الفيروس المضخم للخلايا البشرية (HCMV) إصابة حديثي الولادة يمثل أحد أهم أسباب التخلف العقلي، إلا أن الأحداث الجزيئية التي تؤدي إلى فيروس من صنع المرضية لا تزال غير مفهومة تماما. للتحقيق في ديناميات الإصابة في الدماغ، ونحن تكييفها كامل الحيوان في الجسم الحي التصوير لإجراء تحليل الوقت طبعا من حديثي الولادة المصابين بفيروس وسيفيراز-المؤتلف.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الفيروس المضخم للخلايا البشرية (HCMV أو HHV-5) هو الممرض التي تهدد الحياة في الأفراد المناعة الشبهة. على العدوى الخلقية أو الأطفال حديثي الولادة، يمكن للفيروس أن يصيب وتكرار في الدماغ النامية، التي ربما تتسبب في أضرار عصبية شديدة، بما في ذلك الصمم والتخلف العقلي. وعلى الرغم من شدة المحتملة للأعراض، والخيارات العلاجية محدودة بسبب عدم توفر لقاح وغياب العلاج المضاد للفيروسات محددة. وعلاوة على ذلك، وصفا دقيقا من الأحداث الجزيئية التي تحدث أثناء إصابة الجهاز العصبي المركزي (CNS) لا تزال تفتقر منذ الملاحظات مستمدة في معظمها من تشريح الجثة من الأطفال المصابين. وقد وضعت عدة نماذج حيوانية، مثل CMV المكاك ريسوس، وقدمت معلومات هامة عن CMV المرضية في الجهاز العصبي المركزي. ومع ذلك، على الرغم من التقارب التطوري مع البشر، وهذا النموذج كان محدودا قبل إجراء التلقيح داخل القحف استخدامها لتصيب الحيوانات وسلبياتلحث istently عدوى الجهاز العصبي المركزي. وعلاوة على ذلك، عززت الاعتبارات الأخلاقية تطوير نماذج بديلة، من بين التي أدت عدوى حديثي الولادة من الفئران حديثي الولادة مع الفيروس المضخم للخلايا الفأر (MCMV) مؤخرا إلى التقدم الكبير. على سبيل المثال، أفيد أن الحقن داخل الصفاق من MCMV لحديثي الولادة BALB / ج يؤدي إلى إصابة الخلايا العصبية والخلايا الدبقية في مناطق معينة من الدماغ. اقترح هذه النتائج أن التلقيح التجريبية من الفئران قد ألخص العجز الناجم عن الإصابة HCMV في الأطفال. ومع ذلك، فإن التحليل الديناميكي للعدوى MCMV من حديثي الولادة من الصعب تنفيذ ذلك لأن المنهجية الكلاسيكية يتطلب التضحية من عدد كبير من الحيوانات في نقاط زمنية مختلفة لتحليل عبء الفيروسية و / أو المعلمات المناعية ذات الصلة. للتحايل على هذه عنق الزجاجة وتمكين التحقيقات المستقبل من الحيوانات متحولة نادرة، طبقنا في الجسم الحي تكنولوجيا التصوير لإجراء تحليل الوقت طبعا من فيرانشر لتر في الدماغ عند حقن الطرفية من MCMV المؤتلف معربا عن luciferase المراسل إلى C57BL / 6 حديثي الولادة.
المقدمة
الفيروس المضخم للخلايا البشرية (HCMV/HHV-5) هو عضو في الأسرة β-هربس. HCMV هو واسع الانتشار، الممرض الانتهازية والتي عادة ما المكتسبة أثناء الحياة المبكرة باعتبارها عدوى عديمة الأعراض 1. مثل جميع فيروسات الهربس، HCMV استمرت طوال حياة كاملة من المضيف الذي تسيطر بإحكام تكاثر الفيروس الجهاز المناعي. حلقات تنشيط الفيروسية تحدث في الغالب في الأفراد المناعة مثل مرضى زرع يتلقون أدوية لمنع رفض الكسب غير المشروع 2. في البالغين، كما تم ربط HCMV إلى glioblastomas 3. وبالإضافة إلى ذلك، HCMV هو الممرض بارز لحديثي الولادة مع الحصانة غير ناضجة 4-6. العدوى الأولية في الجنين أو الوليد يمكن أن يكون لها ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. إعداد تعليق الفيروسي
- الحصول على سلالة سميث من MCMV luciferase المراسل التعبير (MCMV لوك 15) من مختبر أولريش Koszninowski لل. في هذا المؤتلف، يتم إدراج الجين luciferase المراسل في موضع IE2 من الجينوم MCMV.
- لتضخيم MCMV لوك، تصيب نخاع العظم خط خلية انسجة الفئران (M2-10B4، آي تي سي سي # CRL-1972) مع MCMV في تعدد مختلفة من العدوى (وزارة الداخلية، ،001-1) 16. لهذا، إضافة الفيروس إلى الخلايا المستزرعة في المتوسط مجانا المصل عند 37 درجة مئوية. بعد ساعة واحدة، وإ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ويتضح تجربة ممثل في الشكل 1. عند حقن داخل الصفاق من 50 PFUs من MCMV لوك (لوحة ويظهر حقنة مماثلة أجريت مع الميثيلين الأزرق لتصور الطريق تحت الجلد من الإبرة)، كان الولدان تخدير وردت في وقت واحد 0.3 ملغ من الركيزة luciferase المراسل (وسيفيرين، الفرجار). وبعد خمس عشرة دقيقة، وضعت الحيوانات الجانب بطني حتى في غرفة اقتناء IVIS 50 (في نظام التصوير فيفو، الفرجار)، واستولت على ضوء المنبعث من الحيوان كله خلال ثانية تعرض 10. لوحة B يظهر الصور لقطة تؤخذ في أيام 7 و 9 و 11 و 1.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
باستخدام تكنولوجيا التصوير في الجسم الحي لرصد نشر MCMV لوك في الفئران حديثي الولادة، وكنا قادرين على مراقبة انتشار الفيروس إلى الدماغ من الحيوانات متحولة، في مقابل من النوع البري. وأكد مزيد من الحيوان والتصوير فيفو السابقين من تشريح الدماغ وجود فيروس الانارة في الجهاز العصبي المركزي. وبالإضافة إلى ذلك، ونحن أيضا إجراء المناعية (لا يظهر) على المقاطع رقيقة الدماغ مع الأجسام المضادة المحددة لMCMV E1 البروتين في وقت مبكر، ولاحظ أن في الواقع، MCMV موجودا في نفس المناط.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب تعلن أي مصلحة مالية المتنافسة.
بيان الأخلاق
تمت المحافظة على الحيوانات تحت ظروف خالية من مسببات الأمراض في منشأة رعاية الحيوان من معهد الدراسات Immunologie وآخرون D'Hématologie. أجريت التعامل مع الفئران والإجراءات التجريبية وفقا للقانون الفرنسي لحماية الحيوانات في المختبر. تمت الموافقة على الإجراء من قبل خدمة véterinaire دي لا ولاية دو باس رين (فرنسا) تحت ترخيص رقم A-67-345.
شكر وتقدير
نشكر لي Tuddenham (IBMC، ستراسبورغ) لتضخيم والمعايرة MCMV لوك وتوماس Baumert (INSERM U748، ستراسبورغ) للحصول على إذن لاستخدام مرفق الحيوان من معهد علم الفيروسات. ومن المسلم به الدعم المالي من INSERM، جامعة ستراسبورغ والوكالة الوطنية دي لا بحوث (ANR-08-سحنة-005-01). ومن المسلم به أيضا بمشاركة الأولي من سونيا Beroud واتيتيا Lelieur خلال مشروع سيدهم.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوي>كاشف / مادة< / قوي> | |||
| DMEM | فيشر Scientific | W3523A | |
| ميثيلين أزرق | سيجما ألدريتش | 319112 | |
| إبر الأنسولين | VWR | 613-4897 | |
| الكيتامين | CentraVet | Ket 201 | |
| Xylazine / Vetranal | Sigma Aldrich | 46995 | |
| DPBS | DUTSCHER | P0436500 | |
| لوسيفيرين | الفرجار | 760504 | |
| جنتاميسين | سيجما ألدريتش | G1272 | |
| البنسلين / الستربتومايسين | جيبكو | 15070 | |
| كربوكسي ميثيل السليلوز | سيجما ألدريتش | C4888 | |
| الفورمالديهايد | سيجما ألدريتش | F8775 | |
| البنفسجي الكريستالي | Sigma Aldrich | C3886 | |
| IVIS 50 | الفرجار / بيركين إلمر |
المراجع
- Loewendorf, A., Benedict, C. A. Modulation of host innate and adaptive immune defenses by cytomegalovirus: timing is everything. J. Intern. Med. 267, 483-501 (2010).
- Lischka, P., Zimmermann, H. Antiviral strategies to combat cy....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
