$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
ملاحظة: يتم توفير مصدر المواد والكواشف اللازمة لاتباع البروتوكول في "الكواشف" الجدول أدناه.
1. إعداد لوحات الدوائر المطبوعة (الكلور) للاتصال تسجيل الكهربائي
ملاحظة: من أجل توفير إجراء التجارب العملية، يتم ملحوم أقطاب الأسلاك لثنائي الفينيل متعدد الكلور لإدراج هذه الأقطاب الكهربائية إلى موصل الأولى للتمويل (كابلات مسطحة مرنة).
- قطع قطعة 0.5x5 سم 2 من النحاس يرتدون صفح.
- باستخدام علامة غيض غرامة، ورسم ثلاثة منصات 0.1x5cm 2 المستطيل كما النقش أنماط قناع.
- حفر صفح يتعرض باستخدام منمش PCB داخل منطقة جيدة التهوية أو غطاء الدخان. تغطي حوالي 1 سم من طول انقطاع صفح مع الشريط غير رد الفعل. ملء كوب تخرج مع لا يقل عن 100 مل من الكلور ومنمش الشريط انقطاع النحاس صفح إلى داخل الدورق تخرج مع الاسكتلندي. نصف cutou النحاس صفحر يجب أن يغطس في منمش الكلور.
- ضع الكأس على منصة دوارة لمدة 20 دقيقة.
- إزالة انقطاع من منمش ووضعه في كوب مملوء بالماء لمدة 10 دقيقة.
- باستخدام المناديل الورقية، وتطبيق ايزوبروبيل وإزالة علامات لفضح منصات النحاس غير محفورا.
- قطع لوحات الدوائر الالكترونية المطبوعة إلى مربعات أصغر حوالي 1 سم طويلة.
- قطع قطعتين من الأسلاك المغلفة، صلب والفولاذ المقاوم للصدأ (0.11 "المغلفة، 0.008" العارية) باستخدام شفرة حادة لأطوال 3 سم لكل منهما. هذه قطعة من سلك الفولاذ المقاوم للصدأ هي الأقطاب النشطة التي سيتم إدراجها في الصدر من الحشرات.
- باستخدام شفرة، وإزالة 4-5 ملم للطلاء من البلاستيك من كل نهاية كل سلك. فمن المستحسن استخدام المجهر.
- قطع واحد 0.7 سم قطعة من سلك معزول الفولاذ المقاوم للصدأ لإنشاء ملحق لطرف القطب الأرض. بلطف إزالة طلاء بشفرة أو تذوب مع حرارة الأشعة تحت الحمراء لحامعلى النحو الذي قام في الخطوة 1.9.
- للاتصال الأرض، وقطع قطعة واحدة من المرونة (يتز أو مغو) سلك إلى طول 4.5 سم.
- جندى 0.7 سم قطعة من الفولاذ المقاوم للصدأ أعدت في الخطوة 1.10 إلى سلك اتصال الأرض أعدت في الخطوة 1.11. ينبغي أن يكون طرف الفولاذ المقاوم للصدأ يتعرض في نهاية الاتصال الأرضي.
- الشريط مجلس القطب استعداد بحزم إلى مساحة العمل لحام باستخدام الشريط غير رد الفعل. استخدام الشريط لإخفاء جميع ولكن 1-2 ملم من منصات على متن الطائرة حيث سيتم ملحوم الأقطاب. سيتم إدراج هذا ملثمين، لحام خالية من نهاية منصات في موصل الأولى للتمويل هو موضح في الخطوة 4.1.
- محاذاة الأسلاك القطب ثلاثة من هذه التي واحدة من نهاية كل يمكن ملحوم على منصات المقابلة على متن القطب. تطبيق تدفق الفولاذ المقاوم للصدأ عبر منصات قطب كهربائي لتسهيل حام.
- لحام كل من الأقطاب تعرض على منصات.
- تزج الأقطاب في الأسيتون وايزوبروبيل لمدة 10 دقيقةكل لتنظيف بقايا جندى. استخدام حمام بالموجات فوق الصوتية يحسن أداء التنظيف.
2. الإدراج الجراحية للماندوكا سيكستا شرانق
ملاحظة: سوف تكون الحشرات الأكثر نشاطا خلال التحولات بين النهار والليل. وبالتالي، ينبغي إنشاء دورة اليوم / ليلة الاصطناعي داخل غرفة الحشرات باستخدام منفذ توقيت التلقائي. هذه يجب أن يتم تعيين لمحاكاة الظلام 7 ساعة و 17 دورة ضوء ساعة.
- دراسة سيكستا الشرانق ماندوكا اليومية لتحديد الوقت المناسب الإدراج. الشرانق على استعداد لإدخال ما يقرب من يوم واحد بعد أجنحة المعرض البقع الداكنة.
- لتخدير الشرانق، ووضعها في الثلاجة (4C) لحوالي 6 ساعة.
- إعداد مساحة العمل الإدراج. وينبغي أن تشمل مساحة العمل ايزوبروبيل، ملاقط حاد، شفرات، و30 G إبرة تحت الجلد. كخيار، لاصقة cyanoacrylate يمكن استخدامها لتعزيز تثبيت القطب.
- تعقيم الإبرة، ملاقط، والأقطاب الكهربائية عن طريق غمس لهم داخل أو المسح مع ايزوبروبيل.
- إزالة خادرة من الثلاجة وتحويلها إلى مساحة العمل.
- تحديد الموقع على القفص الصدري الذي يتوافق مع مجموعة العضلات من الفائدة. التركيز على العمل في هذا المثال هو عضلات ظهري بطني المسؤولة عن حركة upstroke الجناح.
- باستخدام شفرة حادة، تخدش بلطف 1X1 سم 2 مستطيل من خلال طبقة exocutical. باستخدام الملقط، قشر ببطء من هذه القطع.
- (اختياري) استخدام الفراغ لإزالة الشعر من منطقة الجناح المكشوفة من الصدر.
- إدراج ببطء الإبرة حول 5mm في mesothorax حيث نعلق الأجنحة إلى الصدر لخلق نقطتين الإدراج استهداف مجموعة العضلات.
- باستخدام الملقط، وتوجيه اثنين من أقطاب تسجيل في النقطتين الإدراج.
- (اختياري) لتعزيز المتانة الميكانيكية، وتنظيف الشعر حول الأقطابوتنطبق بسخاء لاصقة cyanoacrylate حول كل نقطة الإدراج على الصدر مع قضيب السلك.
- إعداد قفص للظهور مع المواد المناسبة (الخام ومحكم) التي تغطي الجدران والسقف بحيث الحشرة قد تسلق على ظهور. ويمكن استخدام صناديق من الورق المقوى مثقبة أو ورق التغليف.
- إعداد تثبيت عصا جامدة مع حوالي 6 سم طول و 2 مم. النمامون البلاستيك، مسحة القطن، أو أسلاك معدنية يمكن استخدامها لهذه الخطوة.
- الشريحة بعناية هذه العصا من خلال ثقب تحت خرطوم جاحظ.
- إصلاح جانبي العصا على سطح القفص بحيث لا يمكن خادرة لفة حولها. ضع خادرة داخل القفص بحيث يكون مواجها لها mesothorax. قد يسبب حركة واسعة النطاق الأضرار التي لحقت الكهربائي، وفقدان الدملمف، أو تقديم الإدراج عديمة الفائدة.
3. إدخال القطب الأرضي إلى ماندوكا سيكستا
ملاحظة: الأرض (راجعسينعقد) ينبغي إدراج الكهربائي في أجزاء البطن أو البعيدة من القفص الصدري لتجنب إشارة اقتران. ويمكن أن يتم هذا الإدراج سواء خلال مراحل لاحقة من تطور العذراء أو بعد ظهور الحشرات. نافذة للالقطب الأرض يجب أن تكون مستعدة في المرحلة العذراء لاما العذراء أو مرحلة الكبار القطب الأرض الإدراج.
- لمرحلة الإدراج العذراء: بعد تقشير للبشرة mesothoracic حول القطب النشط (راجع الخطوة 2.7)، الصفر المستطيل أخرى من خلال طبقة exocutical (حوالي 0.5x0.5 سم 2) على البطن الظهرية قريبة من الصدر تحت الجلد باستخدام G 30 إبرة. إدراج القطب الأرض في هذا الإطار باستخدام تقنية هو موضح في القسم 2.
- للبالغين مرحلة القطب الأرض الإدراج: مرة واحدة وقد ظهرت الحشرات، وضعه في الثلاجة عند 4 درجة مئوية لمدة 6 إلى 24 ساعة لشل.
الخطوات المتبقية هي نفسها لكلا العذراء والإدراج مرحلة الكبار. - إعداد INSER مساحة العمل نشوئها بما في ذلك ايزوبروبيل، ملاقط حاد، 30 G إبرة تحت الجلد، فورية الغراء اللاصق، وقطعة من السلك لتطبيق الغراء، وcauterizer الحرارية (اختياري)، وعصا الشمع الأسنان (اختياري).
- تحديد مكان وجود نقطة الإدراج حوالي 1-2 سم بعيدا عن أقطاب تسجيل على طول البطن الخلفي.
- إدراج ببطء الإبرة لثقب البطن وتوفير موقع الإدراج.
- باستخدام الملقط إدراج بعناية القطب الأرض في موقع الإدراج والضغط حتى يتم 3-4 ملم عميقة. عقد القطب في المكان واستخدام الأسلاك لتطبيق الغراء حول موقع الإدراج.
- (اختياري) لتعزيز القوة الميكانيكية، استخدم cauterizer الحرارية وجمع (2-3 ملم) حبة صغيرة من الشمع على الحافة. وضع غيض بالقرب من موقع الإدراج وتطبيق الحرارة بحيث الشمع يحيط القطب ويحتفظ به ثابتا في مكانه.
4. إعداد مجلس محول
ontent "> ملاحظة: مطلوب مجلس محول لتوصيل لوحة إلكترود إلى تسجيل headstage اللاسلكية من خلال FFC (شقة الكابلات المرنة) موصل لهذا، لوحة مماثلة لمجلس القطب يحتاج إلى باتباع الخطوات أعد 1،1-1،7 .
- جندى موصل الأولى للتمويل إلى واحدة من نهاية المجلس مستعدا.
- جندى ثلاثة 30 AWG (مقياس الأسلاك الأمريكي) عقف الأسلاك إلى ثلاث منصات على الطرف الآخر.
- جندى ثلاثة موصلات مصغرة لمنصات الثلاثة على متن محول للقراءات الذبذبات كما هو موضح في المرحلة المقبلة.
- جندى على الطرف الآخر من هذه الأسلاك الثلاثة إلى موصل headstage.
- تأمين لوحات الدوائر الالكترونية headstage على رأس الإطار الارتفاع.
5. Prerecording مع راسم (اختياري)
ملاحظة: من أجل تقييم موثوقية الأقطاب ومراقبة إشارة إلى نسبة الضوضاء، ويمكن الحصول على التسجيلات الذبذبات المربوطة قبل نشر wirelنظام تسجيل وفاق سطيف. موصلات أسلاك صغيرة على لوحة محول ينبغي أن تستخدم لهذا الغرض.
- توصيل الذبذبات إلى خارج الخلية العصبية مكبر للصوت تسجيل. تعيين المعلمات مكبر للصوت لتمريرة عالية وقف انتاج المواد الانشطارية تردد من 1 هرتز، وتمرير منخفض وقف انتاج المواد الانشطارية تردد 20 كيلوهرتز، ومكسب من 100.
- ربط كل من موصلات الاسلاك مصغرة الإناث على لوحة محول إلى قنوات الإدخال مكبر للصوت.
- إزالة الحشرات مع مجلس القطب مزروع من القفص عندما يكون في حالة نشطة (خلال وقت الفجر به). وضع قطعة من المناديل الورقية تحت الحشرات من أجل أن تبقى على قبل اتخاذ القياسات.
- باستخدام الملقط، مرر مجلس القطب في مستقبلات الأولى للتمويل على لوحة محول. مراقبة خط الأساس الجهد مسطحة ومنخفضة عند الحشرة يستريح وتوليد مخطط كهربية العضل (EMG) المسامير كما الحشرة جناحيه.
ملاحظة: يرجى الرجوع إلى القسم 6: مراقبة الحشرات طيران مع نظام تسجيل لاسلكية للrepresentatإيف النتائج الذبذبات. - ضبط المعلمات عرض من الذبذبات حسب الحاجة. التقاط البيانات على الذبذبات وحفظ البيانات.
6. مراقبة الحشرات الطيران مع نظام تسجيل اللاسلكية
ملاحظة: منصة الارتفاع الكهرومغناطيسية يمكن أن يبنى لتسجيل إشارات لاسلكية للEMG خلال المربوطة ماندوكا سيكستا الطيران. تتكون منصة الارتفاع من إطار يهدف إلى تحقيق التوازن بين آلية الربط. ويسمح الارتفاع الإطار، وبالتالي فإن حشرة، لياو خلال اختبار من دون أسلاك الربط القيد. يمكن أن يكون الإطار نموذج أولي السريع باستخدام النمذجة ترسب تنصهر (FDM) الجهاز. يحتاج المغناطيس لضمها الى الجزء السفلي من هذا الإطار إلى أن مرفوع من خلال سلسلة من المغناطيس في منصة قاعدة. يتم توصيل الحشرة الى الموصل FFC علقت من أعلى الإطار. يقع هذا المنبر الرفع داخل الساحة LED الذي شيد النقيبز 60 وحات تتألف من مجموعة من المصابيح الفردية 5X7. واستند هذا النظام على الطرق التي أنشئت لتطوير بيئة لالتحفيز البصري من ذباب الفاكهة 15، 16، 17. يتم التحكم في الساحة عن طريق محاكاة متحكم السماح لكلا عقارب الساعة وعكس عقارب الساعة التناوب، وكذلك السيطرة على سرعة دوران.
- إعداد نظام تسجيل اللاسلكية من خلال ربط headstage بموصل لوحة محول على منصة الارتفاع.
- إزالة الحشرات من القفص عندما يكون في حالة نشطة ويفضل أثناء وقت الفجر فيها.
- باستخدام الملقط، بعناية إدراج مجلس القطب في مستقبلات الأولى للتمويل على الإطار الرفع بحيث الحشرة معلق بقوة داخل الإعداد.
- وضع عصا المغناطيسي بالقرب من التبديل المغناطيسي على headstage لتفعيل نقل البيانات لاسلكيا. سوف يأتي الضوء الأزرق على مشيرا إلى أن headstage نشطة.
- إطفاء الأنوار فيغرفة للظلام دامس. مصباح أحمر يمكن استخدامها لإضافة الإضاءة إلى الغرفة. فتح برنامج جمع البيانات القياس عن بعد على جهاز كمبيوتر وتحديد ملف التكوين مسبقة المناسبة إذا قدمت. بدء الحصول على البيانات لبدء إشارات المشاهدة.
- حدد واجهة المستخدم ذات الصلة لرصد إشارات EMG على نظام تسجيل اللاسلكية لضمان الاتصال والقطب تشغيل لاسلكي يمكن الاعتماد عليها.
- بدوره على جميع مكونات الساحة LED: للتنظيم العاصمة امدادات الطاقة ومتحكم. متحكم يمكن ضبط التناوب في الدقيقة الواحدة من نمط ضوء دوري ويمكن أيضا التحكم في اتجاه دوران الضوء.
- التوازن ببطء منصة الارتفاع داخل الساحة. محاذاة الإطار فوق مركز للقاعدة الارتفاع بعناية، وإلا سيتم سحب الإطار بسرعة على الأرض ربما ادى الى اصابة الحشرة.
- بدء نظام تسجيل الفيديو.
- حدد علامة التبويب تسجيل ذات الصلة من البرنامجواجهة. تعيين وقت التسجيل وحفظ الملف الوجهة. اختيار إعدادات إخراج المناسبة لحفظ البيانات. انقر على زر البداية لبدء تسجيل الدورة ضمن البرنامج. وهذا سيوفر ملف البيانات التي يمكن استيرادها إلى بيئات الحوسبة العددية.
- كما تطير في مراقبة الحشرات في الاتجاه الذي يتوافق مع حركة المصابيح. عكس اتجاه المصابيح وتأكيد أن الحشرة عكس الاتجاه. تنفيذ هذا عدة مرات كما تريد.