Method Article

طريقة كمية حساسة ومحددة لتحديد بروتين ربط الميوسين القلبي في المصل C عن طريق المقايسة المناعية الكهربائية الكيميائية

DOI:

10.3791/50786

⸱

August 8th, 2013

 ,  ,  , 
1Department of Cell and Molecular Physiology, Loyola University Chicago

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قياس المؤشرات الحيوية في العينات البيولوجية المعقدة يوجه بشكل متزايد عملية صنع القرار السريري. نصف طريقة حساسة للغاية لقياس البروتين المرتبط بالميوسين القلبي في وقت واحد ، والكرياتين كيناز MB ، والتروبونين القلبي I في عينات المصل من الأشخاص الذين يعانون من احتشاء عضلة القلب والأشخاص الأصحاء للتحكم في نفس الوقت.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أصبحت المؤشرات الحيوية أكثر أهمية في صنع القرار السريري ، وكذلك العلوم الأساسية. إن تشخيص احتشاء عضلة القلب (MI) مدفوع إلى حد كبير باكتشاف البروتينات الخاصة بالقلب في مصل الدم أو البلازما للمرضى كمؤشر على إصابة عضلة القلب. بعد أن أظهرنا مؤخرا أن بروتين ربط الميوسين القلبي-C (cMyBP-C) يمكن اكتشافه في المصل بعد MI ، فقد اقترحناه كمؤشر حيوي محتمل ل MI. عادة ما يتم اكتشاف المؤشرات الحيوية عن طريق فحوصات الممتز المناعي التقليدية المرتبطة بإنزيم الساندويتش. ومع ذلك ، تتطلب هذه التقنية حجم عينة كبير ، ولها نطاق ديناميكي صغير ، ويمكنها قياس بروتين واحد فقط في كل مرة. < p class = "jove_content">هنا نعرض مقايسة مناعية متعددة الإرسال يمكن من خلالها قياس ثلاثة بروتينات قلبية في وقت واحد بحساسية عالية. قياس cMyBP-C في أحادي أو مع الكرياتين كيناز MB والتروبونين القلبي أظهرت حساسية مماثلة. تستخدم هذه التقنية طريقة Meso Scale Discovery (MSD) لتعدد الإرسال في صفيحة مكونة من 96 بئرا جنبا إلى جنب مع التلألؤ الكيميائي الكهربائي للكشف. في حين أن أحجام العينات الصغيرة فقط مطلوبة ، يتم تحقيق حساسية عالية ونطاق ديناميكي كبير. باستخدام هذه التقنية ، قمنا بقياس مستويات cMyBP-C والكرياتين كيناز MB والتروبونين القلبي I في عينات مصل من 16 شخصا مصابا ب MI وقارنا النتائج مع 16 شخصا تحكميا. تمكنا من اكتشاف جميع العلامات الثلاث في هذه العينات ووجدنا أن جميع المؤشرات الحيوية الثلاثة تزداد بعد MI. لذلك ، فإن هذه التقنية مناسبة للكشف الحساس عن المؤشرات الحيوية للقلب في عينات المصل.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قياس الكميات المنخفضة من البروتين في العينات البيولوجية المعقدة ، مثل المصل ، له أهمية سريرية متزايدة لإدارة المرضى ، وكذلك العلوم الأساسية. على سبيل المثال ، تتوافق الزيادة في مستويات مصل المؤشرات الحيوية للقلب ، مثل التروبونين I ، في بيئة سريرية مع احتشاء عضلة القلب الحاد (MI) 1. للكشف عن البروتينات في عينات المصل ، فإن مقايسة الممتز المناعي القياسية المرتبطة بالإنزيم (ELISA) هي التقنية الأكثر استخداما لأنها تتمتع بحساسية عالية وتسمح بالقياس الكمي المطلق للمادة التحليلية. ومع ذلك ، تتطلب ELISAs التقليدية كمية كبيرة نسبيا من العينة (عادة 100 ميكرولتر) ، ولها إشارة خلفية عالية في بعض السوائل البيولوجية ، وتقتصر على قياس مادة تحليلية واحدة فقط لكل ELISA2.

في الآونة الأخيرة ، تم تقديم تقنية جديدة للمقايسة المناعية تتحايل على العديد من هذه العيوب. يستخدم هذا الاختبار المعدل ، الذي طورته MSD ، التلألؤ الكيميائي الكهربائي (ECL) للكشف عن الإشارة ، مما يسمح بخلفية منخفضة جدا وحساسية متزايدة ، مما يتيح استخدام أحجام عينات صغيرة. يعتمد التلألؤ الكيميائي الكهربائي على جزيء المراسل الروثينيوم (II) trisbipyridal ، والذي يرتبط بالأجسام المضادة للكشف. ينبعث جزيء المراسل هذا من الضوء عند 620 نانومتر عند التحفيز الكهربائي لقاع اللوحة المكونة من 96 بئرا والتي تحتوي على أقطاب كهربائية كربونية مدمجةفيها 3. أيضا ، باستخدام الطلاء الموضعي ، يمكن طلاء الأجسام المضادة المتعددة في بئر واحد (حتى 10 على لوح مكون من 96 بئرا) ، مما يسمح بالقياس الكمي المتزامن للبروتينات المختلفة في عينةواحدة 4. تم استخدام هذه التقنية مؤخرا لقياس ملامح السيتوكين المسببة للالتهابات في المصل5،6. تقارن لوحات تعدد الإرسال من MSD بشكل إيجابي مع منصات الفحص المتعدد الأخرى7.

< p class = "jove_content">باستخدام MSD كمنصة اختبار أساسية ، قمنا بتطوير لوحة 3-plex مخصصة يمكنها تحديد مستوى بروتين ربط الميوسين القلبي C (cMyBP-C) ، والكرياتين كيناز MB (CK-MB) ، والتروبونين القلبي I (cTnI) ، وتمت مقارنة النتائج بالكشف الأحادي عن cMyBP-C. CK-MB و cTnI هي مؤشرات حيوية راسخة ل MI. ومع ذلك ، يمكن أن تحدث الزيادات في هذه المؤشرات الحيوية بسبب أمراض أخرى غير MI ، مثل التهاب عضلة القلب أو الفشل الكلوي8. هذا يجادل في إضافة مؤشرات حيوية إضافية لزيادة خصوصية تشخيص MI. لقد أظهرنا مؤخرا أن cMyBP-C هو أيضا مؤشر حيوي محتمل ل MI9. cMyBP-C هو بروتين مرتبط بخيوط سميكة يتم التعبير عنه في القلب ، 10-12 ولكن ليس في العضلات الهيكلية أو الملساء. وبالتالي ، فإن زيادة مستوى cMyBP-C في الدورة الدموية هو مؤشر محدد لتلف القلب13.

في هذه الدراسة ، قارنا الكشف أحادي الإرسال ل cMyBP-C باستخدام اختبار 3-plex مخصص لقياس مستويات مصل cMyBP-C و CK-MB و cTnI في مصل المرضى الذين يعانون من MI. في المستقبل ، يمكن استخدام تقنية التوقيع هذه لتشخيص عضلة القلب في المرضى الذين يعانون من ألم في الصدر في غرفة الطوارئ.

وافق مجلس مراجعة المؤسسة (IRB) التابع لجامعة لويولا في شيكاغو على الدراسة لاستخدام عينات بشرية مجهولة الهوية واستخدام المقايسة المناعية (LU # 20392).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. فحص Uniplex cMyBP-C

  1. في اليوم السابق للتجربة ، قم بتغطية اللوحة القياسية العارية MSD المكونة من 96 بئرا بجسم مضاد ملتقط. بالنسبة إلى cMyBP-C ، استخدم حجما 30 ميكرولتر من الجسم المضاد أحادي النسيلة المضاد ل cMyBP-C (خال من الجيلاتين) بتركيز 5 ميكروغرام / مل مخفف في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS).
  2. نظرا لأن البئر كاره للماء ، ضع ماصة المحلول في الزاوية السفلية من البئر ؛ ثم اضغط على جوانب اللوحة لنشر المحلول على البئر بأكمله.
  3. اللوحة مغطاة بمادة مانعة للتسرب ومحتضنة O / N عند 4 درجات مئوية دون اهتزاز.
  4. قم بإزالة محلول الأجسام المضادة الملتقطة عن طريق النقر على المحلول فوق الحوض ثم على كومة من المناشف الورقية. يتم حظر الارتباط غير المحدد باللوحة عن طريق إضافة 150 ميكرولتر من محلول مانع 5٪ (وزن / حجم) A (BSA عالي الجودة) في PBS إلى كل بئر.
  5. أغلق اللوحة واحتضانها لمدة 1 ساعة في RT أثناء الاهتزاز عند 700 دورة في الدقيقة.
  6. أثناء خطوة الحجب ، قم بإعداد المعايير والعينات. اصنع السلسلة القياسية عن طريق تخفيف جزء بروتين cMyBP-C المؤتلف (الأحماض الأمينية 1 - 271) إلى تركيز يبدأ قدره 2,000 نانوغرام / مل في حاصرات A / PBS بنسبة 1٪ (وزن / حجم). ثم يخفف بشكل متسلسل بمعامل 5 في 1٪ (وزن / حجم) مانع A / PBS. تم استخدام ما مجموعه 7 معايير + 1 فارغ (1٪ (وزن / حجم) مانع A / PBS وحده).
  7. قم بإزالة محلول المنع واغسل اللوحة 3x مع 150 ميكرولتر 0.05٪ (حجم / حجم) Tween-20 / PBS. في كل مرة ، قم بإزالة محلول الغسيل عن طريق قلب اللوحة فوق الحوض. بعد خطوة الغسيل الثالثة ، قم بنفض الغبار بقوة فوق الحوض واترك الطبق بقوة على طبقة من المناشف الورقية حتى يجف تماما. هذه خطوة حاسمة ، حيث أن أحجام الحضانة صغيرة ، وأي محلول غسيل متبقي سيخفف بشكل كبير من الحضانة التالية.
  8. الماصة 25 ميكرولتر من المعايير والعينات في الآبار. أغلق اللوحة واحتضانها عند RT ، مع الرج عند 700 دورة في الدقيقة لمدة 1 ساعة.
  9. قم بإعداد محلول الأجسام المضادة للكشف عند 1 ميكروغرام / مل في حاصرات A / PBS بنسبة 1٪. يعمل الجسم المضاد cMyBP-C المصنوع خصيصا (الأحماض الأمينية الهاتمة 2-14) مع وضع العلامات على MSD SULFO-TAG كجسم مضاد للكشف. تتوفر المجموعات لوضع العلامات على SULFO-TAG ، مما يجعله إجراء بسيطا نسبيا لتسمية أي جسم مضاد.
  10. كرر خطوة الغسيل كما هو موضح في الخطوة 1.4.
  11. أضف 25 ميكرولتر من محلول الأجسام المضادة للكشف إلى كل بئر ، وأغلق اللوحة ، واحتضن في RT لمدة ساعة واحدة على شاكر لوحة مضبوطة عند 700 دورة في الدقيقة.
  12. خلال فترة الحضانة ، قم بتشغيل لوحة العرض التوضيحي ل MSD (لوحة مع مصابيح LED) لضمان الوظيفة المناسبة لجهاز تصوير القطاع والبرامج (راجع قسم الكاشف). أيضا ، قم بتخفيف المخزن المؤقت للقراءة ، الذي توفره MSD ، عن طريق إضافة 5 مل من المخزن المؤقت للقراءة 4x إلى 15 مل من الماء المقطر.
  13. كرر خطوة الغسيل كما هو موضح في الخطوة 1.4.
  14. أضف 150 ميكرولتر من المخزن المؤقت للقراءة إلى كل بئر باستخدام ماصة متعددة القنوات. تأكد من تجنب فقاعات الهواء (سحب العينات العكسي طريقة مناسبة). بعد إضافة المخزن المؤقت للقراءة، امسح اللوحة ضوئيا على الفور في Sector Imager.
< p class = "jove_title" >2. 3-plex cMyBP-C و CK-MB و cTnI

  1. يسمح للوحة 96 بئر 3 بلكس ومحاليل مخففة بالتوازن مع RT قبل الاستخدام. هذه اللوحة مغلفة مسبقا بأجسام مضادة للالتقاط ل cMyBP-C و CK-MB و cTnI بواسطة MSD.
  2. أضف 25 ميكرولتر من مانع A / PBS بنسبة 1٪ (وزن / حجم) إلى كل بئر. اضغط على جوانب اللوحة للتأكد من أن البئر بأكمله مغطى بالمحلول.
  3. أغلق اللوحة باستخدام مادة مانعة للتسرب ، ضع اللوحة على شاكر اللوحة ، ورجها عند 700 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة.
  4. في غضون ذلك ، يتم إعداد سلسلة تخفيف من أجهزة المعايرة الفردية. نظرا لأن كل بئر يحتوي على ثلاثة أجسام مضادة للالتقاط ، يجب خلط ثلاثة أجهزة معايرة وتخفيفها بشكل متسلسل قبل الاستخدام. تمييع cMyBP-C ، CK-MB (MSD) ، و cTnI (MSD) معا في 1٪ (وزن / حجم) مانع A / PBS لإنشاء عينة واحدة مع 2,000 نانوغرام / مل cMyBP-C و 100 نانوغرام / مل CK-MB و 25 نانوغرام / مل cTnI (العينة أ).
  5. يتم إعداد حجم نهائي لا يقل عن 100 ميكرولتر لكل معيار. لإكمال السلسلة القياسية ، قم بتخفيف العينات بشكل متسلسل بمعامل 5. أستخدم 25 ميكرولتر من العينة A في 100 ميكرولتر 1٪ (وزن / حجم) مانع A / PBS لإنشاء العينة B. ثم استخدم 25 ميكرولتر من العينة B في 100 ميكرولتر 1٪ (وزن / حجم) مانع A / PBS لإنشاء عينة C ، وهكذا دواليك. تم استخدام عينات مصل بشرية من 16 شخصا مصابا ب MI و 16 شخصا ضابطا لقياس مستويات cMyBP-C و CK-MB و cTnI. تم تخفيف هذه العينات 2x في 1٪ (وزن / حجم) مانع A / PBS.
  6. أضف 25 ميكرولتر من المعايير والعينات المخففة إلى 25 ميكرولتر الموجودة بالفعل في آبار الصفيحة 3-plex. من المهم أيضا تضمين فراغ (مخفف فقط). لإنشاء هذه التقنية ، يتم تحميل العينات في ثلاث نسخ تقنية. خلاف ذلك ، فإن التكرارات كافية.
  7. أغلق اللوحة مرة أخرى (يمكن إعادة استخدام مانع تسرب الألواح) واحتضنه على شاكر اللوحة (700 دورة في الدقيقة) عند RT لمدة ساعتين.
  8. قبل الانتهاء من الحضانة مباشرة ، يتم تحضير محلول الأجسام المضادة للكشف. المخفف المستخدم هو 1٪ (وزن / حجم) مانع A في PBS. يتم تخفيف جميع الأجسام المضادة الثلاثة للكشف الموسومة ب SULFO معا إلى تركيز نهائي يبلغ 1 ميكروغرام / مل لكل منها. عادة ما يتم توفير الأجسام المضادة للكشف بتركيز مخزون 50 ضعفا.
  9. للحصول على لوحة كاملة مكونة من 96 بئرا ، هناك حاجة إلى 2,700 ميكرولتر من إجمالي المحلول المخفف (مع تضمين خطأ في سحب العينات). أضف 54 ميكرولتر من كل جسم مضاد للكشف إلى 2,538 ميكرولتر 1٪ (وزن / حجم) مانع A / PBS.
  10. بعد ساعتين ، قم بإزالة المحاليل عن طريق النقر بقوة على اللوحة فوق الحوض. اغسل الآبار 3x ب 150 ميكرولتر من 0.05٪ Tween-20 في PBS. أضف 25 ميكرولتر من محلول الأجسام المضادة للكشف إلى كل بئر باستخدام ماصة متعددة القنوات ، ويتم النقر على جوانب اللوحة للتأكد من تغطية البئر بأكمله بالمحلول.
  11. أغلق اللوحة واحتضانها لمدة 1 ساعة أثناء الاهتزاز عند 700 دورة في الدقيقة.
  12. خلال فترة الحضانة ، قم بتشغيل لوحة العرض التوضيحي ل MSD (لوحة مع مصابيح LED) لضمان الوظيفة المناسبة لجهاز تصوير القطاع والبرامج. قم أيضا بتخفيف المخزن المؤقت للقراءة ، الذي توفره MSD ، عن طريق إضافة 5 مل من المخزن المؤقت للقراءة 4x إلى 15 مل من الماء المقطر.
  13. كرر خطوة الغسيل الموضحة في الخطوة 2.8.
  14. أضف 150 ميكرولتر من المخزن المؤقت للقراءة إلى كل بئر باستخدام ماصة متعددة القنوات. يعد تجنب فقاعات الهواء أمرا بالغ الأهمية (سحب العينات العكسي طريقة مناسبة). بعد إضافة المخزن المؤقت للقراءة، امسح اللوحة ضوئيا على الفور في Sector Imager.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم عرض المبادئ الأساسية وسير عمل المقايسة 3-plex في الشكل 1، ويتم وصف سير العمل الكلي في الجدول 1. تعمل فحوصات Uniplex وفقا لنفس المبدأ باستثناء أن البئر السفلي بأكمله مغطى بجسم مضاد واحد للالتقاط. يتم الكشف عن الإشارة عن طريق ECL حيث يتم تطبيق إشارة كهربائية على قاع البئر. وهذا بدوره يبدأ الإنتاج المحلي للضوء من خلال تفاعل كيميائي للمخزن المؤقت للقراءة باستخدام ملصق SULFO-TAG على الجسم المضاد للكشف. هذا يؤدي إلى الخلفية المنخفضة والحساسية العالية للمقايسة. في الشكل 2 ،

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذه الدراسة ، نظهر قابلية تطبيق المقايسة المناعية متعددة الإرسال للكشف عن المؤشرات الحيوية القلبية المتعددة في المصل من المرضى. هذه التقنية لها مزايا عديدة مقارنة ب ELISA التقليدية. أولا ، يتم استخدام ECL في مجموعة الفحص بدلا من الكشف عن القياس اللوني. في ECL ، تحفز الإشارة الكهربائية الإنتاج المحلي للخاصية المقاسة (الضوء) ، وبالتالي فصل حدث التحفيز عن الإشارة ، مما يقلل من الخلفية14. هذا يسمح بحساسية عالية ، كما يتضح من الجدول 2.

لا يؤدي تعدد الإرسال للمقايسة إل...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ولا يزال طلب البراءة الكامل معلقا (الطلب المسلسل رقم 13/464,466، العدد المنشور. الولايات المتحدة 2012/0282618 A1 والتاريخ: 05/04/12) لتحديد عوامل الخطر المرتبطة بتدهور cMyBP-C وإطلاقه في سوائل جسم الإنسان وتحديد مستوى cMyBP-C في سوائل جسم الإنسان.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل هذه الدراسة من قبل منح المعاهد الوطنية للصحة R01HL105826 و K02HL114749 (الدكتور سادايابان) ، وزمالات الغرب الأوسط لجمعية القلب الأمريكية ؛ 11PRE7240022 (السيد بارفيلد) و 13POST14720024 (دكتور جوفيندان). يقر المؤلفون بامتنان بمساعدة الدكتور جيمي بيج وجيل كلامبيت والدكتور جون هدسون ، MSD ، لدعمهم الفني والأدبي الممتاز في تطوير الفحص.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments الجيلاتين < td colspan = "4" >< قوي > لوحات ومعدات < / قوي > الحياة

Recodes< / strong>
MSD Read-Buffer T (4X) مع اكتشاف مقياس Meso الخافض للتوتر السطحيR92TC-2  ؛
Tween-20Acros9005-64-5 
MSD Blocker AMeso Scale DiscoveryR93BA-1& nbsp;
محلول ملحي مخزن بالفوسفات ، 10XFisher BioReagentsBP399-4مرشح قبل الاستخدام
الجسم المضاد لبروتين ربط الميوسين C ، فأر أحادي النسيلة (E7) ، خال من الجيلاتينسانتا كروزSC-137180Lللطلاء ، يجب أن يكون الجسم المضاد خاليا من
متعدد المصفوفات 96 جيدا لوحةقياسية Meso Scale DiscoveryL15XA-3 ؛
نموذج أولي 3-plex ، أربعة نقاط ، 96 بئر لوحة مع cMyBP-C و cTnI و CK-MBMeso Scale DiscoveryN452A-1  ؛
شركة ThermaSeal لختم فيلممنتجات علومST-3098 
MSD SECTOR Imager 2400AMeso Scale Discovery 
MTS 2/4 شاكر ميكروتيتر رقميIKA3208001 

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Thygesen, K., et al. Third universal definition of myocardial infarction. Eur. Heart J. 33, 2551-2567 (2012).
  2. Leng, S. X., et al. ELISA and multiplex technologies for cytokine measurement in inflammation and aging research. J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 63, 879-884 (2008).
  3. Thompson, I., et al. Competitive electrochemiluminescence wash and no-wash immunoassays for detection of serum antibodies to smooth Brucella strains. Clin. Vaccine Immunol. 16, 765-771 (2009).
  4. Kingsmore, S. F. Multiplexed protein measurement: technologies and applications of protein and antibody arrays. Nat. Rev. Drug. Discov. 5, 310-320 (2006).
  5. Altan, Z. M., et al. A long-acting tumor necrosis factor alpha-binding protein demonstrates activity in both in vitro and in vivo models of endometriosis. J. Pharmacol. Exp. Ther. 334, 460-466 (2010).
  6. Patel, K. D., et al. High sensitivity cytokine detection in acute coronary syndrome reveals up-regulation of interferon gamma and interleukin-10 post myocardial infarction. Clin. Immunol. 133, 251-256 (2009).
  7. Fu, Q., Zhu, J., Van Eyk, J. E. Comparison of multiplex immunoassay platforms. Clin. Chem. 56, 314-318 (2010).
  8. Mahajan, V. S., Jarolim, P. How to interpret elevated cardiac troponin levels. Circulation. 124, 2350-2354 (2011).
  9. Govindan, S., et al. Cardiac myosin binding protein-C is a potential diagnostic biomarker for myocardial infarction. J. Mol. Cell Cardiol. 52, 154-164 (2012).
  10. Barefield, D., Sadayappan, S. Phosphorylation and function of cardiac myosin binding protein-C in health and disease. J. Mol. Cell Cardiol. 48, 866-875 (2010).
  11. Kuster, D. W., et al. Cardiac myosin binding protein C phosphorylation in cardiac disease. J. Muscle Res. Cell Motil. 33, 43-52 (2012).
  12. Sadayappan, S., de Tombe, P. P. Cardiac myosin binding protein-C: redefining its structure and function. Biophys. Rev. 4, 93-106 (2012).
  13. Sadayappan, S. Cardiac myosin binding protein-C: a potential early-stage, cardiac-specific biomarker of ischemia-reperfusion injury. Biomark Med. 6, 69-72 (2012).
  14. Fichorova, R. N., et al. Biological and technical variables affecting immunoassay recovery of cytokines from human serum and simulated vaginal fluid: a multicenter study. Anal. Chem. 80, 4741-4751 (2008).
  15. Malekzadeh, A., et al. Challenges in multi-plex and mono-plex platforms for the discovery of inflammatory profiles in neurodegenerative diseases. Methods. 56, 508-513 (2012).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cardiac Myosin Binding Protein CElectrochemiluminescence ImmunoassayMultiplex ImmunoassaySerum Biomarker DetectionMeso Scale Discovery96 Well PlateCalibrator Standard CurveDetection Antibody LabelingReid Buffer AdditionCross Reactivity Analysis

Related Articles