مقالة منهجية

محرك عانى من قطع الأعصاب والوقت الفاصل بين التصوير من السلوكيات الخلايا الغروية في اسماك الزرد لايف

11.5K مشاهدات

DOI:

10.3791/50621

يونيو 20, 2013

في هذه المقالة

ملخص

على الرغم من أن الجهاز العصبي المحيطي (السندات الإذنية) قادرة على إصلاح كبيرة بعد الإصابة، لا يعرف إلا القليل عن الآليات الخلوية والجزيئية التي تحكم هذه الظاهرة. باستخدام الحية، الزرد المعدلة وراثيا واستنساخه العصبية مقايسة عانى من قطع، يمكننا أن دراسة ديناميكية سلوكيات الخلية الدبقية خلال تنكس الأعصاب والتجدد.

الملخص

غالبا ما يوصف الجهاز العصبي كمكون يصعب السلكية من الجسم على الرغم من أنه هو نظام الجهاز السوائل إلى حد كبير أن يتفاعل مع المؤثرات الخارجية بطريقة متسقة وبطريقة نمطية، مع الحفاظ على المرونة لا يصدق واللدونة. وخلافا للنظام العصبي المركزي (CNS)، النظام العصبي الطرفي (المحيطي) قادر على إصلاح كبيرة، ولكننا قد بدأت لتوها لفهم الآليات الخلوية والجزيئية التي تحكم هذه الظاهرة. باستخدام الزرد كنظام نموذج، لدينا فرصة غير مسبوقة لدراسات التجدد زوجين مع التصوير في الجسم الحي والتلاعب الجيني. وتتكون الأعصاب الطرفية من محاور عصبية محاطة بطبقات من الخلايا الدبقية والنسيج الضام. ومغمد محاور عصبية من قبل myelinating أو غير myelinating خلايا شوان، والتي هي بدورها ملفوفة في كراسة من قبل غمد الخلوية تسمى perineurium. اثر اصابة والأعصاب الطرفية الكبار لديها قدرة فائقة على ريمولقد تضررت الحطام المحاور والأهداف إعادة يعصب. للتحقيق في أدوار جميع الدبقية الطرفية في الجهاز العصبي المحيطي التجديد، وصفنا هنا مقايسة عانى من قطع محور عصبي يستخدم ليزر صبغ المتاحة تجاريا النيتروجين ضخها إلى axotomize الأعصاب الحركية في الزرد المعدلة وراثيا حية. نحن تصف مزيد من الطرق لزوجين هذه التجارب إلى الوقت الفاصل بين التصوير من الأعصاب الجرحى والسيطرة. هذا النموذج التجريبي يمكن استخدامها لتقييم ليس فقط بالدور الذي تقوم به الخلايا الدبقية في تجديد العصبية، ولكن يمكن أيضا أن تكون منصة لتوضيح الآليات الجزيئية التي تتحكم في إصلاح الجهاز العصبي.

المقدمة

وقد استخدمت على نطاق واسع الزرد لدراسة تطور الجهاز العصبي بسبب الشفافية البصرية الخاصة بهم وسهولة نقل الجينات، التي عندما يقترن، تسمح للتصوير مذهلة من السلوكيات خلية حيوية في جنين المعيشة. بالإضافة إلى ذلك، لأن الزرد والثدييات مشاركة ما يقرب من جميع الجينات اللازمة لتكوين الجهاز العصبي، والمعلومات الخلوية والجزيئية التي تم جمعها في هذا النموذج الحي هو relatable مباشرة على أنواع الفقاريات الأخرى. وعلى الرغم قوية بشكل لا يصدق للدراسات التنموية العصبية، والزرد وسمات فريدة من نوعها لديها القدرة أيضا لتوضيح الآليات التي تحافظ على وإعادة بناء الجهاز العصبي بعد الإصابة. اليرقات الزرد الحفاظ على شفافية بهم إلى مراحل اليرقات في وقت متأخ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. إعداد وتركيب الأجنة الزرد لتذرية وتصوير لايف

  1. إعداد مخزون من 0.8٪ منخفضة ذوبان الاغاروز في الماء البيض. قسامة إلى 13X 100 ملم أنابيب القابل للتصرف ثقافة وتخزينها في 4 درجة مئوية لحين الحاجة إليها.
  2. الزرد الكبار الصليب تحتوي على الجينات المحورة ثابت متكاملة لتسمية fluorescently الخلايا العصبية الحركية وأنواع الخلايا الدبقية من الفائدة. جمع الأجنة الزرد في الماء البيض ووضعه في 28.5 درجة مئوية حاضنة للانطلاق الصحيح في وقت لاحق 3.
  3. و....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

مقايسة الموصوفة هنا يمكن استخدامها لتقييم مدى استجابة الخلايا الدبقية وغيرهم من السكان الخلايا العصبية المرتبطة إلى إصابة محور عصبي في الجسم الحي. الفيلم 1 يبين مثالا لإصابة العصب التي تم إنشاؤها باستخدام هذه الطريقة واستجابة الخلايا الدبقية المحيطة. تم إجراء هذه التجربة في تيراغرام (nkx2.2a: megfp)؛ تيراغرام (olig2: dsred) الزرد، التي الدبقية ظهارة الحزمة العصبية تعبر عن غشاء استهدفت DSRed EGFP والخلايا العصبية الحركية صريحة عصاري خلوي. وقدم الإ.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

الخطوات الأكثر أهمية من هذا التصميم التجريبي هي: 1) بشكل صحيح اليرقات المتزايدة للإصابة واللاحقة في الجسم الحي التصوير و2) معايرة الليزر واختيار إعدادات الطاقة الصحيح من أجل خلق الذي عانى من قطع العصب نظيفة ينتج عنه أضرار طفيفة خارج الأنسجة . للمساعدة في ضمان axotomy ناجحة لفي الجسم الحي التصوير والتحليل اللاحق، جبل اليرقات متعددة إما في أسفل الزجاج أطباق فردية أو في طبق زجاجي القاع مع فواصل. بعد معايرة ليزر، ونحن ننصح باختبار إعدادات الطاقة المختلفة على يرقة اخت.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

فإن الكتاب أود أن أشكر مختبر Kucenas لإجراء مناقشات قيمة وتقنيات النصاب القانوني، وشركة للحصول على الدعم الفني رائع. وأيد هذا العمل من قبل صندوق أوفا للتميز في العلوم والتكنولوجيا (فيست) (SK).

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
PhenylthioureaSigmaP7629-100G
Finquel Tricaine Methanesulfonate MS-222Argent ChemicalC-FINQ-UE-100G
نقطة انصهار منخفضة agaroseSigmaA9414-10G
أطباق ثقافة الخلايا رباعية الخلايا ، قاع زجاجي ، معقم ، Greiner Bio OneVWR / Greiner89125-444
أطباق بتري ذات قاع زجاجي واحد 35 × 10 مم ، 12 ممسمك Willco WellsGWSt-3512< / a>
MicroPoint Laser System مع جميع المكوناتAndor Technology - تم شراؤها من خلال Quorum Technologies، Inc.2203-SYS
مايكروبوينت ليزر كورمارين صبغة (435 نانومتر)أندور تكنولوجيMP-27-435-DYE

المراجع

  1. Geuna, S., et al. Chapter 3: Histology of the peripheral nerve and changes occurring during nerve regeneration. Int. Rev. Neurobiol. 87, 27-46 (2009).
  2. Hirata, K., Kawabuchi, M. Myelin phagocytosis by macrophages and no....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة