وقد اكتسب تتبع من الخلايا باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي اهتمام ملحوظا في السنوات الماضية. يصف هذا البروتوكول بوضع العلامات على الخلايا الجذعية مع الفلور ( 19 جزيئات F) الغنية، وتطبيق في الجسم الحي من هذه الخلايا، ورصد مدى هجرتهم إلى العقدة الليمفاوية استنزاف مع 19 F / 1 H التصوير بالرنين المغناطيسي و 19 F MRS.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
التقدم المستمر في طرائق التصوير موسع مثل التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) قد تحسنت بشكل كبير قدرتنا على دراسة العمليات الفيزيولوجية المرضية أو في الكائنات الحية. التصوير بالرنين المغناطيسي يثبت أيضا أن يكون أداة قيمة لالتقاط الخلايا التي تم زرعها في الجسم الحي. استراتيجيات التوسيم الخلية الأولي للتصوير بالرنين المغناطيسي استخدام مصنوعة من عوامل التباين التي تؤثر في اوقات الاسترخاء MR (T1، T2، T2 *) ويؤدي إلى تعزيز (T1) أو نضوب (T2 *) من إشارة حيث الخلايا المسمى موجودة. T2 * وكلاء تعزيز مثل الصغر وكلاء أكسيد الحديد (USPIO) وقد استخدمت لدراسة الهجرة الخلية والبعض أيضا قد وافقت عليه ادارة الاغذية والعقاقير لالتطبيق السريري. والعيب من T2 * وكلاء هو صعوبة التمييز بين الانقراض إشارة إنشاؤها بواسطة الخلايا المسمى من التحف الأخرى مثل جلطات الدم، نزيف الدقيقة أو فقاعات الهواء. في هذه المقالة، ونحن تصف تقنية ناشئة لخلايا الجسم الحي تتبع في ذلكويستند على وصفها الخلايا مع الفلور (F 19) الغنية الجسيمات. وتعد هذه الجسيمات عن طريق الاستحلاب المشبعة (PFC) مركبات وتستخدم بعد ذلك إلى خلايا التسمية، التي لاحقا يمكن تصوير بنسبة 19 F التصوير بالرنين المغناطيسي. مزايا هامة من الهيدروكربون المشبع بالفلور لتتبع خلية في الجسم الحي ما يلي: (ط) عدم وجود الكربون محدد 19 F في الجسم الحي والتي ينتج عنها بعد ذلك خالية من الصور الخلفية وكاملة خلية selectivityand (II) إمكانية لقياس إشارة الخلية بنسبة 19 F MR الطيفي .
المقدمة
تتبع من الخلايا في الجسم الحي هو جانب هام في عدة مجالات الطب الحيوي. لهذا، وتقنيات التصوير موسع التي يمكن توطين بشكل انتقائي خلايا على مدى فترة من الوقت هي قيمة للغاية. قبل وضع ثلاثي الأبعاد التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI)، تتبع هجرة الخلايا المناعية اقتصر على التحليلات المجهرية أو الخزعات النسيجية. وقد اكتسب تتبع الخلية بمساعدة التصوير بالرنين المغناطيسي الاهتمام هائلة في السنوات القليلة الماضية، ليس فقط بالنسبة للمناعة دراسة سلوك الخلايا المناعية في الجسم الحي، ولكن أيضا للباحثين الخلية الجذعية السريرية و. خلال منتصف 90s، أولى الدراسات على أكسيد الحديد النانوية 1 شرعت في سلسلة من التطورات لخلايا ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
يجب الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية من قبل لجنة رعاية الحيوان المؤسسية المحلية قبل التنفيذ. خلال قياسات MR مستوى كاف من التخدير والرصد الفسيولوجي (درجة حرارة الجسم ومعدل التنفس) هي المتطلبات التي لا غنى عنها.
1. جيل من الفأر نخاع العظام المستمدة من الخلايا الجذعية
- استخراج خلايا نخاع العظام من C57BL / 6 الفئران كما هو موضح سابقا 12. هذا البروتوكول يعود إلى عام 1992 13 و وصفت في الأصل من قبل مجموعة من رالف ستينمان M. (1943-2011)، مكتشف الخلي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ثمانية عشر إلى واحد وعشرين ساعة بعد تطبيق أدمي، 19 الخلايا الجذعية F-المسمى (DC) تهاجر إلى العقدة الليمفاوية المأبضية تجفيف. حركة DC عبر القنوات اللمفاوية في العقدة الليمفاوية politeal استنزاف يمكن أن يكون موضع تقدير من قبل تتراكب 1 H الصور التشريحية مع 19 F الصور DC (الشكل 2A). لقد ذكرت سابقا على الهجرة من هذه الخلايا في الجسم الحي، فضلا عن تأثير حجم 19 F-الجسيمات على DC البيولوجيا المناعية، بما في ذلك كفاءة ام.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هذه الطريقة في توظيف 19 F / 1 H التصوير بالرنين المغناطيسي لمتابعة حركة العاصمة إلى العقدة الليمفاوية يعطي الفرصة لدراسة أنماط هجرة الخلايا المناعية في الجسم الحي. الخلايا الجذعية هي أمثلة ممتازة للهجرة بسرعة الخلايا المناعية التي تكون قادرة على المناورة من خلال هياكل ثلاثية الأبعاد دون التقيد بإحكام على ركائز محددة 17. على الرغم من أن القرار المكانية منخفضة (مجموعة ميكرون) من تقنية وصفها ليست قابلة للمقارنة مع ما يمكن تحقيقه مع المجهري mu.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.
شكر وتقدير
وقد تم تمويل هذه الدراسة من قبل جمعية الألمانية للبحوث إلى SW (DFG WA 2804) ومنحة الجامعة لSW من مركز البحوث التجريبية والسريرية، وبالتعاون مع مركز ماكس للطب الجزيئي وشاريتيه في برلين كلية الطب ديلبروك. كان الممولين أي دور في تصميم الدراسة وجمع البيانات وتحليلها، قرار نشر أو إعداد المخطوطة. نشكر السيد روبرت يستفال للحصول على الدعم الفني خلال التدريب له في مختبرنا.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسم
الشركة
رقم فهرسي
التعليقات
< TD colspan = "4" >EQUIPMENT< / strong> نظام MR نظام استنشاق Isoflurane F & # 246 ؛
| RECODES< / strong> | |||
| C57BL / 6 فئران | تشارلز ريفر ، برلين | ||
|---|---|---|---|
| RPMI | Gibco | 21875-091 | |
| FBS Superior | Biochrom AG | S 0615 | |
| HEPES | Gibco-Invitrogen | 15630-056 | |
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| L-glutamine | Gibco | 25030-024 | |
| Dulbecco's PBS | Sigma Aldrich | D8662 | |
| PFA | Santa Cruz | sc-281692 | |
| Perfluoro-15-crown-5-ether | ChemPur | 391-1996 | |
| Pluronic F-68 | Sigma Aldrich | P5556 | |
| أطباق بتري (35 × 10 مم) | VWR ، ألمانيا | 391-1996 | |
| 27 & frac12; محاقن G | VWR ، ألمانيا | 612-0151 | |
| مصافي خلايا النايلون (100 مو ؛ م شبكة) | VWR ، ألمانيا | 734-0004 | |
| أنابيب الرنين المغناطيسي النووي | VWR ، ألمانيا | 634-0461 | |
| أدوات تشريح | FST | ||
| CO2< / sub> حاضنة | الموثق | ||
| للحيوانات الصغيرة | Bruker Biospin | 9.4T BioSpec 94/20 USR ، برنامج الاستحواذ والتجهيز ParaVision | |
| 1< / sup>H / 19< / sup>F ملف RF الحجم المزدوج القابل للضبط | Rapid Biomed ، W & # 252 ؛ رزبورغ ، ألمانيا | 35 مم القطر الداخلي ، 50 مم الطول | |
| < الطول > 19 < / sup>F لفائف التحليل الطيفي | لفائف الضبط / المطابقة في المنزل ، 4 لفات ، القطر الداخلي 5 مم ، 10 مم ، مكثفان لضبط ومطابقة | ||
| نظام مراقبة HR Medical Instruments GmbH | |||
| موديل 1025 | SA Instruments Inc. ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية | ||
المراجع
- Yeh, T. C., Zhang, W., Ildstad, S. T., Ho, C. In vivo dynamic MRI tracking of rat T-cells labeled with superparamagnetic iron-oxide particles. Magn. Reson. Med. 33 (2), 200-208 (1995).
- Weissleder, R., Cheng, H. C., Bogdanova, A., Bogdanov, A. Magnetic....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
