خلية ثقافة الصف |
| حاول 0.05٪psin-EDTA | الحياة تكنولوجيز | 25300-062 | |
| 0،45 ميكرون تصفية العقيمة | سارتوريوس | 16555 | |
| طبق بتري 3،5 سم | BD الصقر | 353001 | |
| 15 مل أنبوب فالكون | BD الصقر | 352096 | |
| 50 مل فالكون الأنبوب | BD الصقر | 352070 | |
| 75 سم زراعة الأنسجة قارورة 2 | BD الصقر | 353136 | |
| ملقط، ودفع غرامة | دومون | 2-1032؛ 2-1033 | # 3C؛ # 5 |
| ملقط، تلميح شقة | KLS مارتن | 12-120-11 | |
| 13 سم مقص جراحي | Aesculap | BC-140-R | |
| Stereomicroscope | لايكا | MZ7.5 | |
| Stereomicroscope + كاميرا | لايكا | MZ16F؛ DFC320 | |
| المجهر + كاميرا | زايس؛ كانون | بريمو فير؛ POWERSHOT A650 IS | |
| نبذ | إيبندورف | 5805000.017 | Centrifuge5804R |
| شاكر المداري | الحرارية العلمية | SHKE 4450-1CE | MaxQ 4450 |
| ماء الحمام | Julabo | SW20؛ 37 ° C |
المراجع
- Nedergaard, M., Ransom, B., Goldman, S. A. New roles for astrocytes: redefining the functional architecture of the brain. Trends Neurosci. 26, 523-530 (2003).
- Belanger, M., Allaman, I., Magistretti, P. J. Brain energy metabolism: focus on astrocyte-neuron metabol....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
