يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

العزلة وثقافة الخلايا النجمية الماوس القشرية

94.7K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/50079

⸱

يناير 19, 2013

 ,  ,  , 
1Institute of Anatomy and Cell Biology, University of Freiburg , 2Centre of Chronic Immunodeficiency (CCI), University Medical Centre Freiburg, University of Freiburg

في هذه المقالة

ملخص

وقد تم الاعتراف الخلايا النجمية لتكون خلايا تنوعا المشاركة في العمليات البيولوجية الأساسية التي لا غنى عنها لنمو الدماغ الطبيعي وظيفة، ووسط إصلاح الجهاز العصبي. هنا نقدم إجراء سريع للحصول على الثقافات نقية نجمية الماوس لدراسة علم الأحياء من هذه الفئة الرئيسية من خلايا الجهاز العصبي المركزي.

الملخص

الخلايا النجمية هي نوع من الخلايا وفرة في أدمغة الثدييات، ولكن لا يزال هناك الكثير الذي يمكن تعلمه عن خصائصها الجزيئية والوظيفية. في أنظمة نجمية المختبر زراعة الخلايا يمكن استخدامها في دراسة الوظائف البيولوجية لهذه الخلايا الدبقية بالتفصيل. هذا البروتوكول الفيديو يوضح كيفية الحصول على الخلايا النجمية نقية من العزلة والثقافة من الخلايا القشرية مختلطة من الجراء الماوس. وتستند هذه الطريقة على عدم وجود الخلايا العصبية قابلة للحياة وفصل oligodendrocytes قد، والخلايا النجمية الخلايا الدبقية الصغيرة، والثلاثة الرئيسية من السكان الخلية الدبقية في الجهاز العصبي المركزي، في الثقافة. صور ممثل خلال الأيام الأولى للثقافة إثبات وجود السكان الخلية المختلطة وبيان timepoint، عندما تصبح الخلايا النجمية متكدسة ويجب أن يتم فصل الخلايا الدبقية الصغيرة من و oligodendrocytes. وعلاوة على ذلك، علينا أن نبرهن النقاء ومورفولوجيا الخلايا النجمية من نجمي مثقف باستخدام stainings immunocytochemical لراسخة ووصف علامات نجمية حديثا. ويمكن هذا النظام الثقافة استخدامها بسهولة للحصول على الخلايا النجمية الماوس نقية والمتوسطة نجمية مكيفة لدراسة مختلف جوانب البيولوجيا نجمية.

المقدمة

الخلايا النجمية هي نوع من الخلايا وفيرة جدا في الجهاز العصبي المركزي (CNS). نسبة الخلايا النجمية لالخلايا العصبية هو 01:03 في القشرة من الفئران والجرذان، في حين هناك 1.4 الخلايا النجمية في الخلايا العصبية في القشرة الإنسان 1. وقد زاد الاهتمام في وظيفة الخلايا النجمية بشكل كبير في السنوات الأخيرة. إحدى الوظائف الرئيسية للالنجمية هو دورها في توفير الدعم الهيكلي والتمثيل الغذائي للخلايا العصبية 2،3. الأدوار المكتشفة حديثا عن الخلايا النجمية تغطي طيف واسع من الوظائف. وتشمل هذه الهجرة من توجيه محاور عصبية النامية وneuroblasts معينة خلال التنمية 4-6، وظائف في انتقال متشابك، المشبك القوة ومعالجة المعلومات من قبل الدوائر العصبية 7-9، في أدوار حاجز الدم في الدماغ (BBB) ​​تشكيل (10) وسلامة 11-13 وتنظيم ال 14 لهجة الدماغية. ميزة أخرى كبيرة من الخلايا النجمية هو استجابتها للإصابة. تحت astrocyt الحالات المرضيةأصبح وفاق رد الفعل وupregulate مزيد من التعبير عن البروتين المتوسطة الدبقية خيوط لييفي الحمضية (GFAP) والمثبطة البروتينات خارج الخلية المصفوفة (ECM) 15،16. الخلايا النجمية على رد الفعل ترسيم موقع الإصابة من الأنسجة السليمة من خلال تشكيل ندبة الدبقية، التي تتكون بشكل رئيسي من البروتينات نجمية ECM يفرز من عائلة كبريتات شوندروتن (CSPG) بروتيوغليكان، العوامل الرئيسية التي تحول دون تجدد المحاور بعد إصابة الجهاز العصبي المركزي 15-17.

الخلايا النجمية تنشأ من الخلايا الشعاعية (RG) الدبقية خلال مرحلة التطور الجنيني في وقت متأخر بعد الولادة والحياة في وقت مبكر. بعد تحديد نجمية حدث والسلائف نجمية الهجرة إلى مواقعها النهائية، حيث تبدأ عملية التمايز النهائي. في الجسم الحي، ويبدو أن الخلايا النجمية تكون ناضجة ثلاثة إلى أربعة أسابيع بعد الولادة كما أشارت إلى ذلك التشكل على 18،19 نموذجية. جزء من السكان من الخلايا النجمية RG تحويلها إلى منطقة subventricular (نوع B الخلايا). Bأوراسكوم تليكوم القابضة، والخلايا B RG نوع وظيفة ونجمية مثل الخلايا الجذعية العصبية (NSCs) خلال التنمية وفي البالغين، على التوالي. مثل RG، الخلايا النجمية والخلايا B نوع أيضا تعبر عن نقل الغلوتامات نجمية محددة (GLAST) والدماغ الدهون ملزم البروتين (BLBP)، وGFAP، مشيرا إلى أن هذه العلامات لا يمكن أن تستخدم حصرا لتسمية الخلايا النجمية على وجه التحديد الكبار. وعلى النقيض من الخلايا النجمية متني الكبار، التي لا تفرق في RG صحية والدماغ والخلايا B نوع المعرض الجذعية المحتملة الخلية مثل القدرة على تجديد الذات. وقد تورط dysregulation من الخلايا النجمية في العديد من الأمراض، بما في ذلك مرض الزهايمر 20،21، مرض هنتنغتون 22، مرض باركنسون 23، متلازمة ريت 24 و المرض الإسكندر 25. وعلاوة على ذلك، الخلايا النجمية الرد على جميع الإهانات من CNS، مما يؤدي إلى تنشيط الخلايا النجمية ونجمي تشكيل ندبة الدبقية 16،26. ندبة الدبقية التي تشكل نجمي التالية TR الدماغويعتقد أوما أو اصابات الحبل الشوكي لتكون حاجزا منع تجديد الخلايا العصبية الوزراء 15.

وقد تم تطوير طرق موثوقة لعزل السكان والحفاظ على تنقية الخلايا ضرورية لفهمنا للجهاز العصبي. العمل الرائد من قبل مكارثي وتمكن المحققون دي Vellis حتى الآن لإعداد الثقافات نقية تقريبا من الخلايا النجمية من الأنسجة الفئران حديثي الولادة 27. وقد تعلمت الكثير عن علم الأحياء نجمية باستخدام هذا الأسلوب، الذي يقدم هنا في شكل معدل قليلا لعزل الخلايا النجمية الماوس القشرية. استكمال الدراسات المجراة في، الخلايا النجمية وكذلك المتوسطة مكيفة تم الحصول عليها باستخدام وصفها في الثقافة المختبر، هي أدوات قيمة للحصول على مزيد من نظرة ثاقبة وظائف نجمية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. العزلة وتصفيح من الخلايا القشرية المختلطة

لا يمكن أن يؤديها مختلطة العزلة الخلية القشرية للثقافات نجمية باستخدام الماوس الجراء P1 إلى P4. من أجل تحقيق كثافة نجمية السليم لا بد من استخدام الماوس القشور 4 الجرو في قارورة T75 الأنسجة الثقافة. لذلك، يتم حساب وحدات التخزين في البروتوكول التالي لإعداد الخلية باستخدام الماوس الجراء 4.

  1. قبل البدء في إجراء تشريح، prewarm 30 مل من وسائل الإعلام الثقافة نجمية (DMEM، ارتفاع نسبة الجلوكوز + 10٪ للحرارة المعطل الجنين المصل البقري + 1٪ البنسلين / الستربتوميسين، انظر الجدول) إلى 37 ° C. معطف T75 1 قارورة مع 20 مل من بولي-D-يسين (PDL) في تركيز 50 ميكروغرام / مل في الماء لزراعة الخلايا الصف 1 ساعة عند 37 درجة مئوية في الحاضنة 2 CO.
  2. لإجراء تشريح، وإعداد جميع الكواشف والمواد الضرورية. سوف تحتاج إلى: مقص جراحي، ملقط غرامة على نحو سلس، ملقط غيض شقة، مناشف ورقية، وحقيبة النفايات، والإيثانول 70٪ لد 2 الأطباق تشريح (3.5 سم القطر) على الجليد مليئة HBSS 2 مل لكل منهما.
  3. عقد بلطف ورذاذ الرأس والرقبة من الفأرة الجرو مع الايثانول 70٪. وضحى الحيوان بقطع الرأس باستخدام المقص.
  4. إجراء شق خط الوسط، لالأمامي الخلفي، جنبا إلى جنب فروة الرأس للكشف عن الجمجمة.
  5. قطع الجمجمة بعناية من الرقبة إلى الأنف. يتم تنفيذ اثنين من تخفيضات إضافية للسماح بالوصول إلى مزيد من الدماغ: ويتكون أول خفض المصابيح الأمامية لحاسة الشم، والآخر أدنى من المخيخ لقطع الجمجمة من قاعدة الجمجمة.
  6. باستخدام ملقط غيض شقة، وبلطف اللوحات الجمجمة انقلبت إلى الجانب ويتم أخذ الدماغ من وضعها في أول طبق تشريح مليئة HBSS. وضع الطبق مرة أخرى على الجليد ومواصلة حصد جميع العقول 4.
  7. يتم تنفيذ ما تبقى من إجراء تشريح تحت stereomicroscope. أولا، يتم إزالة المصابيح حاسة الشم والمخيخ باستخدام الغرامةتشريح ملقط (1B الشكل).
  8. من أجل استرداد القشور، والاستيلاء على نهاية الخلفي من الدماغ مع ملقط الغرامة، أداء شق خط الوسط بين نصفي الكرة الأرضية، اضافة الى وجود مجموعة ثانية من ملقط لإنشاء بستان وقشر بعيدا هيكل لوحة تشبه القشرة من الدماغ.
  9. تشريح بعناية السحايا من نصفي الكرة الأرضية القشرة عن طريق سحب الملقط مع غرامة (1D الشكل). هذه الخطوة تجنب تلوث ثقافة نجمية النهائي من قبل خلايا السحائي والخلايا الليفية. نقل الكرة الأرضية القشرة المعدة في طبق الثانية المملوءة HBSS وإعادته إلى الجليد. تواصل مع جميع القشور وفقا لذلك 4.
  10. وأخيرا، وقطع كل نصف الكرة القشرة إلى قطع صغيرة باستخدام شفرات حادة (حوالي 4 إلى 8 مرات).
  11. تحت ظروف معقمة، وقطع القشرة نقل إلى واحدة 50 مل أنبوب فالكون وإضافة إلى وحدة تخزين HBSS إجمالي قدره 22.5 مل.
  12. إضافة 2.5 مل من 2.5٪ المزيج، واحتضان التربسينالأنسجة في حمام مائي عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. مزيج من عرضية تهز كل 10 دقيقة.
  13. أجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 300 XG لقطع الأنسجة بيليه القشرة.
  14. إزالة بعناية طاف من الصفق. من أجل تجنب فقدان الأنسجة بيليه قد تحتفظ ميكانيكيا باستخدام الماصة ل. فصل الأنسجة في تعليق خلية واحدة بإضافة 10 مل المتوسطة الطلاء نجمية وpipetting قوية باستخدام ماصة 10 مل من البلاستيك حتى قطع الأنسجة هي فصل واحد في الخلايا (20 إلى 30 مرة). لضبط مستوى الصوت باستخدام 20 مل نجمية المتوسطة الطلاء. يمكنك دليل على تفكك النسيج إلى خلايا القشرة واحدة عن طريق عد باستخدام عدادة الكريات. ينبغي للمرء أن إعداد القشور الماوس 4 الجرو تسفر 10-15 X10 6 خلايا واحدة فصل.
  15. نضح PDL من القارورة الثقافة T75، لوحة للفصل التعليق خلية واحدة واحتضان عند 37 درجة مئوية في الحاضنة 2 CO.

2. الحصول على ENRنجمية الثقافة iched

  1. تغيير المتوسطة 2 بعد أيام من الطلاء خلايا القشرية المختلطة وجميع 3 أيام بعد ذلك.
  2. بعد 7 إلى 8 أيام، عندما الخلايا النجمية هي الخلايا الدبقية الصغيرة متكدسة وتتراكب الجلوس تعرض على طبقة أو نجمية هي بعيدة بالفعل من طبقة نجمية (الشكل 2)، هز قارورة T75 في 180 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة على شاكر المداري لإزالة الخلايا الدبقية الصغيرة. تجاهل طاف الخلايا الدبقية الصغيرة تحتوي على أو إذا كنت ترغب في دراسة الثقافة والخلايا الدبقية الصغيرة، وتدور عليه و28،29 وحة للثقافة.
  3. إضافة 20 مل الطازجة مستنبت نجمية والاستمرار عن طريق هز قارورة في 240 دورة في الدقيقة لمدة 6 ساعة لإزالة خلايا دبقية قليلة التغصن السلائف (OPC). منذ بعض لن يجد OPCs فصل تماما من طبقة نجمية، تواصل يهز بقوة باليد لمدة 1 دقيقة من أجل منع التلوث OPC. تجاهل طاف أو تدور عليه ولوحة، إذا كنت ترغب في الثقافة يجد OPCs 29.
  4. شطف conflue المتبقيةNT طبقة نجمية مرتين مع PBS، نضح في برنامج تلفزيوني، إضافة 5 مل التربسين EDTA واحتضان-في الحاضنة 2 CO في 37 ° C. تحقق مفرزة من الخلايا النجمية كل 5 دقائق وإنفاذ مفرزة من الخلايا النجمية من خلال ضرب القارورة ضد راحة يدك (2-3 مرات).
  5. بعد فصل الخلايا النجمية من القارورة الثقافة، إضافة 5 مل من مستنبت نجمية، وخلايا تدور في 180 XG لمدة 5 دقائق، نضح طاف وإضافة 40 مل الطازجة المتوسطة الطلاء نجمية. ينبغي للمرء أن زراعة الأنسجة قارورة T75 تسفر حول 1x10 6 خلايا بعد الانقسام الخلية الأولى. لوحة الخلايا في اثنين من قوارير الثقافة T75 واحتضان عند 37 درجة مئوية في الحاضنة 2 CO. تغيير المتوسطة كل يوم 2 إلى 3.
  6. ومطلي 12-14 يوما بعد انقسام الخلايا النجمية الأولى في الخلية المناسبة ساعة 24-48 تركيز قبل تنفيذ التجربة. ينبغي للمرء أن زراعة الأنسجة قارورة T75 تسفر حول 1،5-2 X10 6 خلايا بعد الانقسام الخلية الثانية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

على العزلة من مخ الفأر كاملة (الشكل 1A)، والمخيخ المصابيح حاسة الشم لا بد من إزالة (1B الشكل). ومقشر والقشور من الفأرة جذع الدماغ (الشكل 1C) والسحايا من القشرة الفردية (1D الشكل ') تتم إزالة بعناية (الشكل 1E). السحايا واضحة من قبل النظام الشريان السحائي والنتائج غير كاملة في إزالة التلوث من ثقافة نجمية النهائي من قبل خلايا السحائي والخلايا الليفية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وتستند هذه الطريقة المذكورة هنا على إعداد ثقافة نجمية من أدمغة القوارض حديثي الولادة، وصفت في الأصل من قبل مكارثي وVellis دي في عام 1980 27. طريقة معدلة من العزلة وثقافة الخلايا النجمية القشرية من الدماغ إلى ما بعد الولادة P1 الماوس P4 المقدمة هنا هو سريع، والمحاصيل الخلايا النجمية الأساسية نقية وغير قابلة للتكرار للغاية. يمكن بسهولة نقل هذه التقنية أن الخلايا النجمية لعزل من الأنواع الأخرى، مثل الفئران أو من الخنازير ومن مناطق الدماغ الأخرى، مثل النخاع الشوكي. في حين ن...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

بدعم من زمالة دراسات عليا Fazit مؤسسة لSS، والوزارة الاتحادية للتعليم والبحث العلمي (BMBF 01 EO 0803) لKB والمفوضية الأوروبية FP7-المنح PIRG08 GA-2010-276989، NEUREX، ومؤسسة البحوث الألمانية المنح SCHA 1442 / 3-1 لCS الكتاب ليس لديهم مصالح متضاربة المالية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
اسم العمل الحل شركة كتالوج رقم تركيز النهائي
وسائل الإعلام الثقافة نجمية
DMEM، ارتفاع نسبة الجلوكوز الحياة تكنولوجيز 31966-021
FBS، للحرارة المعطل الحياة تكنولوجيز 10082-147 تركيز النهائي: 10٪
البنسلين الستربتوميسين الحياة تكنولوجيز 15140-122 تركيز النهائي: 1٪
حل لحفر أنسجة المخestion
HBSS الحياة تكنولوجيز 14170-088
2.5٪ التربسين الحياة تكنولوجيز 15090-046 تركيز النهائي: 0.25٪
آخر
70٪ (المجلد / المجلد) الإيثانول روث 9065،2
بولي يسين-D- ميليبور A-003-E 50 ميكروغرام / مل
ماء PAA S15-012 خلية ثقافة الصف
PBS PAA H15-002 خلية ثقافة الصف
حاول 0.05٪psin-EDTA الحياة تكنولوجيز 25300-062
0،45 ميكرون تصفية العقيمة سارتوريوس 16555
طبق بتري 3،5 سم BD الصقر 353001
15 مل أنبوب فالكون BD الصقر 352096
50 مل فالكون الأنبوب BD الصقر 352070
75 سم زراعة الأنسجة قارورة 2 BD الصقر 353136
ملقط، ودفع غرامة دومون 2-1032؛ 2-1033 # 3C؛ # 5
ملقط، تلميح شقة KLS مارتن 12-120-11
13 سم مقص جراحي Aesculap BC-140-R
Stereomicroscope لايكا MZ7.5
Stereomicroscope + كاميرا لايكا MZ16F؛ DFC320
المجهر + كاميرا زايس؛ كانون بريمو فير؛ POWERSHOT A650 IS
نبذ إيبندورف 5805000.017 Centrifuge5804R
شاكر المداري الحرارية العلمية SHKE 4450-1CE MaxQ 4450
ماء الحمام Julabo SW20؛ 37 ° C

المراجع

  1. Nedergaard, M., Ransom, B., Goldman, S. A. New roles for astrocytes: redefining the functional architecture of the brain. Trends Neurosci. 26, 523-530 (2003).
  2. Belanger, M., Allaman, I., Magistretti, P. J. Brain energy metabolism: focus on astrocyte-neuron metabolic cooperation. Cell Metab. 14, 724-738 (2011).
  3. Allen, N. J., Barres, B. A. Neuroscience: Glia - more than just brain glue. Nature. 457, 675-677 (2009).
  4. Ballas, N., Lioy, D. T., Grunseich, C., Mandel, G. Non-cell autonomous influence of MeCP2-deficient glia on neuronal dendritic morphology. Nat. Neurosci. 12, 311-317 (2009).
  5. Jacobs, S., Nathwani, M., Doering, L. C. Fragile X astrocytes induce developmental delays in dendrite maturation and synaptic protein expression. BMC Neurosci. 11, 132(2010).
  6. Kaneko, N., et al. New neurons clear the path of astrocytic processes for their rapid migration in the adult brain. Neuron. 67, 213-223 (2010).
  7. Min, R., Nevian, T. Astrocyte signaling controls spike timing-dependent depression at neocortical synapses. Nat. Neurosci. , (2012).
  8. Eroglu, C., Barres, B. A. Regulation of synaptic connectivity by glia. Nature. 468, 223-231 (2010).
  9. Sasaki, T., Matsuki, N., Ikegaya, Y. Action-potential modulation during axonal conduction. Science. 331, 599-601 (2011).
  10. Bozoyan, L., Khlghatyan, J., Saghatelyan, A. Astrocytes control the development of the migration-promoting vasculature scaffold in the postnatal brain via VEGF signaling. J. Neurosci. 32, 1687-1704 Forthcoming.
  11. Alvarez, J. I., et al. The Hedgehog pathway promotes blood-brain barrier integrity and CNS immune quiescence. Science. 334, 1727-1731 (2011).
  12. Abbott, N. J., Ronnback, L., Hansson, E. Astrocyte-endothelial interactions at the blood-brain barrier. Nat. Rev. Neurosci. 7, 41-53 (2006).
  13. Tao-Cheng, J. H., Nagy, Z., Brightman, M. W. Tight junctions of brain endothelium in vitro are enhanced by astroglia. J. Neurosci. 7, 3293-3299 (1987).
  14. Gordon, G. R., Choi, H. B., Rungta, R. L., Ellis-Davies, G. C., MacVicar, B. A. Brain metabolism dictates the polarity of astrocyte control over arterioles. Nature. 456, 745-749 (2008).
  15. Silver, J., Miller, J. H. Regeneration beyond the glial scar. Nat. Rev. Neurosci. 5, 146-156 (2004).
  16. Schachtrup, C., Moan, N. L. e, Passino, M. A., Akassoglou, K. Hepatic stellate cells and astrocytes: Stars of scar formation and tissue repair. Cell Cycle. 10, 1764-1771 (2011).
  17. Schachtrup, C., et al. Fibrinogen triggers astrocyte scar formation by promoting the availability of active TGF-beta after vascular damage. J. Neurosci. 30, 5843-5854 (2010).
  18. Bushong, E. A., Martone, M. E., Jones, Y. Z., Ellisman, M. H. Protoplasmic astrocytes in CA1 stratum radiatum occupy separate anatomical domains. J. Neurosci. 22, 183-192 (2002).
  19. Ogata, K., Kosaka, T. Structural and quantitative analysis of astrocytes in the mouse hippocampus. Neuroscience. 113, 221-233 (2002).
  20. Dabir, D. V., et al. Impaired glutamate transport in a mouse model of tau pathology in astrocytes. J. Neuroscience. 26, 644-654 (2006).
  21. Wisniewski, H. M., Wegiel, J. Spatial relationships between astrocytes and classical plaque components. Neurobiol. Aging. 12, 593-600 (1991).
  22. Shin, J. Y., et al. Expression of mutant huntingtin in glial cells contributes to neuronal excitotoxicity. J. Cell Biol. 171, 1001-1012 (2005).
  23. Wakabayashi, K., Hayashi, S., Yoshimoto, M., Kudo, H., Takahashi, H. NACP/alpha-synuclein-positive filamentous inclusions in astrocytes and oligodendrocytes of Parkinson's disease brains. Acta Neuropathol. 99, 14-20 (2000).
  24. Lioy, D. T., et al. A role for glia in the progression of Rett's syndrome. Nature. 475, 497-500 (2011).
  25. Quinlan, R. A., Brenner, M., Goldman, J. E., Messing, A. GFAP and its role in Alexander disease. Exp. Cell Res. 313, 2077-2087 (2007).
  26. Beck, K., Schachtrup, C. Vascular damage in the central nervous system: a multifaceted role for vascular-derived TGF-beta. Cell Tissue Res. 347, 187-201 (2012).
  27. McCarthy, K. D., de Vellis, J. Preparation of separate astroglial and oligodendroglial cell cultures from rat cerebral tissue. J. Cell Biol. 85, 890-902 (1980).
  28. Siao, C. J., Tsirka, S. E. Tissue plasminogen activator mediates microglial activation via its finger domain through annexin II. J. Neurosci. 22, 3352-3358 (2002).
  29. Armstrong, R. C. Isolation and characterization of immature oligodendrocyte lineage cells. Methods. 16, 282-292 (1998).
  30. Cahoy, J. D., et al. A transcriptome database for astrocytes, neurons, and oligodendrocytes: a new resource for understanding brain development and function. J. Neurosci. 28, 264-278 (2008).
  31. Anthony, T. E., Heintz, N. The folate metabolic enzyme ALDH1L1 is restricted to the midline of the early CNS, suggesting a role in human neural tube defects. J. Comp. Neurol. 500, 368-383 (2007).
  32. Skoff, R. P., Knapp, P. E. Division of astroblasts and oligodendroblasts in postnatal rodent brain: evidence for separate astrocyte and oligodendrocyte lineages. Glia. 4, 165-174 (1991).
  33. Molofsky, A. V., et al. Astrocytes and disease: a neurodevelopmental perspective. Genes Dev. 26, 891-907 (2012).
  34. Zhang, Y., Barres, B. A. Astrocyte heterogeneity: an underappreciated topic in neurobiology. Curr. Opin. Neurobiol. 20, 588-594 (2010).
  35. Foo, L. C., et al. Development of a method for the purification and culture of rodent astrocytes. Neuron. 71, 799-811 (2011).
  36. Jungblut, M., et al. Isolation and characterization of living primary astroglial cells using the new GLAST-specific monoclonal antibody ACSA-1. Glia. 60, 894-907 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

عزل الخلايا النجميةزراعة الخلاياتفكيك الأنسجةالرج المداريالصبغ الكيمياء نسيجية المناعيةمؤشرات الخلايا النجميةالخلايا القشرية المختلطةزراعة الخلايا الأوليةفصل الخلايا الدبقية
العزلة وثقافة الخلايا النجمية الماوس القشرية
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.