مقالة منهجية

تزايد الخلايا الجذعية العصبية من المناطق التقليدية وغير التقليدية من الدماغ الكبار القوارض

11.9K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/50880

⸱

نوفمبر 18, 2013

 , 
1Department of Medicine, University of Dresden, 2Center for Regerative Therapies Dresden

في هذه المقالة

ملخص

حصاد الخلايا الجذعية العصبية من الدماغ الكبار تتزايد استخدامها في تطبيقات تتراوح بين البحوث الأساسية لتطوير النظام العصبي لاستكشاف التطبيقات السريرية المحتملة في مجال الطب التجديدي. وهذا يجعل رقابة صارمة في ظروف العزلة وزراعة المستخدمة لزراعة هذه الخلايا حاسمة لصوت النتائج التجريبية.

الملخص

يوضح العمل الأخيرة التي الجهاز العصبي المركزي (CNS) تجديد وتكون الأورام ينطوي السكان من الخلايا الجذعية (المنبوذة) المقيم في الدماغ الكبار. ومع ذلك، فإن آليات هذه الخلايا عادة هادئة توظف لضمان حسن سير العمل في الشبكات العصبية، فضلا عن دورها في التعافي من الإصابة والتخفيف من عمليات الاعصاب مفهومة قليلا. هذه الخلايا الموجودة في المناطق المشار إليها باسم "منافذ" التي توفر بيئة مكتفية التي تنطوي على إشارات تغييري من كل من الأوعية الدموية وجهاز المناعة. العزلة، والصيانة، والتفريق بين الطوائف المنبوذة CNS في ظل ظروف ثقافة المعرفة التي تستبعد العوامل غير معروف، يجعلها في متناول العلاج بالوسائل الدوائية أو وراثية، وبالتالي توفير نظرة ثاقبة سلوكهم في الجسم الحي. هنا نقدم معلومات مفصلة عن طرق لتوليد ثقافات المنبوذة CNS من مناطق مختلفة من الدماغ الكبار ونهج لتقييم د بهمifferentiation المحتملة في الخلايا العصبية، الخلايا النجمية، و oligodendrocytes في المختبر. هذه التقنية تعطي السكان خلية متجانسة بوصفها ثقافة أحادي الطبقة التي يمكن أن تصور لدراسة الفردية المنبوذة وذريتها. وعلاوة على ذلك، فإنه يمكن تطبيقها عبر أنظمة مختلفة نموذج حيواني والعينات السريرية، التي كانت تستخدم في السابق للتنبؤ ردود التجدد في الكبار الجهاز العصبي التالفة.

المقدمة

العقيدة المركزية لعلم الأعصاب، التي وضعتها الملاحظات الأساسية للالتهندس الخلوي الدماغ التي أدلى بها رامون كاجال Y. منذ أكثر من قرن، رأت أن من غير المرجح تكوين الخلايا العصبية بعد المراهقة نظرا لتعقيد الشبكات العصبية الموجودة في الجهاز العصبي المركزي 1. على الرغم من عمل التمان في 1960s، وبعد كابلان، مما يدل على أن 3 H-ثيميدين يمكن العثور عليها في الخلايا العصبية الناضجة مشيرا إلى أنه في الواقع يجري إنشاؤها الخلايا العصبية في مناطق متميزة من الدماغ الكبار، واصل العقيدة لعقد 2، 3. واصلت الأدلة لجبل مع البحث نوتيبوم التي تصف التغيرات الموسمية في عدد الخلايا العصبية الموجودة في أدمغة الطائر المغرد 4. لم يكن حتى عام 1999، عندما جولد وآخرون. الأعمال المنشورة على جيل من الخلايا العصبية في قرن آمون مع الزيادات أداء مهام التعلم النقابي في الفئران، فضلا عن ملاحظات Kornack والبرهان راكيتشواصلت تينغ تكوين الخلايا العصبية في المكاك الكبار أن مفهوم الدماغ أقل صرامة وأكثر من البلاستيك، واعترف 5، 6.

البحث عن مصدر الخلوية لهذه العصبونات ولدت من جديد يؤدي إلى اكتشاف عدد سكانها منفصلة من الخلايا الجذعية (المنبوذة) التي تتواجد في مناطق من الدماغ ويشار إلى الكوات 7. وتعتبر منطقة ومنطقة الحبيبية subventricular الفرعية الحصين أن تكون المنطقتين العصبية الرئيسي 8،9. خلايا معزولة من هذه المواقع عرض مميز الكلاسيكية المنبوذة المستمدة الجنينية أو الجنين، وتجديد الذات والتمايز المحتملة. في حالة الخلايا الجذعية العصبية (NSCs)، فإنها يمكن أن تكون متمايزة في الخلايا العصبية، الخلايا النجمية، و oligodendrocytes. بالإضافة إلى ذلك، هذه وصمة عار المنبوذة إيجابية للعلامات الجنين مجلس الأمن القومي مثل البروتين وسيطة خيوط nestin 10. يسلط الضوء على المزيد من العمل الأخيرة التي المنبوذة قد لا تقتصر على هذه رالتعليم الجامعي المجالات، ويتم في الواقع المترجمة في جميع أنحاء الدماغ كما يبلغ عدد سكانها هادئة إلى حد كبير من الخلايا المرتبطة بشكل وثيق مع الأوعية الدموية 11.

الملاحظات التي يتم تعبئتها المنبوذة في استجابة لإصابة يشير إلى احتمال أن تكون قادرة على الاستفادة من هذه الخلايا لأغراض التجديدي للمساعدة في التعافي من اضطراب الاعصاب والسكتة الدماغية 12، 13. هذا هو لا يختلف عن الدور الذي تلعبه الخلايا الجذعية الوسيطة (اللجان الدائمة) في شفاء الأنسجة الضامة، والتي توجد الخلايا المحيطة بالأوعية كما أن لديها القدرة على أن تصبح بانيات، غضروفية، والخلايا الدهنية 14. ومع ذلك، NSCs لا يمكن حصادها في بنفس الطريقة اللجان الدائمة من نخاع العظام بواسطة طموح الروتينية وكثافة تقنيات الطرد المركزي التدرج والاستفادة منها لاحقا في علاجات الخلايا استنادا ذاتي. ونتيجة لذلك، ومصادر أخرى من الخلايا، مثل استخدام NSCs الجنين أو السلائف الخلايا العصبية المشتقة من الإدارة الانتخابيةالخلايا الجذعية ryonic تم استكشاف نطاق واسع في الأمراض الحيوانية ونماذج إصابة بدرجات متفاوتة من النجاح 15. تقنيات الخلايا الجذعية المحفزة التي يسببها استخدام مصادر خلية جسدية تقدم سبيلا محتملا آخر لإنتاج العلاجات المستندة إلى الخلايا مفيدة علاجيا لمجموعة واسعة من التطبيقات، والتغلب على محدودية والمخاوف الأخلاقية بشأن استخدام الخلايا الجنينية والأنسجة الجنينية 16. ومع ذلك، فقد ثبت الترجمة السريرية لهذه النتائج أن يكون مهمة صعبة، كما هو موضح في نضالات علاج الحالات العصبية المختلفة مع العلاجية استنادا SC-النهج 17،18، فضلا عن مسار متعرج لإزالة التنظيمية. كنهج بديل، يمكن إدخال العلاجات الدوائية محددة تعدل أرقام مجلس الأمن القومي وتسهيل الانتعاش في نماذج من مرض الشلل الرعاش والسكتة الدماغية 19. مهما كانت الاستراتيجية قد يكون، فهم كيفية التعامل مع هذه الخلايا بشكل فعاليتطلب النظام في المختبر يمكن الوصول إليها.

ثقافات NSCs لا يمكن أن يؤديها إما الثقافات الكلي، المعروف أيضا باسم neurospheres، أو على شكل أحادي الطبقة 8،20. وقد استخدمت على نطاق واسع على حد سواء التقنيات، مما يتيح لتهيئة الظروف ثقافة محددة، أي استخدام عامل نمو البشرة (صندوق تعديل العولمة الأوروبي) أو عامل نمو الخلايا الليفية الأساسية (bFGF) كمصدر mitogen، التي تنص على توسيع السلائف متعددة القدرات. بينما الثقافات neurosphere قد تكون أكثر ملاءمة لدراسة إمكانية نشر نسيلي من نوع من الخلايا المعزولة، وقد تبين هذا النظام لإنتاج يسكنها خليط من الخلايا خلال التوسع 21. بالإضافة إلى ذلك، بنية مغلقة من neurospheres يجعل التلاعب الدوائية من خلايا غير عملي، ويمكن أن يكون مرتبك تفسير تأثير هذه العوامل قد يكون بسبب المكروية التي أنشئت داخل neurosphere نفسها. الثقافات أحادي الطبقة، من ناحية أخرى، يمكن أن يكونالمستخدمة في شاشات إنتاجية عالية من مكتبات جزيء صغير، وتوفير أداة قوية لاستكشاف آليات نقل الإشارة التي تنظم نمو وتمايز SC ويفتح الفرصة لاكتشاف مركبات جديدة تستهدف تحديدا هذه الفئة من السكان الخلية.

ونتيجة لذلك، والقدرة على توليد بتكاثر ثقافات NSCs الكبار من مناطق مختلفة من الاهتمام في الدماغ يمكن استخدامها في مجموعة واسعة من التطبيقات البحثية، بدءا من الدراسات التنموية من الجهاز العصبي المركزي (CNS) لاستكشاف نهج الطب التجديدي رواية . بروتوكول المعروضة هنا يوضح كيفية تشريح وتقييم إمكانية التفريق بين الطوائف المنبوذة CNS المعزولة من الدماغ القوارض الكبار.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

العمل تتمسك إعلان Helsinski وبيان الحيوان ARVO. واستخدمت الحيوانات لجمع الأنسجة وتم اتباع جميع أساليب ذات الصلة وفقا للتعليمات للمنشأة الحيوان في جامعة درسدن. وقد تم التعامل مع الحيوانات، ويضم وفقا للمبادئ التوجيهية الاتحادية الألمانية للاستخدام ورعاية الحيوانات المختبرية، وتمت الموافقة على الدراسة من قبل Landesdirektion درسدن. يرجى التشاور مع سياسة البيطرية مؤسستكم (IACUC أو لوحة أخرى) بشأن منهجية القتل الرحيم المناسبة.

الأسهم محددة وتركيزات عمل الكواشف يمكن العثور عليها في جداول الكاشف المصاحبة لهذا البروتوكول.

1. إعداد طبق الثقافة

  1. أطباق معطف مع حجم كاف من 75 ميكروغرام / مل بولي-L-الأورنيثين (أي 2 مل / بئر من لوحة 6 جيدا) بين عشية وضحاها في حاضنة الثقافة الخلية 2 أيام قبل تاريخ تشريح المقرر.
  2. نضح بولي-L-الأورنيثين النهار، وغسل كل 2X جيدا مع 3 مل من برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق التالية.
  3. إزالة غسل النهائي، ثم يضاف فبرونيكتين (المخفف 1:250، 4 ميكروغرام / مل في برنامج تلفزيوني) لوحة ووضع الأطباق في الحاضنة بين عشية وضحاها.
  4. نضح فبرونيكتين يوم تشريح وغسل الأطباق 2X مع برنامج تلفزيوني. العودة لوحات لا تزال تحتوي على برنامج تلفزيوني النهائي غسل إلى الحاضنة حتى الأنسجة فصلها جاهز للزراعة. في ذلك الوقت، وإزالة برنامج تلفزيوني قبل الطلاء الأنسجة.
  5. متجر لوحات المغلفة مع بولي-L-ornithinein الحاضنة لمدة تصل إلى 3 أسابيع. لوحات مغلفة مع فبرونيكتين يمكن تخزينها لمدة تصل إلى 1 في الاسبوع. ويمكن أن يتم طلاء فبرونيكتين في اقل من 2 ساعة إذا عاجلة. فبرونيكتين هو عرضة لتمسخ، لا تستنهض الهمم الحل أو السماح الأطباق تجف.

2. تشريح / تصفيح

  1. ينطبق هذا البروتوكول لاستخدام 3 الفئران الكبار (3-6 أشهر من العمر).
  2. تشيلل الدماغ باجتزاء كتلة على الجليد قبل القتل الرحيم الفئران.
  3. وضع 15 مل فالكون الأنبوب الذي يحتوي على 5 مل من N2 المتوسطة مع إضافة bFGF على الجليد.
  4. الموت ببطء الفئران وفقا لسياسة البيطرية مؤسستكم.
  5. إزالة الدماغ من الجمجمة عن طريق شق أسفل خط الوسط من الرأس. استخدام ملقط لقشر بعيدا العظم مما يسمح للدماغ لاستخراجها بعناية.
  6. وضع الدماغ في طبق بتري 10 سم تحتوي على الجليد الباردة PBS. سيؤدي هذا إلى إزالة أي المتبقية الشعر والدم. (الشكل 1A)
  7. وضع الدماغ في الكتلة باجتزاء مبردة. (الشكل 1B)
  8. إدراج واحد جديد شفرة حلاقة نظيفة في كتلة كما في الصورة في الشكل 1C.
  9. إدراج الثانية حلاقة نظيفة شفرة 3 مم الذيلية لأول كما هو موضح في الشكل 1D.
  10. رفع بعناية ريش من الكتلة، آخذين معهم قسم من الفائدة.
  11. تعويم ثانيةنشوئها قبالة شفرة بغمر في برنامج تلفزيوني. (الشكل 1E)
  12. الحصاد الأنسجة من منطقة الفائدة (في هذا المثال استخدمنا الصوار الأمامي، (الأمامي) ACA، الشكل 1F) باستخدام # 5 ملقط وجمع في أنبوب 15 مل المخروطية التي تحتوي على 1 مل المتوسطة N2 التي تحتوي على bFGF.
  13. نقل أنبوب في غطاء تدفق الصفحي ثقافة الخلية، واستمرار ما تبقى من بروتوكول تحت ظروف معقمة.
  14. ميكانيكيا فصل الأنسجة باستخدام ماصة غيض 1 مل تعلق على pipettor P1000. ماصة صعودا وهبوطا عدة مرات (حوالي 20x وبمعدل 1 pipetting لدورة في الثانية)، في حين الضغط على افتتاح غيض ماصة ضد الجزء السفلي من أنبوب مخروطي (أرقام 1G 1-3). وقف سحن عندما يصبح الحل متجانسة.
  15. يسمح الحل للجلوس لمدة 2 دقيقة للسماح أي نوع من الأنسجة nondissociated أكبر لتستقر في القاع. (الشكل 1G 4)
  16. جمع homogeneous طاف ووضع في أنبوب مخروطي يحتوي 8.5 مل من وسائل الإعلام N2 بالإضافة إلى 20 نانوغرام / مل bFGF، 500 نانوغرام / مل Dll4، 500 نانوغرام / مل Ang2، و 200 nMJAK المانع.
  17. لوحة منها إلى 3 آبار من لوحة 6 جيدا باستخدام 3 مل من محلول الخلية المخففة / جيد.
  18. وضع لوحة في حاضنة ترطيب الخلايا عند 37 درجة مئوية، 5٪ CO 2، 5٪ O 2.

3. العناية اليومية

  1. استبدال المتوسطة في أطباق الثقافة مع N2 متوسطة تحتوي على bFGF، Ang2، Dll4، والمانع JAK 24 ساعة بعد الطلاء.
  2. إضافة البلعة من bFGF، Dll4، Ang2، والمانع JAK في اليوم التالي.
  3. تستمر هذه العملية بالتناوب من التغييرات والاضافات وسائل الإعلام عامل أي ما مجموعه 10-14 يوما.

4. تحريض التمايز

  1. سحب bFGF، Dll4، Ang2، والمانع JAK تحتوي المتوسطة واستبدالها المتوسطة N2 أن لا يحتوي على أية عوامل إضافية.
  2. تغيير متوسطة كل يوم الثاني.
  3. إصلاح الخلايا بعد 10 يوما وإجراء مناعية.

5. كشف Immunocytochemical

  1. نضح المتوسطة وإصلاح لوحات ثقافة الخلية مع 2 مل من 4٪ بارافورمالدهيد لمدة 20 دقيقة.
  2. غسل 2X مع 3 مل من برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق لكل منهما.
  3. نضح PBS، ثم permeabilize ومنع الخلايا بإضافة 2 مل من برنامج تلفزيوني يحتوي على 5٪ مصل طبيعي حمار (NDS) و 0.1٪ تريتون X-100 لمدة 20 دقيقة.
  4. تحضير مزيج الأجسام المضادة الأولية في برنامج تلفزيوني تحتوي على 5٪ NDS. الأجسام المضادة لمكافحة nestin يمكن استخدامها لتحديد المنبوذة، في حين TuJ1 (الطبقة الثالثة β-تويولين)، والأجسام المضادة GFAP، وCNPase يمكن استخدامها معا من أجل تلطيخ الثلاثي من علامات التمايز.
  5. نضح عرقلة الحل وإضافة 1.5 مل من الخليط الأجسام المضادة الأولية إلى كل بئر. يحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 90 دقيقة.
  6. إزالة الأجسام المضادة الأولية وغسل 2X مع 3 مل من برنامج تلفزيوني، و 1X مع 3 مل من برنامج تلفزيوني يحتوي على 5٪ NDS لمدة 5 دقائق لكل منهما.
  7. Preparه الأجسام المضادة الثانوية في برنامج تلفزيوني يحتوي على 5٪ NDS.
  8. نضح غسل النهائي وإضافة 1.5 مل من محلول الأجسام المضادة الثانوية إلى كل بئر. احتضان في الظلام لمدة 40 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  9. إزالة حل الأجسام المضادة الثانوية وإضافة 2 مل من دابي وصمة عار الطازجة (500 نانوغرام / مل في برنامج تلفزيوني). احتضان لمدة 3 دقائق.
  10. نضح الحل دابي ثم يغسل 3X مع 3 مل من برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق لكل منهما. ويمكن الآن خلايا يمكن تصور مع المجهر مضان.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تحديد المنطقة ذات الاهتمام التي لحصاد الخلايا الجذعية العصبية هو خطوة أولى حاسمة وستحدد مقدار الوقت المستغرق للحصول على لوحة متكدسة من الخلايا. على سبيل المثال، هي منطقة SVZ العصبية الكلاسيكية ويحتوي على نسبة أعلى من نسبة الخلايا الجذعية العصبية لذلك. ومع ذلك، فإن تقنية المقدمة هنا يمكن استخدامها مع مناطق أخرى غير معترف بها في كثير من الأحيان وجود إمكانات قوية العصبية خلال مرحلة البلوغ. لأغراض هذا البروتوكول، استخدمنا الصوار الأمامي (الجزء الأمامي). في حين أن بعض الخلايا والحطام س...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

ويجري تقاسم العديد من الخطوات الحاسمة لنجاح العزلة، والتوسع، وتمايز الخلايا الجذعية العصبية من الدماغ الكبار من القواسم المشتركة مع تقنيات زراعة الأنسجة القياسية. الهدف أن نضع في الاعتبار هو أن NSCs معزولة عن الدماغ الكبار يجب أن نحافظ على أكبر عدد ممكن من هذه الخصائص في الجسم الحي ممكن (الشكل 2J). غالبا ما يكون التوازن بين الحذر اللازمة والسرعة المناسبة يحتاج إلى ضرب. الرعاية مع عزل الدماغ من الجمجمة سيجعل تحديد المنطقة ذات الاهتمام أسهل بكثير. إزالة الأ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدينا شيء في الكشف عنها.

شكر وتقدير

وقد تم تمويل هذا العمل (جزئيا) من قبل التحالف هيلمهولتز ICEMED - التصوير والأمراض الاستقلابية علاج البيئة، من خلال صندوق مبادرة وشبكة جمعية هيلمهولتز، منحة من مؤسسة أخرى Kroener-فريزينيوس، ومنحة من جمعية الألمانية للبحوث ( SFB 655: خلايا في الأنسجة).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أطباق زراعة الأنسجة ذات 6 آبارBD Biosciences353934
Poly-L-ornithineSigma-AldrichP-3655

5 مجم / مل محلول مخزون محضر في ماء مقطر مزدوج (مستقر لعدة أشهر عند -20 درجة ؛ ج) .< / ص > < ص > تركيز العمل 0.5 مجم / مل في الماء (مستقر لمدة شهر واحد عند 4 درجات ؛ ج) .< / ص >

فيبرونكتينR & D Systems1030-Fnلا تثير محلول المخزون
جهاز الترشيحCorning Life Sciences430769
DMEM / F-12Mediatech10-090-CVانظر الملاحظة أدناه للحصول على إعداد كامل لوسائط N2
Apo-transferrinSigma-AldrichT-2036
الأنسولينSigma-AldrichI-0516
PutrescineSigma-AldrichP-57801 M حل مخزون في ddH2O (مستقر عند 20 درجة ؛ C لمدة 6 أشهر)
سيلينيت الصوديومسيجما ألدريتشS-5261500 & micro; حل مخزون M في ddH2O (مستقر عند -20 درجة ؛ ج لمدة 6 أشهر)
البروجسترونسيجما ألدريتشP-8783100 & مايكرو ؛ محلول مخزون M في الإيثانول (مستقر عند -20 درجة ؛ C لمدة 6 أشهر)
البنسلين / الستربتومايسينInvitrogen15140-122
محلول ملحي مخزن بالفوسفاتMediatech21-040-CV
عامل نمو الخلايا الليفية الأساسي (bFGF)R & D Systems233-FBتركيز العمل 20 نانوغرام / مل & nbsp ؛
دلتا 4 (Dll4)R & D Systems1389-D4تركيز العمل  500 نانوغرام/مل
Angiopoetin 2 (Ang2)R& D Systems623-ANتركيز العمل   500 نانوغرام / مل
JAK مثبطكالبيوكيم420099تركيز العمل 200 نانومتر & nbsp ؛
ألبومين مصل الأبقارSigma-AldrichA-2058
أنابيب مخروطية سعة 15 و 50 ملCorning LifeSciences 430053 ، 430829
تشمل العناصر الضرورية الأخرى: أدوات التشريح العامة ، بما في ذلك شفرة الحلاقة والملقط ، الفئران البالغة (3-6 أشهر ؛ Sprague-Dawley أو Long Evans) ، غرفة التسمم CO2< / sub> ، غطاء التدفق الصفحي لزراعة الخلايا وحاضنة الحاضنة (رطبة ، 37 درجة ؛ C ، 5٪ CO2< / sub> ، 5٪ O2< / sub>). ملاحظة: لتحضير وسائط N2 الكاملة ، أضف إلى زجاجة واحدة من DMEM / F-12 (500 مل) 0.05 جم من apotransferin ، 0.0125 جم من الأنسولين (مذاب طازجا في 1 مل من 10 ملي هيدروكسيد الصوديوم) ، 50 مو ؛ ل من بوتريسين ، 30 مو ؛ لتر من سيلينيت الصوديوم ، 100 مو ؛ ل من مخزون البروجسترون ، و 5 مل من محلول البنسلين / الستربتومايسين. اضبط الرقم الهيدروجيني على 7.2 ، إذا لزم الأمر. تصفية وتعقيم وتخزينها في 4 درجات ؛ C لمدة تصل إلى 3 أسابيع وحماية من الضوء.
جدول الكواشف المناعية
الفلورية علوم المجهر الإلكترونيبارافورمالديهايد15719
مصل الحمار العادي (NDS)سيجما ألدريتشD-9663
تريتون X-100سيجما ألدريتشT-8787
4،6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI)Sigma-AldrichD-84175 مجم / مل مخزون الحل في الميثانول
NestinChemiconMAB353 < ص > عامل التخفيف: 1: 400 < / ص > < ص > الأنواع: الفأر IgG1 < / p >
Hes3سانتا كروزsc-25393 < ص > عامل التخفيف: 1: 100 < / ص > < ص > الأنواع: أرنب IgG < / p >
Sox2R & D أنظمةMAB2018

عامل التخفيف: 1: 100 < / p > < p> الأنواع: الفأر IgG2a < / p >

CNPaseChemiconMAB326 < p> عامل التخفيف: 1: 200 < / ص > < ص > الأنواع: الفأر IgG1 < / p >
& beta ؛ توبولين III (TUJ1)R & D أنظمةMAB1195

عامل التخفيف: 1: 500< / p>

الأنواع: الفأر IgG2a < / p >

البروتين الحمضي الليفي الدبقي الدبقي (GFAP) داكوأمريكا الشماليةZ0334 < ص > عامل التخفيف 1: 500 < / ص > < ص > الأنواع: أرنب < / ص >
Alexa & nbsp ؛   568InvitrogenA-21124

عامل التخفيف: 1: 200< / p>

الأنواع: الماعز المضادة للفأر IgG1< / p>

Alexa 488InvitrogenA-21131

عامل التخفيف: 1: 200 < / p > < p > الأنواع: الماعز المضادة للفأر IgG2a < / p >

Cy5Jackson ImmunoResearch59883 < p> عامل التخفيف: 1:200< / ص > < ص > الأنواع: الماعز المضادة للأرانب < / ص>
< TD colspan = "4" > جدول الأجسام المضادة الأولية< td colspan = "4" >جدول الأجسام المضادة الثانوية

المراجع

  1. Cajal, R. Y. Comparative Study of Sensory Areas of the Human Cortex. , Harvard University. (1899).
  2. Altman, J., Das, G. D. Autoradiographic and histological evidence of postnatal hippocampal neurogenesis in rats. J. Comp. Neurol. 124, 319-335 (1965).
  3. Kaplan, M. S., Hinds, J. W. Neurogenesis in the adult rat: electron microscopic analysis of light radioautographs. Science. 197, 1092-1094 (1977).
  4. Nottebohm, F. Neuronal replacement in adulthood. Ann. N.Y. Acad. Sci. 457, 143-161 (1985).
  5. Gould, E., Reeves, A. J., Graziano, M. S., Gross, C. G. Neurogenesis in the neocortex of adult primates. Science. 286, 548-552 (1999).
  6. Kornack, D. R., Rakic, P. Continuation of neurogenesis in the hippocampus of the adult macaque monkey. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96, 5768-5773 (1999).
  7. Alvarez-Buylla, A., Kohwi, M., Nguyen, T. M., Merkle, F. T. The heterogeneity of adult neural stem cells and the emerging complexity of their niche. Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 73, 357-365 (2008).
  8. Reynolds, B. A., Weiss, S. Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system. Science. 255, 1707-1710 (1992).
  9. Luskin, M. B. Restricted proliferation and migration of postnatally generated neurons derived from the forebrain subventricular zone. Neuron. 11, 173-189 (1993).
  10. Lendahl, U., Zimmerman, L. B., McKay, R. D. CNS stem cells express a new class of intermediate filament protein. Cell. 60, 585-595 (1990).
  11. Androutsellis-Theotokis, A., et al. Targeting neural precursors in the adult brain rescues injured dopamine neurons. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 13570-13575 (2009).
  12. Jin, K., et al. Neurogenesis in dentate subgranular zone and rostral subventricular zone after focal cerebral ischemia in the rat. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 4710-4715 (2001).
  13. Zhang, R. L., Zhang, Z. G., Chopp, M. Ischemic stroke and neurogenesis in the subventricular zone. Neuropharmacology. 55, 345-352 (2008).
  14. Caplan, A. I. Why are MSCs therapeutic? New data: new insight. J. Pathol. 217, 318-324 (2009).
  15. Goldman, S. Stem and progenitor cell-based therapy of the human central nervous system. Nat. Biotechnol. 23, 862-871 (2005).
  16. Sun, N., Longaker, M. T., Wu, J. C. Human iPS cell-based therapy: considerations before clinical applications. Cell Cycle. 9, 880-885 (2010).
  17. Amariglio, N., et al. Donor-derived brain tumor following neural stem cell transplantation in an ataxia telangiectasia patient. PLoS Med. 6, e1000029(2009).
  18. Lindvall, O., Bjorklund, A. Cell therapeutics in Parkinson's disease. Neurotherapeutics. 8, 539-548 (2011).
  19. Kittappa, R., Bornstein, S. R., Androutsellis-Theotokis, A. The Role of eNSCs in Neurodegenerative Disease. Mo.l Neurobiol. , (2012).
  20. Cattaneo, E., McKay, R. Identifying and manipulating neuronal stem cells. Trends Neurosci. 14, 338-340 (1991).
  21. Jensen, J. B., Parmar, M. Strengths and limitations of the neurosphere culture system. Mol. Neurobiol. 34, 153-161 (2006).
  22. Duarte, A., et al. Dosage-sensitive requirement for mouse Dll4 in artery development. Genes Dev. 18, 2474-2478 (2004).
  23. Maisonpierre, P. C., et al. Angiopoietin-2, a natural antagonist for Tie2 that disrupts in vivo angiogenesis. Science. 277, 55-60 (1997).
  24. Androutsellis-Theotokis, A., et al. Notch signalling regulates stem cell numbers in vitro and in vivo. Nature. 442, 823-826 (2006).
  25. Alderson, R. F., Alterman, A. L., Barde, Y. A., Lindsay, R. M. Brain-derived neurotrophic factor increases survival and differentiated functions of rat septal cholinergic neurons in culture. Neuron. 5, 297-306 (1990).
  26. Johe, K. K., Hazel, T. G., Muller, T., Dugich-Djordjevic, M. M., McKay, R. D. Single factors direct the differentiation of stem cells from the fetal and adult central nervous system. Genes Dev. 10, 3129-3140 (1996).
  27. Ourednik, J., Ourednik, V., Lynch, W. P., Schachner, M., Snyder, E. Y. Neural stem cells display an inherent mechanism for rescuing dysfunctional neurons. Nat. Biotechnol. 20, 1103-1110 (2002).
  28. Ryu, J. K., Cho, T., Wang, Y. T., McLarnon, J. G. Neural progenitor cells attenuate inflammatory reactivity and neuronal loss in an animal model of inflamed AD brain. J. Neuroinflammation. 6, 39(2009).
  29. Androutsellis-Theotokis, A., et al. Angiogenic factors stimulate growth of adult neural stem cells. PLoS One. 5, e9414(2010).
  30. Park, D. M., et al. Hes3 regulates cell number in cultures from glioblastoma multiforme with stem cell characteristics. Sci. Rep. 3, 1095-1010 (2013).
  31. Poser, S. W., et al. Ch. 5. Cancer Stem Cells - The Cutting. Shostak, S. , InTech. Europe, Rijeka, Croatia. 89-110 (2011).
  32. Androutsellis-Theotokis, A., Rueger, M. A., Mkhikian, H., Korb, E., McKay, R. D. Signaling pathways controlling neural stem cells slow progressive brain disease. Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 73, 403-410 (2008).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

FGF

مقالات ذات صلة