يوصف بروتوكول للدفعات المزمن من الجلوكوز وIntralipid في الفئران. هذا النموذج يمكن استخدامه لدراسة تأثير المغذيات الزائدة على وظيفة الجهاز والمعلمات الفسيولوجية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
فإنه يفترض التعرض المزمن لمستويات مفرطة من المغذيات تؤثر على وظيفة من عدة أعضاء وأنسجة والإسهام في تطوير العديد من المضاعفات المرتبطة بالسمنة ومتلازمة التمثيل الغذائي، بما في ذلك السكري من النوع 2. لدراسة الآليات التي مستويات مفرطة من الجلوكوز والأحماض الدهنية تؤثر على البنكرياس خلايا بيتا وإفراز الأنسولين، أنشأنا نموذجا ضخ المواد الغذائية المزمنة في الفئران. يتكون هذا الإجراء من القسطرة في الوريد الوداجي الأيمن والشريان السباتي الأيسر تحت التخدير العام، والسماح فترة النقاهة لمدة 7 أيام؛ ربط القسطرة إلى مضخات باستخدام قطب ونظام موازنة التي تمكن الحيوان من التحرك بحرية في القفص، وغرس الجلوكوز و / أو Intralipid (مستحلب زيت فول الصويا الذي يولد خليط من ما يقرب من 80٪ unsaturated/20٪ الأحماض الدهنية المشبعة عندما غرست مع الهيبارين) لمدة 72 ساعة. هذا النموذج يقدم عدة ADVANTAغيس، بما في ذلك إمكانية لتعديل ناعما المستويات المستهدفة لتعميم الجلوكوز والأحماض الدهنية، وخيار المشاركة في ضخ المركبات الدوائية، والإطار الزمني قصير نسبيا بالمقارنة مع النماذج الغذائية. ويمكن استخدامه لدراسة آليات الخلل الناجم عن المغذيات في مجموعة متنوعة من الأجهزة واختبار فعالية الأدوية في هذا السياق.
المقدمة
وقد اقترحت مستويات مرتفعة مزمنة من الجلوكوز والدهون في الدورة الدموية إلى المساهمة في التسبب في مرض السكري نوع 2 عن طريق تغيير وظيفة من عدة أجهزة المتورطين في الحفاظ على توازن الجلوكوز بما في ذلك، ولكن ليس على سبيل الحصر، والبنكرياس خلايا بيتا (مراجعة في 1). وتذهب فرضية أن glucotoxicity ارتفاع السكر في الدم المزمن يؤدي إلى تفاقم الخلل خلايا بيتا التي أدت إلى ارتفاع السكر في الدم في المقام الأول، وبالتالي خلق حلقة مفرغة، والمساهمة في تدهور السيطرة على مستويات الجلوكوز في نوع 2 مرضى السكري. وعلى نحو مماثل، يقترح فرضية glucolipotoxicity أن الارتفاعات ما يصاحب ذلك من مستويات الجلوكوز والدهون، وغالبا ما لوحظ في مرض السكري....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
لمحة عامة: الإجراء يتكون من القسطرة في الوريد الوداجي الأيمن والشريان السباتي الأيسر تحت التخدير العام، والسماح فترة النقاهة لمدة 7 أيام؛ ربط القسطرة إلى مضخات باستخدام قطب ونظام موازنة التي تمكن الحيوان من التحرك بحرية في القفص؛ وغرس الجلوكوز و / أو Intralipid (مستحلب زيت فول الصويا الذي يولد خليط من ما يقرب من 80٪ unsaturated/20٪ الأحماض الدهنية المشبعة عندما غرست مع الهيبارين 9) لمدة 72 ساعة.
1. Canulation من حبل الوريد الأيمن والشريان السباتي الأيسر
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
للخروج من سلسلة من 42 الفئران التي خضعت لعملية جراحية، قد فقدت 5 الفئران خلال فترة ما بعد الجراحة، وكان خسر 1 الفئران خلال التسريب، وهو ما يمثل نسبة النجاح الإجمالية 86٪. وكان متوسط وزن الجسم للفئران 37 التي تم غرست في نهاية المطاف 608 ± 5 ز قبل الجراحة و 588 ± 6 غرام عند الشروع في ضخ (يعني ± SE، ن = 37، P <0.0001 قبل الاقتران اختبار t). وقد تم الحصول على النتائج التالية ممثل في 2 مجموعات ضخ:. المالحة (SAL)، والجلوكوز + Intralipid (GLU + IL) أرقام 2A و
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
ورغم أن عددا من الدراسات السابقة قد استخدمت الحقن المزمن من الجلوكوز (مثلا 10-15) أو الدهون (مثل 16،17) في القوارض، على حد علمنا قد فقط تم الإبلاغ عن ضخ المؤتلفة لكل من الوقود في الفئران 18. نموذج التسريب المزمنة المقدمة هنا تقدم العديد من المزايا لدراسة الآثار المترتبة على فائض المواد الغذائية على مجموعة متنوعة من الوظائف البيولوجية في الفئران. الأول، أنها لا تنطوي على القوارض السمنة وراثيا، ومنذ السمنة شيوعا في البشر هو جينائي <.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
فنسنت Poitout هو المؤسس المشارك لوحصلت على عقود من الأبحاث Bêtagenex المحدودة، وهي منظمة بحثية العقد الذي يقدم النموذج التسريب المقدمة في هذه المقالة كخدمة تجارية.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة (R01DK58096 إلى فنسنت Poitout). فنسنت Poitout يحمل كرسي أبحاث كندا في مرض السكري والبنكرياس وظيفة خلايا بيتا. تلقى بدر Zarrouki زمالات ما بعد الدكتوراه من شركة ميرك وايلي ليلي. كان مدعوما من قبل FONTES Ghislaine زمالة ما بعد الدكتوراه من الرابطة الكندية للسكري.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| محلول ملحي 0.9٪ | دينار بحريني | JB1324 | |
| سكر العنب 70٪ | ماكيسون | ||
| إنترليبيد 20٪ | فريسينيوس كابي | JB6023 | |
| مبيد متريسيد (جلوتارالديهايد 2.6٪) | ميتريكس | 11-1401 | |
| هيبارين الصوديوم 10،000 USP u / ml | PPC | ||
| كاربروفين | ميتاكام | ||
| جليكوبيرولات | ساندوز | ||
| إيزوفلوران | أبوت | ||
| كلوهيكسيدين 2٪ | |||
| كحول 70٪ | |||
| يود | |||
| PE-50 | دينار | بحريني 427411 | |
| CO-EX T22 | Instech Solomon | BCOEX-T22 | |
| موصل 22 جم | Instech Solomon | SC22 / 15 | |
| دوار 22G | Instech Solomon | 375 / 22PS | |
| Y-Connector 22G | Instech Solomon | ||
| Counterbalance and arm | Instech Solomon | CM375BP | |
| 23 G إبر مخففة | Instech Solomon | LS23 23 | |
| G دبابيس التكنيل | Instech Solomon | SP23 / 12 | |
| حبال (12 بوصة) | التسريب Lomir | RT12D | |
| Lomir | RJ01 ، RJ02 ، RJ03 ، RJ04 | ||
| (SM-XL) قطعة | |||
| ملحق حبل | Lomir | RS T1 | |
| 60 مل حقنة | BD | 309653 | |
| 1 مل | حقنة BD | 309602 |
المراجع
- Poitout, V., Robertson, R. P. Glucolipotoxicity: fuel excess and beta-cell dysfunction. Endocr. Rev. 29, 351-366 (2008).
- Poitout, V., et al. Glucolipotoxicity of the pancreatic beta cell. Biochim. Biophys. Acta. 1801, 289-298 (2010).
- Unger, R. H.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
