$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
يمكن تطبيق الإجراء التالي لأي تجربة التصوير في تخدير التي تستخدم القطط. الخطوات التي يتعين على وجه التحديد لإجراء التجارب السمعية (الخطوات 1،1-1،7، 2.8، 4.1) يمكن تعديلها لاستيعاب بروتوكولات التحفيز الحسية الأخرى.
تلقى جميع الإجراءات التجريبية موافقة من اللجنة الفرعية استخدام الحيوان لمجلس الجامعة على رعاية الحيوان في جامعة ويسترن اونتاريو وفقا للمبادئ التوجيهية المحددة من قبل المجلس الكندي للرعاية الحيوان (CCAC) 44. التجربة المبينة يتطلب ما يقرب من 150 دقيقة من إعداد الحيوان للشفاء. ويتضح مدار الساعة من التجربة في الشكل 1.
1. التحفيز معدات التحضير
ويبين الشكل 2 المكونات الإلكترونية والاتصالات المقابلة المطلوبة لتوليد التحفيز السمعي في الماسح الضوئي التصوير بالرنين المغناطيسي. المتطلبات هي كما وOLLOWS: جهاز كمبيوتر، وبطاقة الصوت الخارجية، والسلطة مكبر للصوت ستيريو ونظام سماعة الرنين المغناطيسي الوظيفي متوافق.
- توصيل الكمبيوتر التي سيتم استخدامها لتقديم التحفيز السمعي إلى بطاقة الصوت الخارجية عن طريق الناقل التسلسلي العالمي (USB) كابل.
- إرفاق الكابلات التي تربط الموانئ إخراج بطاقة الصوت الخارجية لمنافذ الإدخال من السلطة مكبر للصوت ستيريو.
- إرفاق الكابلات التي تربط الموانئ إخراج السلطة مكبر للصوت ستيريو إلى منافذ الإدخال من مربع محول للنظام سماعة الرنين المغناطيسي الوظيفي متوافق.
- ربط سماعات الأذنين لمنافذ الإخراج من مربع المحولات.
- استخدام محمية الكابلات المحورية مع وصلات BNC للاتصال مربع محول إلى لوحة اختراق خارج غرفة الماسح الضوئي.
- ربط تجميع الكابلات سماعة إلى الموانئ BNC المقابلة على لوحة تغلغل داخل الغرفة الماسح الضوئي.
- ربط رغوة نصائح الأذن لسماعات الأذن ثم توصيل سماعات رس الجمعية كابل. تشغيل اختبار التحفيز السمعي لتأكيد يتم نقل هذا الصوت من الكمبيوتر إلى سماعات الأذن. افصل سماعات الأذن وإدراج رغوة نصائح الأذن بشكل آمن إلى آذان القط أثناء مرحلة إعداد الحيوان (الخطوة 2.7).
2. إعداد الحيوان
- ليمهد للتخدير القط وإدارة خليط من المسكنات الأتروبين سلفات (0.02 ملغ / كلغ) وآسيبرومازين (0.02 ملغ / كلغ) عن طريق الحقن تحت الجلد (SC).
- بعد 20 دقيقة، ويدير الكيتامين (4 ملغ / كلغ) وdexmedetomidine هيدروكلوريد (0،02-0،03 ملغ / كلغ) عن طريق الحقن العضلي (IM) للحث على حقن التخدير. عادة ما يتم الجمع بين الكيتامين مع المسكنات وارتخاء العضلات، في هذه الحالة، هيدروكلوريد dexmedetomidine، للحد من الهزات وتصلب العضلات يلاحظ عموما عند استخدام الكيتامين وحدها 45. هذا المزيج مخدر عادة يدفع ما يقرب من 150 دقيقة من التخدير وكثيرا ما يستخدم في الممارسة البيطرية للحثالتخدير في الحيوانات الصغيرة.
- مرة واحدة فقد القط المنعكس المقوم لها، وتطبيق مرهم للعين للعيون لمنع جفاف أثناء العملية. وضع القسطرة سكنى في الوريد الصافن الإنسي للتسليم في الوريد من الكيتامين.
- اختبار ناجح لتحريض التخدير عن طريق معسر في احد اصابع القدم على forepaw ثم مراقبة ما إذا كان القط تنسحب مخلب لها. مرة واحدة يختفي منعكس دواسة، وقمع منعكس هفوة عن طريق الرش على الجدران يدوكائين البلعوم ثم التنبيب القط مع الأنبوب الرغامي 4،0-4،5.
- الحفاظ على التخدير طوال الدورة التصوير مع ضخ معدل ثابت من الكيتامين (،6-،75 ملغ / كغ / ساعة) واستنشاق isoflurane و(0.4-0.5٪) تسليم في 100٪ من الأكسجين في 1-1.5 لتر / دقيقة. الجمع بين 60 مل من المياه المالحة و 0.07 مل من الكيتامين في حقنة 60 مل ثم ضع الحقنة في ضخ حقنة. هذه الخطوة لا يمكن أن يؤديها قبل premedicating القط.
- مكان دافئ منصات التدفئة مملوءة الشمع على الأرض من ليالي التصوير بالرنين المغناطيسي المتوافقةأدى (أرقام 3A و 3C) ثم طبقة من العازل البلاستيك فقاعة التفاف حول الجدران الداخلية للزلاجات.
- وضع القط في وضع القصية في التفاف فقاعة العزل في زلاجات التصوير بالرنين المغناطيسي المتوافقة مع (الشكل 3C).
- مرة واحدة يتم وضع القط، وضبط الرأس للوصول إلى الأذنين. لفة نصائح الأذن رغوة في أصغر قطر ممكن ثم إدراج كل طرف الأذن في عمق قناة الأذن. مرة واحدة إدراج، ينبغي للنصائح الأذن رغوة توسيع لملء الفضاء داخل قنوات الأذن.
- ضبط القط حتى يتم وضع رأسه بشكل صحيح ضمن 3 قنوات التردد الراديوي (RF) لفائف (الشكل 3B). استقرار الرأس مع رغوة الذاكرة الصوتية الملطف (الشكل 3D). وضع رغوة حول الأذنين لتوفير توهين إضافية من ضوضاء الماسح الضوئي.
- التفاف القط في بطانية العزل البلاستيك التفاف فقاعة ثم تأمين ونقل زلاجات إلى السرير الماسح الضوئي.
- ربط خطوط ضخ وأنابيب تسليم مخدر ومعدات الرصد لقطة. ربط سماعات لتجميع الكابلات سماعة تعلق على لوحة الاختراق.
- بدء ضخ الكيتامين في معدل تدفق قاعدة 0.6 ملغ / كغ / ساعة ثم زيادة معدل التدفق على النحو المطلوب استنادا إلى عمق التخدير. ضبط الجرعة الأولي isoflurane وإلى 0.5٪ ثم تنخفض إلى 0.4٪ مرة واحدة وقد تم جمع بالاشعة التشريحية.
- رصد وتسجيل التشبع القط الأكسجين في الدم، في نهاية المد CO 2 مستويات ومعدل ضربات القلب والتنفس ودرجة حرارة الجسم (إن أمكن) في كافة مراحل التجربة باستخدام معدات الرصد التصوير بالرنين المغناطيسي متوافق مع وضعه على مسافة مناسبة من حمل الماسح الضوئي. الجدول 1 يسرد يعني القيم ونطاقات القياسات الفسيولوجية للتنفيذ الناجح لهذا الإجراء. عادة ما ترتبط الزيادات المطردة في معدل ضربات القلب والتنفس مع انتعاش وشيك من التخدير.
- بعد قاكتمال ession، وإزالة القط من زلاجات. الاستمرار في توفير التدفئة تكميلية مع منصات التدفئة والمناشف حتى الحيوان للشفاء تماما. بمجرد عودة هفوة لا ارادي، وإزالة الأنبوب الرغامي. مراقبة القط حتى يتم استعادة المنعكس المقوم ثم العودة الحيوان إلى المرفق. تقييم هذا الحيوان بعد يوم من إجراء لضمان عدم وجود آثار سلبية من التجربة.
3. التصوير الدماغ
- جمع بالاشعة التشريحية للدماغ القط في توجيه شريحة المحوري. استخدام المعلمات التصوير التالية لحجم إشارة التشريحية: تسلسل التصوير FLASH مع TR = 750 ميللي ثانية، TE = 8 ميللي ثانية، مصفوفة = 256 × 256، واقتناء حجم فوكسل = 281 ميكرون س 281 ميكرون × 1.0 مم. مدة الفحص التشريحي ما يقرب من 6 دقائق. الشكل 4 (اللوحة اليسرى) على شريحة صورة تشريحية العينة التي تم الحصول عليها باستخدام المعايير المحددة.
- استخدام المعلمات التالية التصوير لfunctioأحجام نال: مجزأة معشق الصدى مستو اقتناء (برنامج التحصين الموسع) مع TR = 1،000 ميللي ثانية، TE = 15 مللي ثانية، 3 شرائح / طائرة، 21 × 1 مم شرائح؛ مصفوفة = 96 × 96؛ الحقل من رأي = 72 مم × 72 مم؛ اقتناء حجم فوكسل = 0.75 ملم × 0.75 ملم × 1.0 ملم؛ اكتساب الوقت = 3 ثانية / حجم الشكل 4 (اللوحة اليمنى) على شريحة وظيفية صورة العينة التي تم الحصول عليها باستخدام المعايير المحددة.
4. عرض الحوافز
- تقديم النطاق العريض الضوضاء البيضاء التحفيز (0-25 كيلو هرتز، 100 ميللي ثانية رشقات نارية مع 5 ميللي ثانية الوقت ارتفاع / الخريف، 1 عرض كل 200 ميللي ثانية، 90-100 ديسيبل SPL) في تصميم كتلة التي لعبت التحفيز السمعي لمدة 30 ثانية و تناوبت مع 30 ثانية الأساس (أي التحفيز) حالة (الشكل 5). كرر هذه الخطوة حتى لوحظ أثار سمعيا-BOLD النشاط في القشرة السمعية. مدة كل شوط وظيفية باستخدام تصميم القطاعات ما يقرب من 4.5 دقيقة لمدة 90 مجلدا.
- تقديم الحوافز في أبتكبده كتلة التكوين للتصميم العدد المرغوب فيه من أشواط وظيفية.
5. تحليل البيانات
- تحديد البرامج المناسبة تحليل الرنين المغناطيسي الوظيفي (مثل إدارة الأداء الاجتماعي، FSL) لمعالجة كميات الوظيفية المكتسبة.
- إعادة تنظيم كل وحدة تخزين وظيفية لحجم المكتسبة الأقرب في الوقت المناسب لالمرجع التشريحية الفحص. حفظ الناتجة الحركة القيم التصحيح للاستخدام في الخطوة 5.6. استبعاد أي أشواط وظيفية في حركات الرأس التي التناوب تتجاوز 1 درجة أو حركات الرأس متعدية يتجاوز 1 مم.
- Coregister كل وحدة تخزين إلى مرجع التشريحية الفحص.
- السلس كل وحدة تخزين مع 2 ملم ذات العرض الكامل نصف الحد الأقصى (FWHM) مرشح التمويه.
- دمج وظيفة مربع موجة (عربة النقل) والتي تتطابق مع ON-OFF تصميم كتلة التحفيز باعتبارها regressor إلى النموذج الخطي العام (GLM).
- دمج القيم تصحيح الحركة كما تراجع للا مصلحة لحساب التحف المتصلة الحركة. تطبيق يوعتبة الإحصائية ncorrected ع = 0.001 إلى GLM النتائج لعرض مجموعات من تفعيل BOLD. تحديد حجم أصغر العنقودية التي يلتقي تصحيح (الخطأ للأسرة الحكيم: FWE) عتبة ع <0.05 على مستوى المجموعة. تعيين عتبة حد العنقودية إلى هذه القيمة لعرض مجموعات ذات دلالة إحصائية في المناطق ذات الاهتمام.
- تحديد BOLD تغيير إشارة المئة (PSC) في كل فوكسل بالفرق بين إشارة BOLD يعني خلال كتل التحفيز وإشارة BOLD يعني خلال كتل الأساس.