$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. إعداد بولوكسامير 407 الحل
إذا كانت متوفرة، نفذ إعداد الحل بولوكسامير في غرفة باردة (4 ° C). إن لم تكن متاحة، ووضع زجاجة في كوب مملوء بالماء المثلج. عند ارتفاع درجات الحرارة في بولوكسامير سوف يكون فوق نقطة الجل ولن يحل بشكل صحيح.
- إضافة 60 مل من الجليد الباردة حل PBS في زجاجة زجاج ويقلب بقوة باستخدام محرك مغناطيسي.
- تزن 24.5 غرام من بولوكسامير وإضافتها بكميات صغيرة لPBS الباردة. الانتظار حتى يذوب بولوكسامير جزئيا قبل أن يضيف أكثر من ذلك.
- يحرك حل حتى يذوب كل بولوكسامير.
- إضافة برنامج تلفزيوني الباردة حتى يتم التوصل إلى الحجم النهائي من 100 مل. فإن تركيز النهائي يكون 24.5٪ ث / V.
- وقف التحريك الحل والسماح لها بقية في 4 درجات مئوية حتى الفقاعات والرغوة في حل اختفت. وسيتم نقل الفقاعات التي محاصرون داخل هلام لعخرطوشة rinter وسوف يؤدي إلى عيوب في قوالب الذبيحه المطبوعة.
- فلتر (مرشح 0.22 ميكرون) الحل مباشرة في خرطوشة الطباعة لإزالة أي جزيئات غير المرغوب فيها التي يمكن أن تسد إبرة. التصفية الخطوة يجب أن يؤديها في غرفة باردة (أو إن لم تكن متاحة مع نصائح تبريد، فلتر الخ) لتجنب التبلور من بولوكسامير في التصفية. الحفاظ على خرطوشة تحميلها في 4 درجات مئوية حتى 30 دقيقة قبل التجربة.
2. إعداد طابعة 3D
وكان الطابعة 3D المستخدمة في هذا العمل "BioFactory" من regenHU. الجزء قذف النظام يتكون من عدة أجزاء. وترد خرطوشة تحت الضغط في الجزء العلوي إلى موصل عن طريق محول لور للقفل. الموصل يسد فراغات بين مخرج من خرطوشة ومدخل صمام الملف اللولبي. عند مخرج للصمام الملف اللولبي، والإبر بأقطار مختلفة يمكن استخدامها. هذه المواد هي مقذوف على فرعيإستراتي الذي يقام لمرحلة الانتقال من فراغ. ويصور أجزاء رئيسية من النظام في الشكل 1. النظم القائمة على قذف الأخرى يمكن استخدامها لعملية الطباعة، ويحتاج إلى عملية التحسين الذي يتعين القيام به لكل نظام.
- وضع صمام الملف اللولبي (فوهة قطرها 0.3 مم) والإبرة (قطرها الداخلي 0.15 مم) في 1.5 مل أنابيب اختبار منفصلة مليئة الماء عالى النقاء ووضعها في حمام بالموجات فوق الصوتية لتنظيف ساخنة لمدة 30 دقيقة. شطف الصمامات تنظيفها مع الايثانول وتجفيفها بمسدس النيتروجين.
- تثبيت صمام وابرة في الطابعة وكذلك فارغة، خرطوشة نظيفة.
- تطبيق 3 بار ضغط على النظام وتفجير أي السوائل المتبقية من صمام تثبيت وإبرة مع الهواء المضغوط. لأقطار إبرة صغيرة، فمن المستحسن أن يكون لها مرشح (فلتر حقنة مشتركة، 0.45 ميكرومتر حجم المسام) مثبتة في الخروج من الهواء المضغوط لتجنب دخول الجسيمات الصغيرة التي يمكن أن تسد إبرة.
- تحويل الضغط وتثبيت خرطوشة محملة بولوكسامير. ينبغي أن تؤخذ في خرطوشة من الثلاجة حوالي 30 دقيقة قبل تركيب خرطوشة وبالتالي فإن بولوكسامير يمكن أن تصل إلى درجة حرارة الغرفة وهلام.
- تطبيق الضغط 3 بار للنظام والاستغناء بولوكسامير حتى يصل إلى رأس الإبرة ومقذوف في حبلا المستمر.
3. تعظيم الاستفادة من معلمات الطباعة
لإنشاء هياكل 3D دقيقة، عملية الطباعة يجب أن يكون الأمثل للمواد المختارة والتركيز. اعتمادا على اللزوجة ونظام الطباعة 3D سيكون لكل مادة تسفر عن حجم صرفها محددة وسماكة الخط لمجموعة ثابتة من المعلمات.
- مع برامج CAD مناسبة (قادرة على إنشاء ملفات ISO من الرسومات)، ورسم خط واحد حول نفس طول الهيكل الذي كنت تنوي طباعتها.
- وضع المجهر الشريحة الزجاجية 25 مم × 75 مم × 1مم أو أي الركيزة الأخرى في الطابعة وضمان الحصول عليها عن طريق تشغيل الفراغ.
- في برنامج الطابعة، قم بتعيين صمام الملف اللولبي إلى ارتفاع وتيرة 50 هرتز وضبط الضغط العالي من 3 بار.
- طباعة طبقة واحدة من خط واحد مع سرعة مرحلة من 300 مم / دقيقة.
- تقليل الضغط حتى يتم الوصول إلى عرض الخط المطلوب. يمكنك أيضا التحكم في وحدة التخزين التي هي مقذوف عبر الوقت الافتتاحية للصمام.
- الحد من وتيرة صمام حتى يمكن طباعة أي خط متواصل بعد الآن. اختيار تردد أعلى من هذه القيمة.
ملاحظة: بمجرد تحقيق عرض الخط المطلوب وخطوط المستمر، وتحديد الأمثل سرعة مرحلة وسمك طبقة أي رفع الإبرة بعد طبقة واحدة مطبوعة.
- طباعة عدة طبقات فوق بعضها البعض ومعرفة ما إذا كانت الإبرة في المكان المناسب فوق الطبقة السابقة بعد عدة طبقات المطبوعة. ضبط سمك طبقة (أسانسير إبرة ) بحيث يتم طباعة كل طبقة على رأس واحد القادم (الشكل 3).
- تقليل سرعة مرحلة من المراحل من 300 مم / دقيقة تدريجي بحيث طبقات مقذوف تبدأ وتنتهي في نفس المواقف السابقة ومنها (الشكل 4). سرعات مرحلة عالية جدا تتسبب في المرحلة أن تتحرك قبل المادة مقذوف وقد لمست الطبقة السابقة.
- لطباعة الهياكل دعامة اتبع الخطوات 3.1.-3.8.، ولكن بدلا من رسم خط واحد رسم نقطة واحدة. المعلمات إلى التركيز على عند الطباعة الركائز هي الضغط (ينظم سماكة طبقة وقطر عمود من بولوكسامير)، وهي المرة الاولى من صمام (حجم مقذوف) ووقت الإقامة من رأس الطباعة في الموضع حيث تودع الركيزة .
- عندما يتم تحسين المعلمات، طباعة عدة طبقات من خط ينبغي أن يؤدي إلى جدار صلب، أو في حالة من النقاط، عمود. حفظ المعلمات لاستخدامها لاحقا.
> 4. الطباعة وشطف من العفن عكسي
استخدام المعلمات وجد أثناء إجراء التحسين من هذه النقطة.
- طباعة البنية الداخلية (هنا هو مجموعة عمود) على شريحة المجهر والزجاج، واتركها لتجف بين عشية وضحاها. هذا أ) يقلل من حجم وسمك الهياكل وب) يوفر التصاق أفضل بين هيكل والركيزة، حتى انطلاقه خلال الردم يمكن تجنبها.
- مع برنامج CAD، رسم الهيكل الذي يتكون من الجدار الخارجي الذي يحيط هيكل كنت تنوي ومزال بعيدا وشغلها. طباعة هيكل مع بولوكسامير. سوف طباعة الجدار يستغرق 6 دقائق.
انتباه: الجدار يجب أن تكون مطبوعة 3.5 مم على الأقل بعيدا عن البنية الداخلية بسبب الأبعاد من الإبرة. وإلا فإن الطباعة من الجدار الخارجي سوف يدمر البنية الداخلية
- إعداد الحل الذي تريد ردم SACR الخاصقالب ificial مع (هنا الاغاروز 1٪ في الماء منزوع الأيونات). يجب أن يكون الحل الاغاروز درجة حرارة بين 35 درجة مئوية و 45 درجة مئوية. تحت درجة الحرارة هذه، فإن الاغاروز يصلب بسرعة كبيرة جدا؛ أعلاه درجة الحرارة هذه، فإنه قد تدمر الركائز المطبوعة لأن بنية بولوكسامير شأنها أن تخفف.
- ملء القالب ببطء الذبيحه مع حل الردم باستخدام ماصة. وينبغي أن يتم هذا ببطء لتجنب تدمير بنية داخل الجدار.
- السماح للهلام حل ردم أو تشعبي واعتمادا على البوليمر المستخدمة. في حالة الاغاروز أخذت مكان التصلب عند 4 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة.
- مكان القالب الذبيحه تجمعت عليها في حمام الثلج لمدة 10 دقيقة إلى أزل هيكل بولوكسامير.
- لطخة بنية ردم بمنديل ورق وضعه على الزجاج الجديد شريحة المجهر. اضغط على هيكل بعناية على شريحة المجهر والزجاج لتجنب تسرب من هيدروجيل الثالث من الفراغ في الفضاء بينهيكل ردم وشريحة المجهر والزجاج.
5. ملء الفراغات
- لملء الفراغات من قبل بولوكسامير مزال غادر، وملء حل البوليمر المقصود في حقنة مزودة إبرة G 30. في هذا المثال، استخدمنا ميتاكريليت الجينات 1٪ في محلول كلوريد الصوديوم 0.15 M مع إضافة 0.05٪ W / V الليثيوم فينيل-2 ،4،6-trimethylbenzoylphosphinate (LAP) و 2.5٪ V / V-488 من اليكسا الفيبرينوجين مترافق . تمت إضافة اليكسا-488 الفيبرينوجين مترافق لأغراض التصور.
- Photopolymerize البوليمر مع كثافة عالية مصباح الأشعة فوق البنفسجية (100 واط، 365 نانومتر، المسافة من الركيزة كان 3.5 سم) لمدة 5 دقائق وصورة بناء باستخدام مجهر برنامج التحصين الموسع ومضان أو متحد البؤر.