مقالة منهجية

بروتوكول لالتعريفي الجيني والتخيل من أورام حميدة والغازية في رأسي مجامع ذبابة الفاكهة السوداء البطن

DOI:

10.3791/50624

⸱

سبتمبر 11, 2013

1Department of Biology, Western Kentucky University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التعاون بين الجين الورمي تفعيلها مثل RAS V12 والطفرات في جينات الخلية القطبية مثل خربش، يؤدي إلى نمو الأورام في ذبابة الفاكهة حيث عرض الخلايا السرطانية أيضا السلوكيات الغازية. هنا يتم تقديم بروتوكول بسيط للتحريض والمراقبة من الأورام الحميدة والغازية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد مضيئة ذبابة الفاكهة فهمنا للأساس الجيني للتطور الطبيعي والمرض على مدى العقود القليلة الماضية، واليوم لا تزال تساهم بشكل كبير في فهمنا للأمراض المعقدة 1-7. تطور أورام حميدة من إلى حالة النقيلي هو حدث معقد 8 و تم غرار ذبابة الفاكهة في لتساعدنا على فهم أفضل الأسس الجينية لهذا المرض 9. أنا هنا تقديم بروتوكول بسيط للحث وراثيا، ومراقبة وتحليل ثم تطور الأورام في يرقات ذبابة الفاكهة. ويستند أسلوب الحث الورم على النظام MARCM 10 ويستغل التعاون بين الجين الورمي تفعيلها، رأس V12 وفقدان الجينات قطبية الخلية (خربش، وأقراص كبيرة وقاتلة اليرقات العملاقة) لتوليد الأورام الغازية 9. أنا شرح كيفية يمكن تصور هذه الأورام في يرقات سليمة وثم كيف يمكن تشريح هذه خارج لمزيد من التحليل. بروتوكول مبسطة المقدمة هنا ينبغي أن تجعل من الممكن لهذه التقنية لاستخدامها من قبل المحققين المهتمين في فهم دور الجينات في غزو الورم.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تطور أورام حميدة من إلى حالة النقيلي هو عملية خطوة حكيمة التي تتميز التهرب من آليات الحماية الموجودة في الجسم 8. على سبيل المثال الخلايا السرطانية في الجسم يجب أن تكون قادرة على التهرب من موت الخلايا المبرمج وجهاز المناعة، واختراق المصفوفة خارج الخلية المتخصصة (ECM) يسمى الغشاء القاعدي، والتغلب على أي الضوابط الاجتماعية التي تفرضها الخلايا المحيطة 8. فمن خلال التقدم خطوة حكيمة أن الخلايا السرطانية اكتساب القدرة على ترحيل مواقع بعيدة في عملية تسمى الانبثاث واستعمار. فهمنا لكيفية يتغلب على الخلايا السرطانية الحواجز المفروضة من قبل الهيئة لا تزال في مهدها، ومع ذلك، فإن الصورة الناشئة من الأبحاث التي أجريت حتى الآن نقطة إلى الاستخدام المتكرر للعمليات التنموية العادية ومسارات الإشارات من الخلايا السرطانية 11-13.

ذبابة الفاكهة قد ساهم الى حد كبير في ذبابة الفاكهة السوداء البطن اوند لديناerstanding من التطور الطبيعي والمرض من خلال استخدام تقنيات وراثية متطورة وضعت على مدى العقود العديدة الماضية 14-17. باستخدام الطفرات وأدوات من overexpression اننا وصلنا الى فهم أفضل لمختلف الجينات المسرطنة والجينات الكابتة ورم 18-22. ومع ذلك، الورم ورم خبيث هو نتيجة للتعاون بين العديد من الآفات الجينية التي تمت دراستها في المقام الأول في نماذج الثقافة الخلية 23،24 فضلا عن مختلف نماذج طعم أجنبي 25-27. على الرغم من هذه النماذج قوية لديها قيود لأنها لا تحاكي تماما الظروف الموجودة في الكائن الحي. وعلاوة على ذلك، والنماذج المعدلة وراثيا المتوفرة في الفئران هي مرهقة ولا يفضي إلى التحليل الجيني للسلوك الغازية 28،29. وقد حاولت العديد من الدراسات لفهم غزو الخلايا السرطانية في ذبابة الفاكهة 30،31. هذه التقنيات تستخدم في المقام الأول زرع الأورام الأولية إلى المضيفين ومن ثم الاعتماد على تتبع هيئة تنظيم الاتصالاتnsplanted أورام لغزو الأنسجة المجاورة 32،33. تم تكييفها وهناك تقنية قوية تسمى MARCM 10 بواسطة Pagliarini وشو لنموذج غزو الورم في ذبابة الفاكهة 9. هذه النمذجة الوراثية أنيقة من غزو الورم استغلت التعاون بين الجين الورمي تنشيط وفقدان قطبية الخلية. قوة هذه النمذجة يكمن في حقيقة أن الأورام الغازية تم إنشاؤها في كائن حي سليمة وبالتالي الالتفاف على الحاجة لزرع الأنسجة. لتحقيق التعاون أنكجنيك، يتم التعبير عن الجين الورمي تفعيلها مثل رأس V12 في استنساخ الخلايا في العين antennal القرص اليرقات. نتيجة لهذه التقنية MARCM وتتميز هذه الحيوانات المستنسخة أيضا مع بروتين الفلورية الخضراء (GFP) لسهولة التصور ومصنوعة متماثلة اللواقح بالنسبة المسوخ قطبية الخلية مثل يرقات القاتلة العملاقة، خربش، والأقراص الكبيرة. والنتيجة هي GFP الموسومة الأورام الغازية في مجمع رأسي. في هذا التقرير الأولشرح كيفية حمل، ووضع تصور لهذه الأورام الغازية سواء في سياق يرقات سليمة وتشريح خارج مجمع رأسي. تحريض الورم المقدمة هنا تستخدم الكواشف على كروموسوم الثاني من ذبابة الفاكهة. في الجدول 2، وتقديم قائمة من الأسهم على X و 3 الثالثة الكروموسومات التي يمكن استخدامها لنفس الغرض. وأعتقد أن هذا البروتوكول المبسط سوف تجعل هذه التقنية في متناول الجميع للباحثين المهتمين في فهم الأساس الجزيئي لتطور الورم.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. تحريض أورام حميدة غير الغازية

  1. استخدام الأسهم المدرجة في الجدول (2) لتحريض الأورام الحميدة.
  2. إعداد ثقافة بداية ل "اختبار" الأسهم من النمط الجيني التالية: ذ، ث، إرنست و يونغ-FLP1؛ حوض-Gal80، FRT40A؛ Act5C> ذ +> GAL4، UAS GFP-
  3. إعداد ثقافة بداية ل "اختبار" الأسهم من النمط الجيني التالية: w؛ FRT40A، UAS الراس V12 / CYO
  4. جمع عشر عذارى الإناث من المخزون "اختبار" وعشرة من الذكور من المخزون "اختبار".
  5. عبور الذكور والإناث من "اختبار" والاسهم "اختبار" عن طريق وضعها في كل من قارورة مع ذبابة الغذاء.
  6. وضع الصليب في حاضنة 25 درجة مئوية، والسماح للذكور والإناث للتزاوج ووضع البيض لمدة 24-48 ساعة.
  7. التحقق من قوارير لترسب البيض كافية لوجود يرقات العمر الأول والتأكد من أن الثقافة لا ينزح.
    1. إضافة بضع قطرات من تعقيمهاالماء المقطر لثقافة لإبقائها رطبة (إن الثقافة وتجفيف).
    2. مواصلة رصد الثقافة وكرر الخطوة 1.7.1 حسب الحاجة.
  8. مراقبة تجول اليرقات طور مرحلي الثالثة تحت stereomicroscope مضان النحو المبين في الفرع 3.

2. تحريض الأورام الغازية

  1. استخدام الأسهم المدرجة في الجدول (2) لتحريض الأورام الغازية.
  2. استخدام الثقافة بداية من الخطوة 1.2 أعلاه من النمط الجيني التالية: ذ، ث، إرنست و يونغ-FLP1؛ حوض-Gal80، FRT40A؛ Act5C> ذ +> GAL4، UAS GFP-
  3. إعداد ثقافة بداية ل "اختبار" الأسهم من النمط الجيني التالية: w؛ LGL 4، FRT40A، UAS الراس V12 / CYO
  4. جمع عشر عذارى الإناث من المخزون "اختبار" وعشرة من الذكور من المخزون "اختبار".
  5. عبور الذكور والإناث من "اختبار" والاسهم "اختبار" عن طريق وضعها في كل من قارورة مع ذبابة والعود.
  6. وضع الصليب في حاضنة 25 درجة مئوية، والسماح للذكور والإناث للتزاوج ووضع البيض لمدة 24-48 ساعة.
  7. التحقق من قوارير لترسب البيض كافية لوجود يرقات العمر الأول والتأكد من أن الثقافة لا ينزح.
    1. إضافة بضع قطرات من الماء المقطر تعقيمها للثقافة لإبقائها رطبة (إن الثقافة وتجفيف).
    2. مواصلة رصد الثقافة لجفاف وكرر الخطوة 2.7.1 حسب الحاجة.
  8. مراقبة يرقات العمر الثالث تحت stereomicroscope مضان النحو المبين في الفرع 3.

3. رصد أورام حميدة والغازية

  1. استخدام يرقات العمر الثالث للحميدة العزلة الورم والتصور.
    1. الرطب فرشاة الطلاء في الماء المقطر، واستخدام هذه الفرشاة الطلاء كشط بضع يرقات العمر الثالث من جدار القارورة الثقافة.
    2. وضع اليرقات في شريحة الاكتئاب مع 1X PBS ثم باستخدام فرشاة مبللة الطلاء الخردةالبريد من أي المواد الغذائية من البشرة اليرقات.
    3. وضع اليرقات في طبق بتري ويترك في الثلاجة -20 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة لشل حركة اليرقة.
      1. طريقة بديلة للشل حركة اليرقات باستخدام FLYNAP.
      2. وضع عصا FLYNAP مغموسة في FLYNAP إلى قارورة من 3.1.3.2 وبعد توصيل دعونا القارورة تسد القارورة مع يرقات الوقوف لمدة 30 إلى 40 دقيقة.
    4. وضع اليرقة يجمد على شريحة زجاجية، إضافة قطرة من زيت الهالوكربون الضوء، وتغطي مع غطاء زجاجي ومراقبة تحت stereomicroscope مضان مع القدرة على تصور الفلورية الخضراء البروتين (GFP).
    5. سوف ورم حميد تحمل اليرقات يتألق الخضراء في المنطقة الأمامية حيث مجمع الرأس موجودا.
  2. حدد يوم 10 اليرقات (بعد الاستقراء) من الثقافة بتعيينها في الخطوة # 2 أعلاه لرصد الأورام الغازية. ويتم اختيار يوم 10 اليرقات بسبب تأثير الورم الغازية اليرقات لها ل موسعةالمرحلة ARVAL وعموما تفشل في pupariate.
  3. اتبع الخطوات من 3.1.1 إلى 3.1.4 باستثناء بدلا من يوم الثالث الطور استخدام يرقات 10 اليرقات.
    1. وسوف تحمل الورم الغازية اليرقات يوم 10 يتألق الخضراء في المنطقة الأمامية حيث مجمع الرأس موجودا.
  4. إذا تم تجهيز المجهر الفلورسنت مع كاميرا رقمية ثم التقاط صور للالاستشعاع حميدة والغازية تحمل اليرقات الورم.

4. تشريح للمراقبة في مجمع وكذلك رأسي من الأورام الحميدة والغازية

البشرة شفافة من اليرقة يجعل من الصعب مراقبة مدى غزو الأورام. وبالتالي مدى الغزو هو تصور أفضل عن طريق تشريح مجمع رأسي من اليرقة. وينبغي أن تستخدم الخطوات التالية لتشريح مجمع رأسي.

  1. باستخدام فرشاة الطلاء الرطب حدد يرقات الطور الثالث (للأورام حميدة) ويوم 10 اليرقات (للأورام الغازية) وROM قارورة الثقافة المعنية.
  2. وضع اليرقات في بئر طبق تشريح تحتوي على 1X PBS الباردة. استخدام فرشاة الطلاء لكشط أي جزيئات الطعام من البشرة اليرقات.
    1. نقل اليرقات نظيفة لبئر جديدة للطبق تشريح تحتوي على 1X PBS الباردة.
    2. تحقق من وجود GFP مضان باستخدام stereomicroscope قادرة على الكشف عن مضان. تجاهل غير GFP اليرقات الحاملة.
  3. إضافة 1.0ml من 1X PBS الباردة إلى بئر جديدة على طبق تشريح وباستخدام زوج من ملقط نقل اليرقة تحمل إما أورام حميدة أو الغازية (يبقى بروتوكول تشريح نفسه لهذين النوعين من الأورام).
  4. عقد اليرقة أسفل باستخدام زوج من ملقط حول 2/3rds من نهاية الأمامي.
    1. استخدام زوج آخر من ملقط وفصل بذكاء وعليها 1/3rd الخلفي لليرقة وتخلص منه.
    2. ترك من 2/3rds الأمامي من اليرقة. كما يتم تحرير الضغط داخل يرقة محتوياتسوف يرقة طين من تجويف الجسم.
    3. استخدام زوج من ملقط لإزالة الأمعاء، والدهون في الجسم الداخلية محتويات أخرى من اليرقة التي يرشحان من تجويف الجسم.
    4. استخدام زوج من ملقط لعقد ربط فم اليرقة ودفعها إلى البشرة اليرقات واستخدام زوج آخر من ملقط عكس اليرقة تماما.
    5. استخدام ملقط بلطف وعناية لإزالة الدهون في الجسم والغدد اللعابية، امعاء، مجمع القرص الجناح وأنابيب القصبة الهوائية أي. يجب أن تكون معقدة رأسي الآن مرئية تعلق على ربط فم اليرقة مقلوب. سيظل متصلا نصفي الدماغ والحبل البطني العصب (VNC) للبشرة اليرقات من خلال الأعصاب المنبثقة من فنك.
    6. استخدام زوج من ملقط لكسر بلطف الاتصالات بين الأعصاب الرأس والبشرة اليرقات.
    7. كما يتم تقسيم الاتصالات العصبية بين فنك والبشرة اليرقات والجسم الدهون الزائدة والأنسجة الأخرى إزالتها، وشارك في رأسيmplex سوف تصبح واضحة للعيان وسوف تعلق على البشرة اليرقات فقط في السنانير الفم.
    8. يمكن ترك المجمع رأسي تعلق على البشرة اليرقات إذا يحتاج المجمع إلى أن تكون ثابتة للتطبيقات المصب مثل تلوين الأجسام المضادة أو التصور في وقت لاحق.
    9. إذا كان سيتم تنفيذ أي طلبات المصب مزيد من ثم مجمع رأسي يمكن فصل اليرقات من البشرة وضعها في قطرة من الجلسرين سائل الاعلام القائمة المتزايدة لمزيد من المراقبة والتحليل. استخدام VECTASHIELD وسائل الإعلام في تصاعد مستمر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كما قدمت نتيجة للبروتوكول المستخدم هنا سوف تكون قادرة على إحداث أورام حميدة من قبل overexpressing الجين الورمي تفعيلها في العين قرص تخيلي antennal اليرقات. وسيكون المستخدم قادرا على حمل الأورام الغازية في القرص antennal العين عن طريق overexpressing الجين الورمي في تنشيط الحيوانات المستنسخة من خلايا متحولة أيضا لجين قطبية الخلية أيضا. الأورام يمكن تصور بسهولة مع مساعدة من stereomicroscope الفلورسنت باسم "الفلورية الخضراء" في الأنسجة اليرقات كليا أو المجمعات الرأس التي تم تشريح خارج...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

السرطان هو مرض معقد مع فهم أفضل بكثير اليوم مما كانت عليه في الماضي. ومع ذلك، لا يزال هناك الكثير الذي يمكن تعلمه يحتاج وأوضح من قبل لدينا صورة كاملة عن الآليات الكامنة. بروتوكول المعروضة هنا بسيطة يجعل من الممكن للحث على راثيا الأورام الحميدة والغازية في الحي كله ومن ثم دراسة علم الأحياء المرتبطة تطور أورام في هذا النموذج. معظم التقنيات الموجودة في ذبابة الفاكهة وغيرها من الكائنات إما الاستفادة من الثقافة القائمة على نظام الخلية لتكون الأورام وفهم ورم خبيث أو أن النظام ي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدي أي شيء في الكشف عنها.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويدعم البحوث في مختبري قبل وزارة WKU الأموال بدء التشغيل الأحياء، بحوث WKU مؤسسة RCAP-I منح # 11-8032 وبمنحة KBRIN-AREA تمويلها من خلال منحة الوالد من المعهد الوطني للعلوم الطبية العامة من المعاهد الوطنية الصحة تحت رقم الجائزة 5P20GM103436-13. وأود أيضا أن أنوه الدكتور تيان شو في التي تعرفت على هذه التقنية، والدكتور ريموند Pagliarini الذين أنشئت لأول مرة هذه التقنية في المختبر شو المختبر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
10X PBS (محلول ملحي مخزن بالفوسفات) درجة الحموضة 7.2 محلول مخزونInvitrogen ، Sigma Aldrich
Cooled 1X PBS pH7.2 محلول عملInvitrogen ، Sigma AldrichMake طازجا ومبرد ، يمكن استخدامه لمدة تصل إلى أسبوع
FlynapCarolina BiologicalsFly التخدير اللازم لتخدير اليرقات
مثبتة0.1M أنابيب ، درجة الحموضة 7.2 ، 4٪ بارافورمالدهيدهناك حاجة لإصلاح دلو الثلج المركب الرأسي المفصل
عدةحلول الحفاظ على الجليد. أيضا ، قم بتشريح مركب رأسي في 1X PBS مبرد ثم ضعه على الجليد في أنبوب Eppendorf
سعة 1.7 مل أنبوب Eppendorfزجاجية مختلفة
، أو غطاء زجاجيFisher Scientific
Vectashield Mounting Media أو أي وسائط تركيب أخرىVector Laboratories
Halocarbon 200 أو 700 OilPolysciences Inc. أو Halocarbon.comيستخدم Halocarbon 200 لتركيب اليرقات للتصور على مجسم مضان
يمكن العثور على طلاء الأظافر سالي هانسن "Hard as Nails"في أي متجرمطلوب لإغلاق حواف
المجهر المجسم الفلوري Coverslip A Leica MZ16.5 أو أي مجهر مجسم مضان آخرLeica وغيرهامطلوب لمراقبة مضان GFP في
ملقط Dumont # 5يمكن العثور على لوحة بقعة بمناسبة Pyrex
9 أو أي طبق تشريح آخرSigma Aldrich
في أي متجر
<قوي>الجدول 1.< / قوي> المواد اللازمة لتنفيذ البروتوكول التجريبي المقدم في هذه المقالة.
شرائح بضائع عام يمكن العثور على فرشاة الطلاء بضائع عام

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bale, A. E. Hedgehog signaling and human disease. Annu Rev Genomics Hum Genet. 3, 47-65 (2002).
  2. Bier, E., Bodmer, R. Drosophila, an emerging model for cardiac disease. Gene. 342, 1-11 (2004).
  3. Coombs, G. S., Covey, T. M., Virshup, D. M. Wnt signaling in development, disease and translational medicine. Curr Drug Targets. 9, 513-531 (2008).
  4. Gistelinck, M., Lambert, J. C., Callaerts, P., Dermaut, B., Dourlen, P. Drosophila models of tauopathies: what have we learned. Int J Alzheimers Dis. 2012, 970980(2012).
  5. Marsh, J. L., Thompson, L. M. Drosophila in the study of neurodegenerative disease. Neuron. 52, 169-178 (2006).
  6. Reiter, L. T., Bier, E. Using Drosophila melanogaster to uncover human disease gene function and potential drug target proteins. Expert Opin Ther Targets. 6, 387-399 (2002).
  7. Valenta, T., Hausmann, G., Basler, K. The many faces and functions of beta-catenin. EMBO J. 31, 2714-2736 (2012).
  8. Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144, 646-674 (2011).
  9. Pagliarini, R. A., Xu, T. A genetic screen in Drosophila for metastatic behavior. Science. 302, 1227-1231 (2003).
  10. Wu, J. S., Luo, L. A protocol for mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) in Drosophila. Nat Protoc. 1, 2583-2589 (2006).
  11. Boccaccio, C., Comoglio, P. M. Invasive growth: a MET-driven genetic programme for cancer and stem cells. Nat Rev Cancer. 6, 637-645 (2006).
  12. Srivastava, A., Pastor-Pareja, J. C., Igaki, T., Pagliarini, R., Xu, T. Basement membrane remodeling is essential for Drosophila disc eversion and tumor invasion. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 2721-2726 (2007).
  13. Wang, W., Eddy, R., Condeelis, J. The cofilin pathway in breast cancer invasion and metastasis. Nat Rev Cancer. 7, 429-440 (2007).
  14. Brand, A. GFP as a cell and developmental marker in the Drosophila nervous system. Methods Cell Biol. 58, 165-181 (1999).
  15. Brand, A. H., Dormand, E. L. The GAL4 system as a tool for unravelling the mysteries of the Drosophila nervous system. Curr Opin Neurobiol. 5, 572-578 (1995).
  16. Vidal, M., Cagan, R. L. Drosophila models for cancer research. Curr Opin Genet Dev. 16, 10-16 (2006).
  17. Parks, A. L., et al. Systematic generation of high-resolution deletion coverage of the Drosophila melanogaster genome. Nat Genet. 36, 288-292 (2004).
  18. Blair, S. S. Genetic mosaic techniques for studying Drosophila development. Development. 130, 5065-5072 (2003).
  19. Xu, T., Rubin, G. M. Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues. Development. 117, 1223-1237 (1993).
  20. Xu, T., Wang, W., Zhang, S., Stewart, R. A., Yu, W. Identifying tumor suppressors in genetic mosaics: the Drosophila lats gene encodes a putative protein kinase. Development. 121, 1053-1063 (1995).
  21. Rebay, I., et al. A genetic screen for novel components of the Ras/Mitogen-activated protein kinase signaling pathway that interact with the yan gene of Drosophila identifies split ends, a new RNA recognition motif-containing protein. Genetics. 154, 695-712 (2000).
  22. Therrien, M., Morrison, D. K., Wong, A. M., Rubin, G. M. A genetic screen for modifiers of a kinase suppressor of Ras-dependent rough eye phenotype in Drosophila. Genetics. 156, 1231-1242 (2000).
  23. Albini, A., et al. A rapid in vitro assay for quantitating the invasive potential of tumor cells. Cancer Res. 47, 3239-3245 (1987).
  24. Zicha, D., Dunn, G. A., Brown, A. F. A new direct-viewing chemotaxis chamber. J Cell Sci. 99 (Pt 4), 769-775 (1991).
  25. Fidler, I. J. New developments in in vivo models of neoplasia. Cancer Metastasis Rev. 10, 191-192 (1991).
  26. Mueller, B. M., Romerdahl, C. A., Trent, J. M., Reisfeld, R. A. Suppression of spontaneous melanoma metastasis in scid mice with an antibody to the epidermal growth factor receptor. Cancer Res. 51, 2193-2198 (1991).
  27. Konantz, M., et al. Zebrafish xenografts as a tool for in vivo studies on human cancer. Ann N Y Acad Sci. 1266, 124-137 (2012).
  28. McIntyre, R. E., vander Weyden, L., Adams, D. J. Cancer gene discovery in the mouse. Curr Opin Genet Dev. 22, 14-20 (2012).
  29. Mattison, J., vander Weyden, L., Hubbard, T., Adams, D. J. Cancer gene discovery in mouse and man. Biochim Biophys Acta. 1796, 140-161 (2009).
  30. Miles, W. O., Dyson, N. J., Walker, J. A. Modeling tumor invasion and metastasis in Drosophila. Dis Model Mech. 4, 753-761 (2011).
  31. Stefanatos, R. K., Vidal, M. Tumor invasion and metastasis in Drosophila: a bold past, a bright future. J Genet Genomics. 38, 431-438 (2011).
  32. Beaucher, M., et al. Drosophila brain tumor metastases express both neuronal and glial cell type markers. Dev Biol. 301, 287-297 (2007).
  33. Beaucher, M., Hersperger, E., Page-McCaw, A., Shearn, A. Metastatic ability of Drosophila tumors depends on MMP activity. Dev Biol. 303, 625-634 (2007).
  34. Joyce, J. A., Pollard, J. W. Microenvironmental regulation of metastasis. Nat Rev Cancer. 9, 239-252 (2009).
  35. Igaki, T., Pagliarini, R. A., Xu, T. Loss of cell polarity drives tumor growth and invasion through JNK activation in Drosophila. Curr Biol. 16, 1139-1146 (2006).
  36. Uhlirova, M., Jasper, H., Bohmann, D. Non-cell-autonomous induction of tissue overgrowth by JNK/Ras cooperation in a Drosophila tumor model. Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 13123-13128 (2005).
  37. Uhlirova, M., Bohmann, D. JNK- and Fos-regulated Mmp1 expression cooperates with Ras to induce invasive tumors in Drosophila. EMBO J. 25, 5294-5304 (2006).
  38. Menut, L., et al. A mosaic genetic screen for Drosophila neoplastic tumor suppressor genes based on defective pupation. Genetics. 177, 1667-1677 (2007).
  39. Wu, M., Pastor-Pareja, J. C., Xu, T. Interaction between Ras(V12) and scribbled clones induces tumour growth and invasion. Nature. 463, 545-548 (2010).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

MARCM GFP

مقالات ذات صلة