تقنية لزرع "المتطرفة الأمامي المجال" بين أنسجة الوجه القيطم المورق وقد تم تطوير الأجنة. يمكن نقل الأنسجة من احد خلفية التعبير الجيني إلى أخرى، والسماح للدراسة المتطلبات المحلية للتنمية والقحفي للانزعاج التفاعلات بين مناطق الوجه.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
زرع الوجه في
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تحدث العيوب الخلقية القحفي في 1 من كل 700 ولادة حية، ولكن نادرا ما يعرف المسببات بسبب الفهم المحدود للتنمية القحفي. لتحديد حيث مسارات الإشارات والأنسجة التصرف خلال الزخرفة من الوجه النامية، وقد تم تطوير تقنية "زرع وجه" في الأجنة الضفدع القيطم المورق. تتم إزالة المنطقة من أنسجة الوجه الظني (في "المتطرفة الأمامي المجال" (EAD)) من جنين المانحة في مرحلة tailbud، وزرعها إلى الجنين المضيف من نفس المرحلة، والتي تمت إزالة المنطقة يعادلها. وهذا يمكن أن تستخدم لتوليد وجه خيالية حيث الأنسجة المضيفة أو المانحة له الخسارة أو الربح من وظيفة في الجينات، و / أو يتضمن تسمية النسب. بعد الشفاء، ويتم رصد نتائج التنمية، ويشير إلى أدوار مسار الإشارات داخل الجهة المانحة أو الأنسجة المحيطة المضيف. القيطم يمثل نموذجا قيما للتنمية وجهه، ومنطقة الوجه كبيرة وبسهولة وccessible لالمجهرية. يمكن أن يعاير العديد من الأجنة، على مدى فترة زمنية قصيرة منذ حدوث التنمية بسرعة. النتائج في الضفدع ذات الصلة بالتنمية البشرية، منذ ظهور عمليات الحفظ القحفي بين القيطم والثدييات.
المقدمة
لفهم الآليات الكامنة وراء العيوب القحفي الولادة 1-2، والأنسجة الهامة والمساهمات إشارة أثناء تطوير القحفي يجب تحديدها. في الضفدع القيطم المورق، جزء من الوجه، بما في ذلك الفم وشكل الخياشيم من "المتطرفة الأمامي المجال" (EAD)، حيث الأديم الظاهر الأديم الباطن ويتم جنبا إلى جنب مباشرة 3-4. يعمل EAD أيضا كمركز إشارات للتأثير على الأنسجة المحيطة بها، بما في ذلك قمة العصبية في الجمجمة، الذي يشكل الفكين والوجه المناطق الأخرى 5. لتحديد الجينات التي تساهم في وظيفة هيئة البيئة، وقد تم تطوير تقنية "زرع وجه"، حيث يتم زرع أنسجة من متبرع إلى الجنين المضيف، بعد إزالة منطقة المضيف المقابلة. بعد زرع، مما أ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. الكواشف إعداد
- 10X MBS: تحضير 1 لتر من 10X التعديل المالحة بارت (MBS) حل 17. الرجوع إلى الجدول رقم 1، الكواشف، والمكونات، والتعليمات. استخدام الماء المقطر لجميع الحلول. المزيج في كوب، وذلك باستخدام شريط ضجة، حتى حل كامل. وينبغي بذل كل الحلول في درجة حرارة الغرفة.
- 1X MBS: تمييع 100 مل من 10X MBS الحل في 900 مل من الماء المقطر لجعل 1 لتر من 1X MBS. إضافة 0.7 مل من 1 M و CaCl 2 الحل.
- 0.1X MBS: تمييع 1X ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ينبغي إدراج الأنسجة المزروعة بالكامل في رأس المضيف بعد زرع كما هو مبين في الشكل 3A، ولها جسر زجاجي يوضع بشكل مناسب على وجه الجنين، كما هو مبين في الشكل 2BC. يجب أن يكون الحجم الأنسجة المانحة المزروعة بشكل صحيح لافتتاح المضيف، لزرع لتكون ناجحة. يجب الأنسجة EAD لا تبرز من الرأس، بأي شكل من الأشكال، كما رأينا في أرقام 3B و 3C. بالإضافة إلى ذلك، لا ينبغي أن استدارة زرع وجه النسبية لموقعها في الجسم المانحة، كما هو مبين.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
خطوات حاسمة والقيود: إن EAD وجه إجراء عملية زرع حان الوقت والعمل المكثف. ذلك يتطلب ممارسة واليدين ثابتة، والبراعة إلى الكمال. يعتمد بروتوكول زرع وجه على قدرة الباحث لإزالة الأنسجة بكفاءة والزرع. إذا كان واحد يأخذ وقتا طويلا لإدراج زرع في وجه المضيف، ووجه المضيف بدء التعاقد وشفاء. ملقط يمكن استخدامها لتوسيع المنطقة بدقة الوجه. ومع ذلك، إذا حدث جرح كبير الانكماش، وزرع لن تلتئم بالاضافة الى ما قد تحتاج إلى تخفيض في حجم لتناسب حفرة المضيف الوجه. حجم وشكل زرع يجب أن تتطابق تقريب.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
والكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
نشكر راديك Sindelka لمساعدته، وكاس Bresilla لمساعدة مع تربية الضفادع وإعداد الجنين. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة عن طريق R01DE021109 منحة لورا HLS Jacox بتمويل من زمالة الدراسات العليا هيرشيل سميث في جامعة هارفارد، ومنحة الزمالة F30-01 F30DE022989 الفردية من خلال NIDCR.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| ماصة باستور | VWR | 14672-400 | زجاج جير |
| الحجم 5 3/4 في | من القطن | ||
| VWR | 16001-180 | يمكن التخلص منها ؛ | |
| # 5/45 ملقط | أدوات العلوم الدقيقة بواسطة Dupont Medical | 11251-35 | بزاوية 45 درجة ؛ |
| ملقط النمط | القياسي أدوات العلوم | الدقيقة 11000-20 | مستقيم ؛ طرف مسنن ؛ أنابيب شعرية من الفولاذ المقاوم للصدأ |
| (للإبر) FHC | 30-30-1 | Borosil 1.0 مم OD × 0.5 مم ID / | |
| غطاء الألياف زلة ؛ | VWR | 48393 252 | 24 × 60 مم زجاج الغطاء الصغير |
| Ficoll 400 | Sigma-Aldrich | F9378 | |
| مجتذب الإبرة | Sutter Instrument | Co: discontinued Filament: FB300B | مجتذب الإبرة الأكثر تشابها والمتاح حاليا هو P-97. بالنسبة للخيوط ، استخدم خيوط صندوق Sutter مربعة مقاس 3.00 مم بعرض 3.0 مم. |
| نموذج P-80 | مشتعل / براون مجذوب | ||
| مجسم Zeiss | |||
| إضاءة مجهر مجسم من Fostec | Fostec | استخدم صندوقا خفيفا مع 2 ذراعين من الألياف البصرية. | |
| حامل دبوس مطلي بالنيكل | أدوات العلوم الدقيقة | 26018-17 | قطر فتح الفك: 0-1 مم |
| حامل دبوس مطلي بالنيكل موريا | أدوات العلوم الدقيقة | 26016-12 | فتحة الفك: 0-1 مم |
| إبر التنغستن | أدوات العلوم الدقيقة | 10130-05 | 0.125 مم قطر قضيب |
| فان أكين بلاستالينا | بليك | # 33268-2981 | |
| نمذجة الطين - أبيض أو أحمر أو أصفر | |||
| mMessage mMashine SP6 أو T7 Kit | Ambion | AM1340 |
المراجع
- Gorlin, R. J., Cohen, M., Levin, L. Syndromes of the head and neck. , Oxford University Press. UK. (1990).
- Trainor, P. Craniofacial birth defects: The role of neural crest cells in the etiology and pathogenesis of Treacher Collins syndrome and the potenti....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
