وصفنا تصنيع الكريات هرمون مضغوط، فضلا عن زرع جراحية تحت الجلد في الفئران. هذه الاستراتيجية يمكن دمجها مع نمو الخلية والأنسجة xenografts تحت كبسولة الكلى من الفئران عارية athymic لتقييم التسرطن الهرمونية وتنظيم نمو البروستاتا الحميد.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
وصفنا تصنيع الكريات هرمون مضغوط، فضلا عن زرع جراحية تحت الجلد في الفئران. هذه الاستراتيجية يمكن دمجها مع نمو الخلية والأنسجة xenografts تحت كبسولة الكلى من الفئران عارية athymic لتقييم التسرطن الهرمونية وتنظيم نمو البروستاتا الحميد.
علاجات جديدة لاثنين من الأمراض الشائعة في البروستاتا، وسرطان البروستاتا (PRCA) وتضخم البروستاتا الحميد (BPH)، وتعتمد بشكل كبير على التجارب تقييم تنظيمها الهرمونية. الهرمونات الجنسية الستيرويد (وخاصة الاندروجين والاستروجين) مهمة في PRCA وBPH، ونحن سبر دور كل منهما في إحداث نمو البروستاتا والتسرطن في الفئران مع التجارب باستخدام الكريات هرمون مضغوط. يتم تصنيع الهرمون و / أو المخدرات الكريات بسهولة مع الصحافة بيليه، وجراحيا زرعها في الأنسجة تحت الجلد للمضيف الماوس الذكور. نحن أيضا وصف بروتوكول لتقييم التسرطن الهرمونية تحت الجلد عن طريق الجمع بين هرمون زرع بيليه مع xenografting من recombinants خلية البروستاتا تحت كبسولة الكلى من الفئران المناعة. علاوة على ذلك، هرمون تحت الجلد بيليه الزرع، بالاشتراك مع الكلوي xenografting كبسولة من الأنسجة BPH، من المفيد أن نفهم على نحو أفضل من التنظيم الهرموني بروست حميدةأكلت النمو، واختبار علاجات جديدة تستهدف الجنس هرمون الستيرويد مسارات.
سرطان البروستاتا (PRCA) وتضخم البروستاتا الحميد (BPH) هي أعباء صحية كبيرة. PRCA هو الثاني الأكثر انتشارا سرطان الجهاز الصلبة في الرجال والسبب الرئيسي للسرطان وفاة 1 ذات الصلة. BPH هو أيضا واسع الانتشار بين كبار السن من الرجال، وتشير التقديرات إلى أن مظاهر سريرية من BPH، وانخفاض أعراض المسالك البولية (طرفيات)، وسوف تؤثر على 50-90٪ من الرجال 2. بينما يعرف الاندروجين والاستروجين إلى أن تكون مهمة في PRCA وBPH، فهمنا لآليات التسرطن الهرمونية التي تكمن وراء والنمو لا تزال غير مكتملة 3،4. نماذج حيوانية بسيطة ولين العريكة وراثيا تدعم الدراسات التي من شأنها معالجة هذه الأولويات في مجال البحوث البروستاتا. في استجابة هرمون الأمراض مثل PRCA وBPH، واستخدام تحت الجلد، وبطء الكريات هرمون الإفراج عنهم، في عزلة أو بالاشتراك مع كبسولة الكلوي xenografting (نقل الخلايا أو الأنسجة أو الأعضاء من نوع واحد إلى آخر) في immunocompالمضيف الماوس romised، يوفر طريقة بسيطة وقابلة للتكرار لدراسة التنظيم الهرموني للنمو والتسرطن.
تحت الجلد هرمون بيليه الزرع هو تقنية بسيطة وقابلة للتكرار لدراسة التنظيم الهرموني التسرطن والنمو حميدة في البروستات 5. زرع تحت الجلد من الفئران الذكور البالغين مع 25 ملغ هرمون تستوستيرون (T) و 2.5 ملغ 17β استراديول (E 2)، يسبب زيادة في المصل ض 2 والانخفاض التدريجي في خميس، وإعادة البيئة الهرمونية الحيوية من كبار السن من الرجال 5،6. بالإضافة إلى ذلك، هذا النموذج يلخص العديد من المظاهر السريرية لBPH-طرفيات 5،7. طرق بديلة لإدارة هرمون تشمل تناوله عن طريق الفم / التغذية الأنبوبية أو الحقن داخل الصفاق، والذي يسبب الضيق إلى القوارض، هي أقل اتساقا في تقديم نفس الكمية من المخدرات على مر الزمن، وأكثر من مرة واحدة الزرع الجراحية التي تتطلب عمالة مكثفة. وسائط أخرى تحت الجلد لحormone و / أو تسليم المخدرات تشمل كبسولات Silastic 8. في حين لدينا أيضا تجربة مع استخدام كبسولات Silastic، ويفضل الكريات مضغوط لسهولة استخدامها والتكاثر. وعلاوة على ذلك، فإن معدلات الافراج عن الكريات هرمون مضغوط أفضل تحاكي الجنس ديناميكية نسب هرمون الستيرويد لوحظ في كبار السن من الرجال 5،7.
منذ تطوير الفئران المناعة وراثيا، وقد تم تطوير العديد من أنظمة الجسم الحي في نموذج دمج تقنيات xenografting لدراسة مجموعة واسعة من الأنسجة الطبيعية والمريضة. هناك عدة فئات أساسية من xenografting. تتكون xenografts أنسجة قطعة صغيرة من الأنسجة سليمة، والتي يمكن أن تكون بنية عادية، ورم خبيث، أو النمو حميدة. Szot وآخرون (2007) لقد أضاءت مؤخرا الكلوي xenografting كبسولة من الجزر البنكرياسية 9. وصف Aamdal وآخرون (1985) الكلوي xenografting كبسولة من 27 خطوط الخلايا السرطانية البشرية في ايمالماوس munocompromised يستضيف 10. ويمكن أيضا أن تتكون من ترقيع خط خلية واحدة مخلد (سرطانية أو غير مكون للأورام)، أو يمكن أن تتكون من خط خلية خلد جنبا إلى جنب مع الخلايا المعزولة من اللحمة المتوسطة (خلية الكسب غير المشروع المؤتلف).
نؤيد xenografting من recombinants خلية لبحث دور كل من سدى وظهارة في تطوير PRCA وBPH. كان كونها وآخرون (1980) أول من أشار إلى أنه عندما يتم الجمع بين الكبار الفئران الجنينية مع ظهارة المثانة البولية التناسلية اللحمة المتوسطة الجيوب الأنفية (مادا) وxenografted تحت كبسولة الكلى الجنود الفئران الذكور، والأنسجة تطور الى هياكل تشبه البروستاتا عنيبات 11. أظهر نورمان وآخرون (1986) أن الفأر الكبار البروستاتا ظهارة الأقنية ومادا، عند دمجها في recombinants الأنسجة، والخضوع لنمو الأقنية المتفرعة والتشكل 12. أظهرت هايوارد وآخرون (1988) أن ظهارة البروستاتا الإنسان يستجيب لحثي متر الجنينesenchyme بطريقة مماثلة 13. نموذج الهرمونية التسرطن في البروستاتا، من خلال الجمع بين خلد البروستاتا البشرية خط الخلايا الظهارية، أفيد BPH-1 مع مادا أول مرة من قبل وانغ وآخرون 14 (2001)، واستخدمت على نطاق واسع في مختبرنا 15. هذا النموذج هو مناسبة تماما لفهم تطور PRCA لأن ظهارة البروستاتا الحميد يتحول إلى المرض المنتشر، والنمذجة المتقدمة PRCA في البشر 5. لأن مكونات محددة يمكن التلاعب بها وراثيا، خلية تطعيم المؤتلف مفيد بشكل خاص كنهج لتقييم التفاعلات اللحمية الظهارية.
مواقع أخرى مناسبة لxenografting هي داخل الجلد، تحت الجلد ومواقع مثلي 16. اعتمادا على عملية نسيج والمرض من الاهتمام، قد تكون هذه النهج البديلة مناسبة. لدراسة التسرطن الهرمونية البروستاتا وتنظيم النمو حميدة، نختار الكبسولة الكلويموقع لxenografting بسبب الكسب غير المشروع أعلى معدل لها، وإمدادات وفيرة من الدم، والقدرة على زرع عدد أكبر من xenografts في موقع واحد يقتصر 16 اتخاذها. وعلاوة على ذلك، والتلاعب الهرمونية من الفأرة المضيف الذي يؤدي إلى ضمور البروستاتا يحد من استخدام البروستاتا تطعيم مثلي 16.
يحدد هذا البروتوكول تقنيات ضغط هرمون / المخدرات بيليه تصنيع وزرع جراحية، وكذلك الكلوي xenografting كبسولة من الخلايا في البروستاتا البشرية والأنسجة الطعوم. معا، توفر هذه التقنيات مقايسة حساسة لتحديد ما إذا كان الماوس المعدلة وراثيا هي أكثر عرضة للPRCA و / أو الشروع BPH من سلالات السيطرة. Xenografting هي تقنية قوية لفي الجسم الحي تقييم إمكانات الخلايا التجريبية لتطوير نسيجية والميزات الجزيئية الخباثة، فضلا عن فحص لاستراتيجيات العلاج الرواية لطائفة واسعة من الأمراض الحميدة والخبيثة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
1. إعداد مضغوط هرمون / المخدرات بيليه
2. إعداد خلية المؤتلف Xenografts
3. إعداد Xenografts الأنسجة
4. إعداد النار مصقول ماصة الزجاج
5. إعداد أدوات وجناح للعمليات الجراحية
6. الإجراءات الجراحية: كبسولة الكلوي Xenografting
7. الإجراءات الجراحية: زرع تحت الجلد بيليه
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
اعتمادا على فرضية لفحصها، الكلوي xenografting كبسولة من الأنسجة أو الخلايا recombinants لا يمكن أن يؤديها في عزلة، أو بالاشتراك مع هرمون تحت الجلد بيليه الزرع. ويتضح التخطيطي للتجربة افتراضية تجمع بين التجربة كبسولة الكلوي xenografting مع هرمون تحت الجلد بيليه الزرع في الشكل 1. مجموعة متنوعة من المواد مسحوق و / أو البلورية يمكن استخدامها في تصنيع الكريات مضغوط مع الصحافة بيليه. يبين الشكل 2 25 ملغ، 12 ملغ و 6 ملغ مضغوط الكريات الهرمون.
<...الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
هذه الورقة والبروتوكول المبينة في هذه الوثيقة تصف تصنيع هرمون مضغوط و / أو الكريات المخدرات، وإجراء العمليات الجراحية لزرع تحت الجلد بيليه من الفئران. اعتمادا على سؤال البحث إلى معالجة، هذه التقنية يمكن القيام بها منفردة، أو مجتمعة مع الكلوي xenografting كبسولة من الخلايا البروستاتا ترقيع المؤتلف أو البروستاتا xenografts الأنسجة، والتي هي التقنيات المستخدمة على نطاق واسع في مجال البحوث البروستاتا 17-19. أخذت معا، وهذه التقنيات توفر طريقة فعالة لدراسة التسرطن الهرمونية و...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.
فإن الكتاب أود أن أشكر جميع أعضاء المختبر ريك، في الماضي والحاضر. نشكر كالفين باتن، الابن، DVM وبريجيت رابي، DVM، للحصول على تعليقات مفيدة بشأن البروتوكول. نود أن نعترف NIDDK، NCI، ومعهد علوم الصحة البيئية للحصول على الدعم المالي لهذه الدراسات: R01DK093690، R01CA123199، RC2ESO18764. TMN هو متدرب في برنامج التدريب الطبي العلماء في جامعة روتشستر بتمويل من المعاهد الوطنية للصحة T32 GM07356، والمعاهد الوطنية للصحة تحت L. روث كيرشتاين الخدمة الوطنية بحوث جائزة F30DK093173 كما يدعم هذا المشروع. معتمد من قبل CDV T32CA157322 وABT معتمد من قبل T32ES007015 في جامعة ويسكونسن ماديسون. المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للمعهد الوطني للعلوم الطبية العامة أو المعاهد الوطنية للصحة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مكبس الحبيبات | PARR Industries | 2815 | 3 مم لكمة & مجموعة القوالب |
| الميزان التحليلي | Ohaus | 1918302 | Voyager أو غيرها |
| من موقد بنسن | فيشر Scientific | 03-962Q | |
| تشريح المجهر | Leica | L2 | |
| Deltaphase Pad Kit (شمع قابل لإعادة التسخين) | Braintree Scientific | 39DP | بديل لوسادة التسخين الكهربائية |
| معقم الخرزة الساخنة | FST18000-45 | ||
| مبخر الأيزوفلوران | سوبرا أنستازيا إينوف | VAP3000 | |
| غرفة الحث | سوبرا أنستىيا إينوف | RES644 | |
| F / AIR علبة | سوبرا أنستازيا إنوف | 80120 | |
| 4 منافذ مشعب | سوبرا تخدير إينوف | RES536 | |
| دوائر إعادة التنفس | سوبيرا أنستىيا إينوف | CIR529 | |
| تركيبات مدخل / مخرج | سوبيرا أنستىيا إينوف | VAP203 / 4 | |
| ضغط Reg / Gauge | Supera Anesthesia Innov | OXY508 | |
| مقياس جريان الأكسجين | Supera Anesthesia Innov | OXY660 | |
| 21 مم أنابيب شفافة | سوبرا أنستېزيا Innov | 301-150 | |
| فئران صغيرة مخروط أنف | سوبرا تخدير Innov | ACC526 | |
| ثوب جراحي معقم | الغرب الأوسط البيطري العرض | 350.79866.2 | |
| قناع جراحي | الغرب الأوسط توريد الطبيب البيطري | 350.50111.2 | 2 رقائق مع حلقات الأذن |
| شاش معقم | الغرب الأوسط البيطري | العرض 001.14100.2 | 2 × 2 بوصة |
| قفازات معقمة | كيمبرلي كلارك | 55092 | |
| منتفخ | الغرب الأوسط البيطري | 001.27100.2 | |
| طرف القطن | الغرب الأوسط البيطري | 001.06220.2 | |
| الجراحي غسل | الغرب الأوسط البيطري | 733.80010.3 | |
| الحقول المعقمة (مسطحة) | General Econopak، Inc | 88VCSTF | |
| <قوي> الكواشف < قوي> | |||
| الكوليسترول | سيجما ألدريتش | C-3292 | |
| التستوستيرون Proprionate | سيجما ألدريتش | T-1875 | |
| 17 &# 946 ؛ -استراديول | سيجما ألدريتش | E-2758 | |
| إيزوفلوران | الغرب الأوسط البيطري التوريد | 193.33161.3 | |
| كاربروفين | الغرب الأوسط البيطري | 193.70200.3 | حقن (ريماديل) |
| بيتادين | ويبستر البيطري | 07-836-3379 | |
| معقم | الغرب الأوسط البيطري التوريد | 193.74504.3 | كلوريد الصوديوم 0.9٪ ، عن طريق الحقن |
| حاد / حاد مقص | أدوات علمية دقيقة (FST) | 14054-13 | |
| ملقط Graefe (مسنن ، مسنن ، منحني) | FST | 11055-10 | |
| مقص قزحية فاين | FST. | 14090-09 | |
| Graefe Scalpel | F.S.T. | 10071-12 | |
| دومون # 5 ملقط | FST | 11251-20 | |
| زجاج باستور ماصات | فيشر Scientific | S67050 | بطول 5 بوصات |
| (مسنن ، منحني) | FST | 11052-10 | |
| ملقط Graefe (مسنن ، مستقيم) | FST | 11050-10 | |
| Vicryl Suture | Midwest Vet Supply | 295-92100.2 | 4-0 ، FS-2 ، حامل إبرة قابل للامتصاص |
| مع عمل مقص | FST | 12002012 | |
| مقاطع الجرح | Braintree Scientific | ACS CS | قد تستخدم مقاطع 7 مم أو 9 مم Reflex |
| Wound Clipper | FST. | 12031-09 | يتوافق مع حجم مشبك الجرح |
| من شأنه أن يقص مزيل | FST. | 12033-00 | |
| حاوية التعقيم | FST | 20810-01 | أي حاوية قابلة للتعقيم ستقوم بعمل |
| حقنة مع إبرة | BD | 148292C | 1cc ، 25Gx1 |
| قضيب علامة الأذن | National Band Tag Co. | 1005s1 | بديل لإحراز الأذن |
| علامات أذن الصغيرة | National Band Tag Co. | 1005-1 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.